【摘要】：研究背景與目的:干細(xì)胞(Stem cell)由于具備無限的增殖和分化潛能,近幾年逐步被用于臨床轉(zhuǎn)化研究當(dāng)中。人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells,uMSC)由于具有容易獲取、免疫原性低、增殖能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),成為了目前干細(xì)胞研究的焦點(diǎn)~([1])。而uMSC分泌的外泌體也自然成為了我們研究的核心之一。外泌體(Exosome)是細(xì)胞分泌的一種小囊泡,具有脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu),直徑一般在30-150nm之間。從剛開始被發(fā)現(xiàn)到現(xiàn)在,外泌體的功能逐步引發(fā)人們的關(guān)注。有很多研究報(bào)道,外泌體可以裝載一些生物信號分子,參與細(xì)胞間通訊~([2])。但大部分有關(guān)于外泌體的研究,研究焦點(diǎn)多集中在lncRNA、microRNA等小分子物質(zhì)上,而對其所含的蛋白質(zhì)關(guān)注較少~([3-5])。在真核生物的蛋白質(zhì)中,超過20%都是經(jīng)過糖基化修飾的糖蛋白(Glycoproteins)~([6])。它們通常會參與很多生物學(xué)過程,發(fā)揮很多作用,如細(xì)胞與細(xì)胞的識別、信號傳導(dǎo)和細(xì)胞粘附等等。糖鏈結(jié)構(gòu)的錯綜復(fù)雜導(dǎo)致了糖蛋白結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性與多變性。與DNA轉(zhuǎn)錄不同,蛋白質(zhì)的糖基化修飾沒有相應(yīng)的模版,而是依靠酶促反應(yīng)將單糖或多聚糖共價(jià)連接到蛋白質(zhì)骨架上的,這便賦予了糖蛋白的多樣性和異質(zhì)性~([7,8])。并且糖蛋白的分類也和糖鏈有關(guān),依據(jù)糖鏈與蛋白連接位點(diǎn)的不同,分為N糖基化蛋白、O糖基化蛋白和C糖糖基化蛋白等。位于細(xì)胞表面的糖蛋白能促進(jìn)細(xì)胞之間的相互識別、信號的傳遞和細(xì)胞與細(xì)胞的粘附~([9,10])。而外泌體作為細(xì)胞間的通訊方式,同樣也會涉及細(xì)胞與外泌體之間的相互識別,并且,有研究報(bào)道外泌體能夠治療一些疾病~([11]),我們課題組前期研究也發(fā)現(xiàn),在小鼠四氯化碳肝損傷模型中,uMSC外泌體能夠降低血清I型膠原和透明質(zhì)酸等肝損傷指標(biāo),促進(jìn)肝損傷修復(fù),但其機(jī)制仍不是特別清楚,那么外泌體中的糖蛋白在外泌體通訊中發(fā)揮了怎樣的作用,這些糖蛋白對于外泌體治療疾病又有怎樣的作用,我們是否能過調(diào)節(jié)外泌體表面的糖基化修飾來使外泌體變得更穩(wěn)定并改善外泌體與靶細(xì)胞的相互作,從而使外泌體治療疾病的效果得到進(jìn)一步提升,這些都值得我們研究。肝纖維化(Hepatic fibrosis)是慢性肝臟病發(fā)展成為肝硬化的一個過渡階段~([12])。其病理機(jī)制主要包含兩個方面:正常肝細(xì)胞的凋亡和肝星狀細(xì)胞的激活。近些年對于肝纖維化的治療,仍沒有特別有效的方法,常規(guī)的藥物治療如腎素-血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶抑制藥、TGF相關(guān)因子拮抗藥和干擾素(interferon,INF)等,均只能起到緩解病情進(jìn)展的作用,而最有效的治療方法--肝移植,卻面臨供體來源匱乏的難題。根據(jù)研究報(bào)道,外泌體可以用于臨床治療,促進(jìn)一些疾病的康復(fù),糖基化修飾可以用于加強(qiáng)藥物療效~([13]),那么uMSC外泌體中的糖基化修飾是否能促進(jìn)外泌體治療疾病,對糖基化修飾進(jìn)行改造后的uMSC外泌體對肝纖維化治療是否也能起作用。這是我們研究的重點(diǎn)。外泌體的臨床應(yīng)用還可以通過基因工程技術(shù)進(jìn)一步改進(jìn)和優(yōu)化。CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)可以容易精準(zhǔn)的對多種生物進(jìn)行基因修改,有廣闊的應(yīng)用空間,在外泌體未來臨床應(yīng)用中也可能有重要作用。CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)即成簇規(guī)律間隔短回文重復(fù),是細(xì)菌基因組中的一段DNA序列,Cas(CRISPR associated)即CRISPR相關(guān)基因,該基因有多種類型,Cas9只是其中一種~([14])。CRISPR-Cas9系統(tǒng)是細(xì)菌體內(nèi)的一種獲得性免疫系統(tǒng),專門應(yīng)對外源入侵的DNA并將其切斷。后來被人們用于精準(zhǔn)的基因編輯,其效果優(yōu)于傳統(tǒng)的基因編輯方法。我們的前期研究,利用CRISPR-Cas9技術(shù)敲除細(xì)胞內(nèi)糖基轉(zhuǎn)移酶的過程中,發(fā)現(xiàn)外源導(dǎo)入Cas9的細(xì)胞其增殖速度會變快。其機(jī)制仍不清楚。