【摘要】：腸道發(fā)生炎癥時,黏膜單核/巨噬細胞釋放自由基,改變粘液層氧化還原狀態(tài)和菌群。有研究認為,乳桿菌在改善腸道氧化還原狀態(tài)和緩解腸道炎癥中有重要作用,但乳桿菌的抗氧化活性與體內(nèi)抗炎活性間的關系尚不清楚。本論文研究乳桿菌抗氧化活性在預防腸道炎癥和氧化應激中的作用,為活性乳桿菌的篩選及應用提供理論依據(jù)。用模擬胃-腸液、pH3.5和pH4.0緩沖液處理9株乳桿菌,測定無細胞提取物清除DPPH、OH·和O_2~-·自由基能力。用MTT法測定乳桿菌在過氧化氫或OH·存在環(huán)境的存活率。選擇5株體外抗氧化活性不同的乳桿菌進行體內(nèi)試驗。小鼠分成7組,正常、模型(DSS)組飲用純凈水,3-7組分別飲用菌懸液:L. plantarum Fn008、L. casei Fn012、L. acidophilus Fn022、L. sakei Fn034、L. acidophilus Fn037,7天后,正常組繼續(xù)飲用純凈水,DSS組及乳桿菌處理組每日飲用3%DSS 7天,觀察體重變化、糞便形狀、腸道出血(隱血和明顯出血),測定結(jié)腸內(nèi)容物自由基(ROS)含量和總抗氧化能力(T-AOC)、結(jié)腸黏膜總抗氧化能力(T-AOC)、髓過氧化物酶活力(MPO)、丙二醛含量(MDA)、還原型谷胱甘肽含量(GSH),分析腸道菌群變化,測定腸黏膜屏障指標包括血清木糖含量、肝臟、腸系膜淋巴結(jié)和派伊爾結(jié)內(nèi)毒素含量及上皮緊密連接相關基因的表達。 體外實驗表明,乳桿菌對不同氧化應激前處理表現(xiàn)出不同的抗氧化特性。人工胃液胰液、pH3.5、pH4處理后菌株對DPPH自由基的清除能力低于正常處理菌株;對OH·的清除能力高于正常處理菌株;人工胃液胰液處理后菌株對O_2~-·的清除能力高于正常處理菌株,pH3.5處理后Fn008、Fn012、Fn022清除O_2~-·能力高于正常處理菌株,pH4處理后Fn012、Fn022對O_2~-·的清除能力高于正常處理菌株。9株乳桿菌中Fn008、Fn037和LGG對氧自由基的抵抗能力最強,Fn032、Fn033、Fn034、Fn036次之、Fn012和Fn022最弱。 體內(nèi)實驗表明,DSS導致小鼠腸炎DAI顯著高于正常組,結(jié)腸石蠟切片DSS組出現(xiàn)明顯的白細胞浸潤和潰瘍,說明DSS成功誘導了小鼠的結(jié)腸炎。DSS組可導致小鼠氧化應激,提高結(jié)腸內(nèi)容物的自由基和結(jié)腸組織的MDA、MPO水平,降低結(jié)腸總抗氧化能力和還原型谷胱甘肽水平,腸道乳桿菌數(shù)顯著下降,腸球菌和大腸桿菌數(shù)顯著上升;血清木糖含量顯著高于正常組;腸壁通透性增加導致內(nèi)毒素易位,腸上皮細胞緊密連接相關基因ZO-1、ZO-2、Occludin、Claudin1表達顯著下調(diào),體外培養(yǎng)回腸巨噬細胞上清中的IL-10顯著低于正常組,TNF-α和IL-8顯著高于正常組;五株乳桿菌干預組的DAI均顯著低于DSS組,其中Fn008和Fn037能顯著降低結(jié)腸內(nèi)容物的自由基水平和結(jié)腸組織的MDA水平,提高結(jié)腸抗氧化能力,腸道乳桿菌數(shù)顯著上升,腸球菌和大腸桿菌數(shù)顯著下降,血清木糖含量與正常組無顯著差異,抑制內(nèi)毒素易位,腸上皮細胞緊密連接相關基因ZO-1、ZO-2、Occludin、Claudin1表達顯著上調(diào),體外培養(yǎng)回腸巨噬細胞上清中的IL-10顯著高于DSS組,TNF-α和IL-8顯著低于DSS組,Fn022和Fn034的干預能力居中,Fn012的干預能力最弱。 乳桿菌耐受H2O2能力與預防結(jié)腸炎活性顯著相關(r=0.898,P=0.038),耐受H2O2和OH·的能力與黏膜通透性顯著相關(r=-0.955,P=0.011;r=-0.910, P=0.018),與結(jié)腸糞腸球菌數(shù)量顯著相關(r=-0.92,P=0.025;r=-0.902,P=0.0361),耐受H_2O_2能力與腸腔ROS、黏膜MPO和MDA顯著相關(r=-0.927,P0.0001;r=-0.722,P =0.000;r=-0.903,P=0.000) DSS誘導可引起結(jié)腸食糜自由基升高、總抗氧化能力降低,導致菌群改變,大腸桿菌和糞腸球菌增殖,乳桿菌降低。乳桿菌耐受H_2O_2能力與預防結(jié)腸炎活性、降低腸腔氧自由基、抑制黏膜通透性升高有顯著相關。強耐受氧化應激菌株Fn008和Fn037能顯著抑制結(jié)腸氧化應激、黏膜屏障損傷,緩解DSS誘導的結(jié)腸炎。
【圖文】：

圖 3-1 不同前處理對乳桿菌清除 DPPH 自由基能力的影響Fig.3-1 Effects on the scavenging rates of different pretreatment lactobacillus to DPPH(%同字母表示菌株間差異顯著，P＜0.05，，正常處理：斜體字母；人工胃液胰液處理母；pH3.5 乙酸-乙酸鈉緩沖液處理：加粗字母；pH4 乙酸-乙酸鈉緩沖液處理：斜母。 同一菌株不同處理以*表示，*表示 P＜0.05，**表示 P＜0.01同前處理對乳桿菌清除 OH·自由基能力的影響

圖 3-1 不同前處理對乳桿菌清除 DPPH 自由基能力的影響Fig.3-1 Effects on the scavenging rates of different pretreatment lactobacillus to DPPH(%同字母表示菌株間差異顯著，P＜0.05，正常處理：斜體字母；人工胃液胰液處理母；pH3.5 乙酸-乙酸鈉緩沖液處理：加粗字母；pH4 乙酸-乙酸鈉緩沖液處理：斜母。 同一菌株不同處理以*表示，*表示 P＜0.05，**表示 P＜0.01同前處理對乳桿菌清除 OH·自由基能力的影響
【學位授予單位】：江南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R151;R574

【參考文獻】

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本文編號：2635482