【摘要】：目的：肝臟缺血再灌注損傷是肝移植不可避免的一個過程，也是一種重要的非免疫學因素，嚴重時可引起移植肝臟失功、其它器官損傷甚至病人死亡。因此，缺血再灌注損傷嚴重影響移植肝臟的存活質(zhì)量，尋找有效的干預措施是肝移植面臨的一項重要課題。 缺血再灌注損傷還可通過上調(diào)移植相關(guān)抗原的表達，加劇移植排斥反應，加速移植物的慢性失功。大量證據(jù)表明MHC Ⅰ類分子相關(guān)抗原(MIC)與移植物排斥密切相關(guān)，但是缺血再灌注損傷能否引起MIC的表達尚無報道。 本文在前期研究基礎(chǔ)上進一步研究益生注射液(Yisheng Injection，YS)抗肝臟缺血再灌注損傷的作用機制以及肝臟缺血再灌注損傷對小鼠MIC(RAE-1、H60)基因表達的影響和益生注射液的干預效果。 方法：采用小鼠部分肝臟熱缺血再灌注損傷模型研究益生注射液的干 四川大學博士學位論文 預機理以及RAE一1、H60基因的表達。 l)C57BL/6小鼠隨機分為5組:假手術(shù)組(Sham)、模型組(I瓜)、YS 小劑量(5m眺g)干預組、YS中劑量(10m酬kg)干預組和YS大劑量 (ZOmg/kg)干預組。缺血前24小時和1小時YS干預組小鼠腹腔注射 分別給予5、10或20mg/kg的YS，，鉗夾肝左葉造成部分肝臟缺血gomin， 再灌注時經(jīng)尾靜脈注射第三次給予同樣劑量的YS，模型組和假手術(shù)組給 予同樣體積的生理鹽水。 小鼠肝臟左葉缺血90min再灌注6h后各實驗組采集血液和肝臟左葉 組織樣本。檢測血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、門冬氨酸氨轉(zhuǎn)移酶 (AST)和乳酸脫氫酶(LDH)的活性作為肝臟損傷的指標，同時用ELISA 檢測血清中TNF一。的含量。檢測肝組織中髓過氧化物酶(MPo)、超氧化 物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量以及肝臟水腫程度。肝臟組織病理 學檢測。RT-PCR和免疫組化檢測肝組織中INF一Q和ICAM一1的表達。 2) BALB/C小鼠隨機分為2組:假手術(shù)組(S ham)和模型組(I瓜)。模 型組小鼠肝臟左葉缺血90min再灌注。假手術(shù)組(s ham)和模型組(I瓜)手 術(shù)后l、2、3、5、7、10、15、20、30天肝臟左葉組織分別取樣。采用 Rr-pCR和real一time pCR檢測RAE一l、H6o基因在各實驗組的表達。 3)BALB/C小鼠隨機分為3組:假手術(shù)組(sham)、模型組(I瓜)和 YS大劑量(20mg/kg)干預組。模型組和YS干預組小鼠肝臟左葉缺血 90min再灌注。缺血前24小時和1小時YS干預組小鼠腹腔注射給予 20mg瓜g的YS，再灌注時經(jīng)尾靜脈注射第三次給予同樣劑量的YS。再 灌注后YS干預組每天給予20m留kg的YS直至再灌注后第7天。模型組 和假手術(shù)組給予同樣體積的生理鹽水。手術(shù)后7天肝臟左葉組織分別取 樣，采用real·time PCR檢測RAE一1、H60基因在各實驗組的表達。 結(jié)果:l)益生注射液干預能有效降低小鼠部分肝臟熱缺血90min再灌 注6h所致的血清ALT、AST、LDH水平升高，降低血清中飛NF一a含量， 四川大學博士學位論文 干預后血管內(nèi)皮、肝竇內(nèi)皮和肝細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)相對正常，血管和膽管周 圍淋巴細胞浸潤減輕。 2)益生注射液干預能有效減輕缺血再灌注所致肝臟過氧化損傷，提 高缺血肝臟中SOD酶活性、降低MDA含量。 3)益生注射液干預能有效降低缺血肝臟中MPO含量，減輕中性粒 細胞的聚集和浸潤，減輕缺血肝臟的水腫程度。 4)益生注射液干預能有效抑制缺血肝臟中TNF一a和ICAM一1分子 在mRNA水平和蛋白質(zhì)水平的高表達。 5)益生注射液(5、10、20mg瓜g)干預肝臟熱缺血再灌注損傷具有 良好的劑量一效應關(guān)系。 6) BALB/C小鼠正常肝臟組織能檢測到RAE一1低表達。小鼠部分 肝臟熱缺血90min再灌注，可造成缺血肝臟中RAE一1 mRNA水平從再灌 注第5天開始顯著升高，巧天達峰值，一直持續(xù)到再灌注后30天，比 對照組升高3一8倍。 7)BALB/C小鼠正常肝臟組織未檢測到H60的表達。肝臟熱缺血 90min再灌注，可造成缺血肝臟中H60 mRNA水平從再灌注第1天開始 顯著升高，第5天達峰值，以后逐漸下降，直到再灌注后10天，比對照 組升高2.5一8.5倍。但從再灌注15天開始到再灌注后30天，缺血肝臟的 H6O mRNA水平與對照組相比無顯著性差異。 8)益生注射液(2 omg/kg)干預可顯著降低缺血肝臟中RAE一1、H60 mRNA水平。干預組缺血肝臟中RAE一1、H60 mRNA水平與I瓜組相比 分別下降70%(P0.01)和76%(P0.01)。 結(jié)論:益生注射液干預能減少肝臟缺血再灌注后氧自由基的產(chǎn)生，減輕 脂質(zhì)過氧化引發(fā)的肝組織損傷;降低中性粒細胞浸潤和肝臟水腫程度; 有效抑制缺血再灌注損傷引起的TNF一a、ICAM一1 mRNA水平上調(diào)，降 低下NF一a和ICAM一1在肝組織中的高表達;具有良好的劑量一效應關(guān)系。 四川大學博士學位論文 小鼠肝臟缺血再灌注損傷可上調(diào)缺血肝臟中RAE一1、H60 mRNA 水平，且二者上升時相不同。益生注射液干預可顯著降低缺血肝臟中 RAE一l、H60 mRNA水平。 關(guān)鍵詞:肝臟缺血再灌注損傷，益生注射液，RAE一1基因，H60基因， 熒光定量PCR
【圖文】：