通常情況下,外源導(dǎo)入的Cas9載體會在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄成mRNA,那么,Cas9的mRNA作為外源的核酸物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞,會不會影響細(xì)胞內(nèi)環(huán)境,從而影響該技術(shù)的安全應(yīng)用,就成為我們提出并關(guān)注的核心問題。ceRNA機(jī)制在細(xì)胞的生物循環(huán)代謝中普遍存在,該機(jī)制機(jī)制認(rèn)為,microRNA可以通過與信使RNA結(jié)合引起基因表達(dá)降低,而ceRNA可以通過microRNA上的應(yīng)答元件(microRNA response elements,MREs)反過來競爭性結(jié)合microRNA,導(dǎo)致基因表達(dá)增加~([15])。有文獻(xiàn)報(bào)道,mRNA因其表達(dá)量較高,也可以在細(xì)胞內(nèi)充當(dāng)ceRNA的角色,調(diào)控基因的表達(dá)~([16])。因此,Cas9的mRNA也可能會與細(xì)胞中某些重要的microRNA產(chǎn)生相互作用,影響細(xì)胞內(nèi)整個RNA相互作用網(wǎng)絡(luò),從而影響到細(xì)胞的生物學(xué)行為,甚至對Cas9應(yīng)用的安全性產(chǎn)生隱患。利用優(yōu)化后CRISPR-Cas9技術(shù)對細(xì)胞進(jìn)行基因編輯,可能更有利于其分泌的外泌體發(fā)揮促進(jìn)肝纖維化修復(fù)的作用,同時(shí)提高外泌體應(yīng)用的安全性。本課題的目的在于研究uMSC外泌體糖基化對肝纖維化修復(fù)作用的影響,探索糖基化修飾外泌體治療肝纖維化的作用及其機(jī)制。應(yīng)用CRISPR-Cas9技術(shù)的同時(shí),從ceRNA機(jī)制角度出發(fā),提出對該技術(shù)安全性方面的思考,并且找到優(yōu)化Cas9的方法。為外泌體和CRISPR-Cas9技術(shù)的臨床轉(zhuǎn)化應(yīng)用奠定一定基礎(chǔ)。也為外泌體的優(yōu)化和安全應(yīng)用提供了一定理論依據(jù)。第一部分uMSC外泌體治療肝纖維化的糖基化修飾相關(guān)機(jī)制研究方法:1.通過超速離心方法收集人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(uMSC)外泌體,人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bMSC),人肝癌細(xì)胞(HepG2),和人胚腎細(xì)胞(293T)四種細(xì)胞的外泌體,然后通過Western blot實(shí)驗(yàn)、qNano檢測和透射電鏡檢測三種檢測方法確定我們提取的外泌體是否合格,能否能夠用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。2.在肝損傷的細(xì)胞模型中,檢測uMSC外泌體對肝損傷有一定修復(fù)作用。用雙氧水誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡,再加入外泌體,通過凋亡試劑盒和流式細(xì)胞儀檢測,確定外泌體是否能抑制細(xì)胞的凋亡。此外,通過外泌體處理細(xì)胞,與肝細(xì)胞的共培養(yǎng),然后Edu檢測細(xì)胞增殖。用TGF-β1使肝星狀細(xì)胞激活,同時(shí)加入外泌體共培養(yǎng),qPCR和Western blot檢測肝星狀細(xì)胞α-SMA的表達(dá)情況,確定外泌體對星狀細(xì)胞活化的影響。3.通過CM-Dil對外泌體染色,確定外泌體發(fā)揮作用時(shí)在細(xì)胞內(nèi)的定位。同時(shí)對4種來源于不同細(xì)胞上清的外泌體進(jìn)行凝集素芯片檢測,通過對比發(fā)現(xiàn)差異豐度的糖結(jié)構(gòu)。再通過凝集素印跡進(jìn)一步證明芯片檢測的結(jié)果可用準(zhǔn)確可靠。最后,通過qPCR檢測4種細(xì)胞中催化形成特異性糖結(jié)構(gòu)的糖基轉(zhuǎn)移酶其表達(dá)水平的差異。4.通過外源唾液酸酶的作用切除外泌體中糖蛋白特異性的糖結(jié)構(gòu),凝集素印跡實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證是否糖苷酶成功切除了外泌體的糖結(jié)構(gòu)。然后流式檢測凋亡和qPCR實(shí)驗(yàn),比較糖結(jié)構(gòu)切除和未切的外泌體,兩者對肝細(xì)胞凋亡和肝星狀細(xì)胞活化的影響。5.通過CRISPR/Cas9技術(shù)在基因?qū)用嫒コ禺愋缘奶腔D(zhuǎn)移酶,研究其催化產(chǎn)生的特異性的糖結(jié)構(gòu)對外泌體功能的影響。構(gòu)建了針對α-2,6-唾液酸糖基轉(zhuǎn)移酶的gRNA質(zhì)粒,并和Cas9載體共同轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,細(xì)胞基因組PCR驗(yàn)證是否成功切斷。結(jié)果:1.Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明我們超離提取的外泌體能表達(dá)特異標(biāo)志CD63和CD9。另外,qNano納米生物顆粒分析儀的結(jié)果表明我們提取的外泌體粒徑分布為118.3±37.8nm,濃度為9.67x10~100 particles/ml。最后,透射電鏡的結(jié)果觀察到外泌體呈類圓形,大小約50-100nm之間。以上結(jié)果說明我們提取的外泌體質(zhì)量合格。