【摘要】：目的： 世界衛(wèi)生組織報道全球約20億人感染過HBV,慢性患者可能發(fā)展為肝纖維化、肝硬化或肝細(xì)胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)；我國慢性乙肝導(dǎo)致的肝纖維化較為多見。 及時準(zhǔn)確判斷肝纖維化發(fā)展程度,可為病情診斷和臨床治療提供重要幫助。目前,肝臟穿刺活檢病理檢查仍是診斷慢性肝病肝纖維化、肝硬化的金標(biāo)準(zhǔn),但由于其具有創(chuàng)傷性,患者易產(chǎn)生不適感及發(fā)生潛在并發(fā)癥,更安全便捷的檢測方法有待進(jìn)一步研究。 隨著蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的發(fā)展,該學(xué)科在發(fā)現(xiàn)疾病特異生物標(biāo)志物的應(yīng)用中顯現(xiàn)出獨特的優(yōu)勢；而PBMC是機體重要的免疫細(xì)胞,與很多疾病的發(fā)生發(fā)展過程相關(guān)。因此,我們設(shè)計通過蛋白質(zhì)組學(xué)路線來研究肝纖維化不同分期患者PBMC蛋白質(zhì)表達(dá)差異,來發(fā)現(xiàn)PBMC中肝纖維化發(fā)展可能的生物標(biāo)志物,為肝纖維化的診斷、治療及預(yù)后探索新的研究方向。方法: 收集2009年3月至2011年2月由復(fù)旦附屬上海市公共衛(wèi)生臨床中心肝炎科就診的慢性乙型肝炎肝纖維化病人,按肝活檢診斷分為S1期、S4期各24例,共48例,患者年齡34-63歲,平均46.54±8.15歲,各組之間年齡(P=-0.780)無統(tǒng)計學(xué)差異； 用淋巴細(xì)胞分離液來分離PBMC,提取全細(xì)胞蛋白質(zhì),采用Bradford法進(jìn)行蛋白質(zhì)濃度測定; 蛋白質(zhì)的二維凝膠電泳對蛋白質(zhì)進(jìn)行分離；通過ImageMaster2D Platinum6.0軟件對所得膠塊圖像進(jìn)行分析。 所得差異蛋白質(zhì)點經(jīng)酶解后,通過納升級反向液相色譜串聯(lián)電噴霧離子阱質(zhì)譜進(jìn)行鑒定。對比數(shù)據(jù)庫,明確鑒定所得蛋白質(zhì)的信息,查閱文獻(xiàn)了解差異蛋白質(zhì)的生物學(xué)意義。 結(jié)果： 蛋白質(zhì)點得到較好分離,S1組和S4組雙向電泳圖中分別檢測到1057±134,1052±130個蛋白質(zhì)點。S1組和S4組的平均匹配點數(shù)和匹配率分別為727±161(61.5%)和716±139(58.1%)。 獲得12個差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點,在肝纖維化S4期中,8個蛋白質(zhì)點上調(diào),4個蛋白質(zhì)點下調(diào)；12個差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點均得到準(zhǔn)確鑒定,這些差異蛋白質(zhì)包括與細(xì)胞運動、與細(xì)胞粘附以及細(xì)胞轉(zhuǎn)錄等相關(guān)的蛋白質(zhì)。 查閱文獻(xiàn),發(fā)現(xiàn)PBMC中差異蛋白質(zhì)膜組織伸展刺突蛋白(Moesin)、膠轉(zhuǎn)蛋白(Transgelin-2)、熱休克蛋白(HSP70)等蛋白質(zhì)可能與肝纖維化分期相關(guān),可以作為肝纖維化發(fā)生機制的一個探索方向。 結(jié)論： 我們采用蛋白質(zhì)組技術(shù)從PBMC中篩選和鑒定一些差異蛋白質(zhì),這些蛋白質(zhì)可能與肝纖維化的發(fā)展相關(guān),它們可能對肝纖維化進(jìn)展的研究有意義。蛋白質(zhì)組學(xué)路線來研究PBMC可以用于尋找和發(fā)現(xiàn)肝纖維化分期相關(guān)生物標(biāo)志物。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 李林,sunm.shcnc.ac.cn;蛋白質(zhì)組學(xué)的進(jìn)展[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2000年03期

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本文編號：2639623