ICAM一1mRNA的表達強弱。與Sham組相比，I瓜可導致ICAM一1mRNA表達明顯上調(diào)，5、10和20mg/kgYS干預能程度不同地抑制ICAM一1mRNA的表達(圖1一14A)。各組間電泳條帶強弱的比較顯示隨著劑量的增加，YS能顯著抑制ICAM一1mRNA的表達(圖1一14B)。

為了進一步檢測缺血再灌注損傷后RAE一1基因表達量的變化及其規(guī)律，采用real一timePCR檢測sham組和I瓜組小鼠肝臟中的RAE一1mRNA量相對于正常肝臟組織的變化倍數(shù)。結(jié)果見圖2一2，Sham組小鼠肝臟中的RAE一1mRNA量與正常肝臟組織接近;而I瓜組小鼠肝臟中的RAE一1mRNA量相對于正常肝臟組織及sham組有較大差異，再灌注1一3天缺血肝臟中的RAE一1mRNA量與sham組相比無顯著差異，但從再灌注5天開始缺血肝臟的RAE一1mRNA水平相對于sham組顯著升高，15天達峰值，一直持續(xù)到再灌注后30天，與對照組比較升高3一8倍。此結(jié)果所示的RAE一1mRNA變化規(guī)律與以上RT-PCR結(jié)果一致。
【學位授予單位】：四川大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R575

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 楊華蓉,陳嘉鈺,蔡紹暉,李幼平,唐瓊,劉于賓;YMB注射液對大鼠血液流變學的影響[J];華西醫(yī)科大學學報;2000年02期

2 李勝富,蔣紅梅,李幼平,吳大蓉,張立,張t

本文編號：2648973