2.首先,從流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡和細(xì)胞ROS的結(jié)果可以看出,雙氧水能成功誘導(dǎo)人正常肝細(xì)胞(L02和WRL68)的凋亡和ROS水平的升高。而加外泌體處理后,細(xì)胞的凋亡減少。Edu檢測結(jié)果證明,外泌體對細(xì)胞的增殖有促進(jìn)作用。Western blot和qPCR的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),外泌體對于TGF-β1引起的LX2激活有抑制作用,并且降低α-SMA表達(dá)。3.免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果,觀察到uMSC分泌的外泌體能夠進(jìn)入肝細(xì)胞內(nèi)部。凝集素芯片的結(jié)果發(fā)現(xiàn),uMSC外泌體SNA和ConA的結(jié)合率顯著高于對照組。凝集素印跡的結(jié)果與凝集素芯片檢測的結(jié)果基本相同。而qPCR的結(jié)果發(fā)現(xiàn)8種催化產(chǎn)生α-2,6-唾液酸糖結(jié)構(gòu)的酶中,ST6Gal-2的表達(dá)在uMSC中最高。4.酶切后的外泌體,通過凝集素印跡的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,可以確定唾液酸酶能夠成功切除α-2,6-唾液酸糖結(jié)構(gòu)。而切除了該糖結(jié)構(gòu)的外泌體,通過細(xì)胞凋亡檢測和qPCR的結(jié)果發(fā)現(xiàn),外泌體抑制肝細(xì)胞凋亡及星狀細(xì)胞活化的效果減弱。5.利用實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有載體,成功構(gòu)建了針對人ST6Gal-2基因2號外顯子的gRNA質(zhì)粒。在細(xì)胞中轉(zhuǎn)染了Cas9和gRNA質(zhì)粒后,細(xì)胞基因組抽提后PCR結(jié)果證明,成功切斷ST6Gal-2基因。結(jié)論:通過實(shí)驗(yàn)可以看出,uMSC外泌體對肝纖維化的恢復(fù)有促進(jìn)作用,其既能抑制肝細(xì)胞的凋亡,還能促進(jìn)肝細(xì)胞增殖同時(shí)抑制肝星狀細(xì)胞的活化。通過凝集素芯片檢測發(fā)現(xiàn),外泌體治療肝纖維化其機(jī)制可能是通過所含有的糖蛋白發(fā)揮作用。而外泌體的功能可能與糖蛋白中的α-2,6-唾液酸關(guān)系密切。我們也許能通過調(diào)整改變糖基化修飾,提高外泌體的臨床治療效果。第二部分CRISPR/Cas9技術(shù)安全性研究及改良方法探索在第一部分中,我們利用CRISPR/Cas9技術(shù)敲除糖苷轉(zhuǎn)移酶時(shí),發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染了Cas9的細(xì)胞增殖會加快,這提示我們,對于外泌體臨床應(yīng)用和基因編輯技術(shù)的安全性需要進(jìn)一步探索和優(yōu)化。方法:1.通過Miranda軟件預(yù)測Cas9 mRNA是否存在與microRNA的相互作用的可能。然后通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染,將miRNA轉(zhuǎn)入穩(wěn)定表達(dá)Cas9蛋白的細(xì)胞系HEK293-Cas9中,進(jìn)一步通過qPCR和Western blot檢測miRNA對Cas9表達(dá)的影響。另一方面,通過生物信息學(xué)分析,了解掌握轉(zhuǎn)染Cas9后miRNA下游基因的富集情況。在不同腫瘤細(xì)胞系(Du145、U251、SH-SY5Y)中轉(zhuǎn)染Cas9病毒,通過qPCR和Western檢測miRNA下游基因的表達(dá)變化情況。2.基于上一步的預(yù)測結(jié)果,發(fā)現(xiàn)Cas9 mRNA可能與MicroRNA-let7結(jié)合,而let7屬于一類抑癌的miRNA。因此,我們在腫瘤細(xì)胞系Du145轉(zhuǎn)染Cas9慢病毒,通過CCK8實(shí)驗(yàn),Ki-67細(xì)胞免疫熒光檢測和PI染色細(xì)胞周期檢測,觀察外源導(dǎo)入的Cas9對腫瘤細(xì)胞增殖的影響。進(jìn)一步,通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn),在裸鼠皮下荷瘤,比較轉(zhuǎn)染Cas9的腫瘤細(xì)胞與對照組細(xì)胞成瘤能力有無差別。3.同樣,我們在正常細(xì)胞中也轉(zhuǎn)染Cas9載體,通過qPCR和Western blot檢測let7下游基因表達(dá)變化。Cas9對細(xì)胞增殖的影響則通過Edu和克隆形成實(shí)驗(yàn)來檢測。此外,我們將bMSC轉(zhuǎn)染Cas9的細(xì)胞進(jìn)行高通量轉(zhuǎn)錄組測序,通過GSEA分析和GO分析,進(jìn)行下游機(jī)制研究。最后,我們還利用Cas9轉(zhuǎn)基因小鼠,通過其組織蛋白的Western blot實(shí)驗(yàn)和組織切片的免疫組化實(shí)驗(yàn),分析let7下游靶基因表達(dá)變化。4.通過構(gòu)建Cas9 mRNA的同義突變體Cas9-mut,對可能存在的ceRNA機(jī)制進(jìn)行驗(yàn)證。