【摘要】：經(jīng)過多年實驗研究、臨床研究、反復篩選、不斷優(yōu)化,本研究采用葉下珠、黃芪、三七、甘草等數(shù)種中藥組成了葉下珠復方,并擬將其開發(fā)為新一代的抗乙肝病毒的新藥。 在進行葉下珠復方的臨床研究前,我們完成體外抗乙肝病毒(HBV),對HBV轉(zhuǎn)基因小鼠免疫病理模型的干預作用的實驗研究,驗證了其實驗治療的有效性。 在體外抗HBV的研究中,我們選擇了2.2.15細胞作為體外模型,HBsAg、HBeAg作為藥物效果的篩選靶標,通過MTT法測定藥物的細胞毒性濃度,并相應計算出治療指數(shù)來評價藥物療效。結(jié)果顯示,葉下珠復方在2.2.15細胞中對HBsAg分泌抑制的治療指數(shù)為8.4.因此,葉下珠復方在體外能高效、低毒的抑制HBV的分泌HbsAg和HBeAg。 葉下珠復方中、大劑量及ADV在Tg鼠血清HBsAg陰轉(zhuǎn)率分別在給藥后第10天、第21天、停藥后3天進行比較,差異均無顯著性意義,ADV具有減少HBV Tg鼠血清HBV-DNA載量的作用。但停藥3天有反跳。葉下珠復方大、中劑量組均有降低HBV Tg鼠血清HBV-DNA載量的作用,尤其以大劑量組效果明顯,雖然沒有減少到ADV組水平,但治療前后差異有顯著性意義,且在停藥后無明顯反跳現(xiàn)象,說明葉下珠復方作用持久、平穩(wěn)。模型組Tg鼠肝臟病理改變類似于臨床輕度肝炎表現(xiàn),隨著葉下珠復方劑量的增大,炎癥得以緩解。大劑量組的肝板排列整齊,無纖維組織增生,但中央靜脈周圍輕度圍管浸潤。葉下珠復方中、大劑量和ADV均能減少肝組織中HbcAg表達,尤其大劑量組明顯。葉下珠復方能夠上調(diào)CD3+、CD4+、CD4+/CD8+,下調(diào)CD8+T細胞比值水平,具有正向T淋巴細胞免疫調(diào)節(jié)作用,尤其以大劑量組效果明顯。ADV也具有提高HBV轉(zhuǎn)基因小鼠細胞免疫功能(如CD3+百分比),但作用相對葉下珠復方弱。運用大、中、小劑量葉下珠復方和ADV均能提高HBV轉(zhuǎn)基因小鼠血清IL-2、TNF-γ含量,與模型組相比有顯著的差異。且運用大、中劑量葉下珠復方治療后IL-2、TNF-Y水平已高于正常對照組。葉下珠中劑量組CD3+、TNF-γ與給藥前后HBV-DNA載量的減少呈顯著正相關(guān),葉下珠復方大劑量組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的變化與給藥前后HBV-DNA減少呈顯著正相關(guān)。 葉下珠復方聯(lián)合阿德福韋酯(ADV)治療拉米夫定耐藥肝炎(LRHB)52周,ALT復常率、HBV-DNA陰轉(zhuǎn)率、HBeAg陰轉(zhuǎn)率均顯著優(yōu)于單純使用ADV組,且差異顯著(P0.05或P0.01)。治療52周,葉下珠復方聯(lián)用ADV完全應答率(CR)為25%,顯著高于ADV組(10%),X2=9.07,P0.01。葉下珠復方聯(lián)合ADV組治療52周,患者CD4+百分比和NK細胞均增加,CD3+百分比增加,而兩組CD8+百分比減少,并與HBV-DNA載量的減少呈顯著正相關(guān)。HBV特異型CD8+T細胞用于破壞感染肝細胞,能清除肝內(nèi)HBV、從而減少細胞內(nèi)HBV數(shù)目,說明葉下珠復方聯(lián)合ADV能更好改善LRHB患者T淋巴細胞亞群的異常及提高NK細胞的活性,提高抗病毒的療效。同時能調(diào)節(jié)免疫功能,使免疫低下或免疫紊亂的調(diào)整到正常,顯示出較好的抗HBV效果。
【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R512.62

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本文編號：2647408