發(fā)布時(shí)間：2020-04-25 12:49

【摘要】： 目的 本研究擬用化學(xué)交聯(lián)方法構(gòu)建一種人-人抗體嵌合物作為抗-甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)IgM抗體檢測質(zhì)控品,并探討其在臨床應(yīng)用價(jià)值。 方法 一、嵌合抗體的構(gòu)建 通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)篩選出抗-HAV IgG陽性效價(jià)高的血清(抗HIV-1、HBsAg陰性,抗-HEV、抗-HCV、梅毒抗體陰性),再以蛋白A柱純化出含高滴度抗-HAV IgG的人總IgG,以分子篩色譜純化出健康人IgM抗體。選擇1-乙基-3[3-二甲基氨基丙基]碳二亞胺作為化學(xué)交聯(lián)劑將兩者交聯(lián),得到的嵌合人-人IgG、IgM抗體既能和甲型肝炎病毒抗原(Hepatitis A Virus Antigen,HAV-Ag)特異性結(jié)合,又能與檢測體系中的抗μ鏈抗體特異結(jié)合。根據(jù)嵌合抗體的抗-HAVIgM活性來確定交聯(lián)反應(yīng)的最佳反應(yīng)條件,并對該嵌合抗體的干擾反應(yīng)、交叉反應(yīng)進(jìn)行研究,同時(shí)以衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心的抗-HAV IgM質(zhì)控品作為對照研究該嵌合抗體的適用性。 二、嵌合抗體作為質(zhì)控物穩(wěn)定性及通用性研究 對本嵌合抗體的穩(wěn)定性進(jìn)行研究,對不同稀釋保存液(包括BSA、組氨酸、山梨醇等添加劑組分及濃度)進(jìn)行篩選,尋找使嵌合抗體穩(wěn)定保存的條件。穩(wěn)定性的保存條件:將上述1:1 000倍稀釋后及未稀釋的嵌合抗體質(zhì)控物置于4℃、—20℃、室溫、37℃、及—70℃/室溫反復(fù)凍融3次的條件下保存不同時(shí)間觀察其穩(wěn)定性。分別采用萬泰、新創(chuàng)及雅培商品試劑盒對本嵌合抗體進(jìn)行檢測,考察其通用性。 結(jié)果 一、嵌合抗體的構(gòu)建 本研究的最佳交聯(lián)反應(yīng)條件為IgG與IgM質(zhì)量比5:1(5mg IgG/1mg IgM),每mg IgM反應(yīng)體系中加入10mg交聯(lián)劑,室溫反應(yīng)6～18h。交聯(lián)后得到了穩(wěn)定的嵌合抗體產(chǎn)物,且抗-HAV IgM檢測滴度達(dá)到1:20 000。將該產(chǎn)物1:1 000倍稀釋后,檢測值仍與衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心發(fā)放的抗-HAV IgM質(zhì)控品相當(dāng),能夠作為抗-HAV IgM檢測的陽性質(zhì)控。干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,作為反應(yīng)物的IgG、IgM及交聯(lián)劑不影響嵌合抗體的陽性檢測結(jié)果,且該嵌合抗體在抗-HBc IgM、抗-HEV IgM檢測中不存在交叉反應(yīng)。 二、嵌合抗體質(zhì)控物穩(wěn)定性研究及通用性研究 本嵌合抗體在4℃條件下能穩(wěn)定保存至少3個(gè)月,經(jīng)過稀釋保存液即含1%BSA、10mmol/L組氨酸的PBS溶液1000倍稀釋后,于4℃及-20℃條件下可以穩(wěn)定保存至少4個(gè)月。本嵌合抗體采用以上3個(gè)廠家的商品試劑盒均能檢出陽性結(jié)果,具有一定的通用性。 結(jié)論 通過化學(xué)交聯(lián)的方法成功構(gòu)建了人-人嵌合抗體作為抗-HAV IgM檢測質(zhì)控物。該質(zhì)控品具有良好的穩(wěn)定性和通用性。 根據(jù)已經(jīng)建立的方法,可以構(gòu)建一系列用于其他病毒特異IgM抗體酶聯(lián)免疫檢測的質(zhì)控品。
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R512.61;R446.6

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 鄭徽;盧永;王富珍;崔富強(qiáng);;中國2004～2006年甲型病毒性肝炎疫情分析[J];中國計(jì)劃免疫;2007年04期

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本文編號(hào)：2640269