在癌細(xì)胞中轉(zhuǎn)染Cas9、Cas9-mut和對照載體,通過細(xì)胞克隆形成、CCK8和細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn),檢測Cas9-mut對細(xì)胞增殖能力的影響,與Cas9組相比有無變化。5.通過構(gòu)建針對EGFP的gRNA,將其與Cas9-mut同時(shí)轉(zhuǎn)染到穩(wěn)定表達(dá)EGFP的HEK293細(xì)胞中,熒光顯微鏡觀察結(jié)果,確定Cas9-mut是否仍有基因編輯作用。結(jié)果:1.Miranda預(yù)測發(fā)現(xiàn)Cas9 mRNA存在能與microRNA-let7結(jié)合的堿基序列。將mimic-let7和mimic-NC轉(zhuǎn)染到HEK293-Cas9細(xì)胞后,qPCR和Western blot的結(jié)果顯示,Cas9的表達(dá)降低。生物信息學(xué)分析顯示,過表達(dá)Cas9后let7下游基因出現(xiàn)更多正向富集。不同腫瘤細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染Cas9后qPCR和Western blot的結(jié)果顯示,部分let7下游基因表達(dá)上調(diào)。2.Du145細(xì)胞中轉(zhuǎn)染Cas9后,CCK8實(shí)驗(yàn)、Ki-67細(xì)胞免疫熒光檢測和PI染色細(xì)胞周期檢測的結(jié)果均發(fā)現(xiàn),Cas9能促進(jìn)細(xì)胞的增殖。而且裸鼠荷瘤的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),Cas9能增加腫瘤細(xì)胞Du145的成瘤能力。3.在Hacat和bMSC細(xì)胞中轉(zhuǎn)染Cas9后,通過qPCR和Western blot檢測,發(fā)現(xiàn)部分let7下游基因表達(dá)上調(diào)。Edu和克隆形成證明Cas9對Hacat細(xì)胞的增殖也有促進(jìn)作用。進(jìn)一步將bMSC轉(zhuǎn)染Cas9的細(xì)胞進(jìn)行高通量轉(zhuǎn)錄組測序,分析發(fā)現(xiàn)let7下游基因在轉(zhuǎn)染Cas9的細(xì)胞中更多的呈現(xiàn)正向富集。GO分析結(jié)果顯示差異表達(dá)基因在RAS通路上富集。Cas9轉(zhuǎn)基因小鼠的Western blot實(shí)驗(yàn)和免疫組織實(shí)驗(yàn),均顯示部分let7下游基因表達(dá)上調(diào)。4.HepG2中轉(zhuǎn)染Cas9、Cas9-mut和對照載體后,CCK8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Cas9能促進(jìn)細(xì)胞增殖,但Cas9-mut與對照組無差異。Du145細(xì)胞中,同樣轉(zhuǎn)染三種載體,克隆形成實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)的結(jié)果均顯示Cas9-mut和Cas9均能促進(jìn)細(xì)胞克隆的形成和細(xì)胞增殖,但突變體Cas9-mut的促進(jìn)作用弱于Cas9本身。Western blot的結(jié)果顯示Cas9-mut能促進(jìn)let7下游基因FN1和Kras的表達(dá),其促進(jìn)作用弱于Cas9。5.在HEK392-EGFP細(xì)胞中,轉(zhuǎn)染了Cas9-mut和EGFP-gRNA后,觀察到細(xì)胞群中出現(xiàn)EGFP陰性細(xì)胞。因此一定程度上說明Cas9-mut仍然具有基因編輯的功能。結(jié)論:Cas9 mRNA可能通過ceRNA機(jī)制與microRNA-let7結(jié)合,兩者在細(xì)胞中會相互影響。在某些本底表達(dá)let-7的腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞中,外源導(dǎo)入的Cas9會促進(jìn)細(xì)胞的增殖,其機(jī)制可能是通過吸附let7,使let7下游的癌基因表達(dá)上調(diào)。同義突變的Cas9-mut,能夠減少這種促進(jìn)增殖的效應(yīng),并且仍有基因編輯作用,是Cas9序列的優(yōu)化,有利于CRISPR-Cas9技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展。將優(yōu)化后的Cas9-mut用于外泌體的改造,也會更有利于外泌體的臨床轉(zhuǎn)化應(yīng)用。小結(jié):干細(xì)胞外泌體和CRISPR-Cas9技術(shù)在醫(yī)學(xué)研究中都具有巨大的發(fā)展?jié)摿Σ⑶揖锌赡苓\(yùn)用于臨床治療。我們發(fā)現(xiàn)uMSC的外泌體對逆轉(zhuǎn)肝纖維化具有積極作用,其機(jī)制是通過抑制星狀細(xì)胞的活化和肝細(xì)胞的凋亡,并促進(jìn)正常肝細(xì)胞的增殖。這個過程中,外泌體含有的α-2,6-唾液酸糖基化修飾起了關(guān)鍵作用。另一方面,外源導(dǎo)入的Cas9可能與細(xì)胞內(nèi)的microRNA-let7相互結(jié)合,從而引起細(xì)胞增殖和癌基因表達(dá)。優(yōu)化后的Cas9-mut能使這種“副作用”減弱。采用優(yōu)化的基因編輯技術(shù)對細(xì)胞進(jìn)行改造,從而實(shí)現(xiàn)對外泌體糖基化修飾的進(jìn)一步優(yōu)化,更有利于提高外泌體臨床應(yīng)用的安全性。
【圖文】：

加入適量用抗體稀釋液稀釋好的一抗，再用 PBS 清洗 3 次，每次 3 分鐘。然后 小時(shí)。時(shí)間到后，吸去二抗，同樣 PBS 洗鐘（此步驟也可省略）。最后熒光顯微鏡體有特異性的表面標(biāo)志物，跨膜蛋白 CD6驗(yàn)確定我們超離提取的細(xì)胞上清外泌體能ano 儀器檢測外泌體，發(fā)現(xiàn)其粒徑分布為 （圖 1-2）。此外，我們還通過透射電鏡，觀3）。以上實(shí)驗(yàn)均說明我們通過超速離心提取的實(shí)驗(yàn)研究。

體有特異性的表面標(biāo)志物，，跨膜蛋白 CD63驗(yàn)確定我們超離提取的細(xì)胞上清外泌體能表Nano 儀器檢測外泌體，發(fā)現(xiàn)其粒徑分布為 1l（圖 1-2）。此外，我們還通過透射電鏡，觀-3）。以上實(shí)驗(yàn)均說明我們通過超速離心提取的實(shí)驗(yàn)研究。1 不同類型細(xì)胞上清提取的外泌體 Westernblot 鑒
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R575.2

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1 丁寧;楊春光;馬君燕;孫慎俠;李夢陽;胡學(xué)軍;張嘉寧;;大腸桿菌體內(nèi)高效表達(dá)N-糖基化修飾蛋白研究模型的構(gòu)建[A];2015中國酶工程與糖生物工程學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2015年

2 黎玉鳳;劉小蕓;謝春芳;劉大嶺;姚冬生;;基于計(jì)算化學(xué)設(shè)計(jì)的N-糖基化修飾對β-甘露聚糖酶穩(wěn)定性的改造[A];第九屆中國酶工程學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2013年

3 沈姝;王曼麗;李鑫;李淑芬;鄧菲;Just M.Valk;Ineke Braakman;胡志紅;王華林;;棉鈴蟲核多角體病毒膜融合蛋白N-糖基化修飾的突變和功能研究[A];2013年湖北省暨武漢微生物學(xué)會會員代表大會暨學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2013年

4 郭永;王捷熙;權(quán)國波;劉敏霞;王艷;楊超;扈文博;高峰;韓穎;;冷藏人血小板糖基化修飾穩(wěn)定性及功能的研究[A];第五屆全國低溫生物醫(yī)學(xué)及器械學(xué)術(shù)大會會議論文集[C];2006年

5 王軍;馬新梅;侯丙凱;;植物細(xì)胞分裂素N-糖基化修飾功能基因研究[A];2011全國植物生物學(xué)研討會論文集[C];2011年

6 陳萬方;齊佳;劉歡;孫倩男;隋琳琳;孔英;;調(diào)控骨橋蛋白糖基化修飾對子宮內(nèi)膜接受狀態(tài)的影響[A];第八屆泛環(huán)渤海生物化學(xué)與分子生物學(xué)會2018年學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2018年

7 金尚卉;韓萍;侯丙凱;;植物赤霉素糖基化修飾關(guān)鍵功能基因初步鑒定與分析[A];植物分子生物學(xué)與現(xiàn)代農(nóng)業(yè)——全國植物生物學(xué)研討會論文摘要集[C];2010年

8 馬新梅;王軍;侯丙凱;;植物細(xì)胞分裂素O-糖基化修飾功能基因研究[A];中國的遺傳學(xué)研究——遺傳學(xué)進(jìn)步推動中國西部經(jīng)濟(jì)與社會發(fā)展——2011年中國遺傳學(xué)會大會論文摘要匯編[C];2011年

9 高春芳;;異常糖基化修飾檢測在腫瘤早期診斷中的應(yīng)用前景[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會檢驗(yàn)分會成立30周年慶典大會資料匯編[C];2009年

10 肖軍;邢立靜;種康;;蛋白質(zhì)磷酸化及糖基化修飾調(diào)控春化作用的機(jī)制[A];從植物科學(xué)到農(nóng)業(yè)發(fā)展——2012全國植物生物學(xué)大會論文集[C];2012年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 記者 胡其峰;蜂王漿中發(fā)現(xiàn)13種新蛋白[N];光明日報(bào);2014年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 易傳偉;糖基化修飾調(diào)控人朊蛋白錯誤折疊機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2017年

2 路陽;Nrf2蛋白的O-GlcNAcylation修飾在抗氧化應(yīng)激中的作用和機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2017年

3 王遜;胰島素抵抗中糖基化修飾與骨骼肌穩(wěn)態(tài)的機(jī)制研究[D];西安交通大學(xué);2018年

4 劉俊;超聲波輔助糖基化修飾對蛋白質(zhì)功能性質(zhì)的影響及機(jī)制初探[D];江西師范大學(xué);2018年

5 張丹;胃癌、肺癌特異性IgG Fc N-糖基化修飾標(biāo)志物的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2017年

6 李翔;1.p53-MDM2/MDMX相互作用抑制劑的設(shè)計(jì)、合成與表征2.新型糖基化多肽的合成、表征及抗體制備[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2017年

7 孔凡樓;晚期糖基化修飾誘導(dǎo)β_2微球蛋白聚集及其毒性機(jī)理研究[D];武漢大學(xué);2011年

8 齊飛飛;N-糖基化修飾對瑞氏木霉纖維二糖水解酶I分泌、酶活和蛋白穩(wěn)定性的影響及影響機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2014年

9 史艷秋;糖基化修飾對抗腫瘤藥物生物活性影響的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

10 王美蓉;N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶Ⅲ通過對α5β1整合素N-糖基化修飾調(diào)控滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王志彥;畢赤酵母N糖基化修飾對牛腸激酶酶學(xué)特性的影響[D];天津大學(xué);2018年

2 曾韜;uMSC外泌體治療肝纖維化的糖基化修飾相關(guān)機(jī)制及其轉(zhuǎn)化應(yīng)用的關(guān)鍵技術(shù)研究[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué);2019年

3 馬婧;Lycosin-Ⅰ的修飾及其生物活性研究[D];湖南師范大學(xué);2018年

4 湯娟;骨唾液酸蛋白及其糖基化修飾對乳腺癌浸潤轉(zhuǎn)移的影響[D];蘇州大學(xué);2018年

5 凌鳳;組蛋白H3 R117單ADP核糖基化修飾通過P300影響大腸癌細(xì)胞增殖及其機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2017年

6 吳云;CD11b與乳糖衍生物Gu-4相互作用機(jī)理的研究[D];南京師范大學(xué);2015年

7 洛鴻潔;氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白PAT1糖基化修飾的功能研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2017年

8 車鳳玉;人胰島素原基因的N-糖基化修飾及其表達(dá)[D];江蘇科技大學(xué);2013年

9 楊洋;人朊蛋白N-糖基化修飾對體外誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用的初步研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2006年

10 韓珠;BST-2的糖基化修飾對其抑制細(xì)胞內(nèi)部病毒的作用研究[D];吉林大學(xué);2016年

本文編號：2628740