【摘要】：目的:采用皮下注射酪蛋白(Casein)誘導C57BL/6J小鼠體內(nèi)產(chǎn)生慢性低豐度系統(tǒng)性炎癥,研究在炎癥狀態(tài)下,膽固醇代謝紊亂導致肝組織損害及其相關(guān)分子機制。 方法:選取24只8周齡雄性C57 BL/6J小鼠,隨機分為普通飲食組(對照組,NCD)、炎癥組(NCD+Casein)、高脂組(HFD)、高脂+炎癥組(HFD+Casein),每組6只。正常飲食組給予普通飼料喂養(yǎng),高脂飲食組給予高脂飼料喂養(yǎng)(含15%脂肪, 1.25%膽固醇, 0.5%膽酸鹽)。炎癥刺激組予隔天皮下注射0.5 ml 10%酪蛋白溶液,非炎癥刺激組予隔天皮下注射0.5 ml生理鹽水,18周后處死小鼠,收集血清、肝臟、膽囊、小腸組織。采用ELISA法檢測血清中炎癥指標白介素-6(IL-6)、血清淀粉樣蛋白(SAA)、腫瘤壞死因子α(TNFα)的濃度。 結(jié)果:與對照組相比,給予炎癥刺激的兩組小鼠血清中IL-6、SAA、TNFα的濃度水平顯著升高,差異具有統(tǒng)計學意義,而單純高脂組炎癥指標水平較對照組相比無明顯差異。 結(jié)論:隔日皮下注射酪蛋白18周,可誘導C57BL/6J小鼠體內(nèi)產(chǎn)生慢性低豐度系統(tǒng)性炎癥,本實驗動物模型建立成功。 目的:觀察慢性低豐度系統(tǒng)性炎癥狀態(tài)下,C57BL/6J小鼠血清、肝臟、膽囊、小腸及HepG2細胞中脂質(zhì)含量水平及膽固醇外排相關(guān)指標的變化情況,探討炎癥是否加重脂質(zhì)誘導的肝損害。 方法:將HepG2細胞分為以下4組:對照組(Control)、炎癥組(TNFα)、高脂組(LDL)、高脂+炎癥組(LDL+ TNFα)。用HE染色及油紅O染色觀察小鼠肝臟及HepG2細胞形態(tài)及脂質(zhì)沉積情況。用化學酶促-比色法測定小鼠肝臟及HepG2細胞內(nèi)總膽固醇(TC)、游離膽固醇(FC)、膽固醇酯(CE)的含量。用酶法測定小鼠血清TC、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)水平。用3[H]標記膽固醇-液體閃爍計數(shù)法檢測HepG2細胞膽固醇外流量。用磷鉬酸比色法檢測小鼠肝臟、膽囊及近端小腸中膽汁酸水平。 結(jié)果:肝組織HE染色顯示,與對照組相比,炎癥組與高脂組的肝臟組織結(jié)構(gòu)紊亂,肝細胞內(nèi)有明顯脂滴積聚和少量空泡形成,而高脂+炎癥組可見肝細胞大量空泡樣變性及炎癥細胞浸潤。肝組織和HepG2細胞油紅O染色顯示,與對照組相比其余三組紅染顆粒增多,且以高脂+炎癥組最為明顯。肝組織和HepG2細胞內(nèi)膽固醇檢測結(jié)果顯示,與對照組相比其余三組TC、FC、CE含量均增加,且以高脂+炎癥組最為顯著(P0.05)。小鼠血清TC、LDL、HDL檢測結(jié)果顯示,高脂飲食增加了小鼠血清中三者的濃度,而無論給予正常飲食或高脂飲食,炎癥刺激均能降低三者血清中的濃度(P0.05)。細胞內(nèi)膽固醇外流測定結(jié)果顯示,與對照組相比,高脂組膽固醇外流量增加而炎癥組降低,高脂+炎癥組較高脂組外流量明顯減少(P0.05)。小鼠總膽汁酸水平檢測結(jié)果顯示,高脂組肝臟、膽囊及近端小腸中總膽汁酸水平較對照組增高,而高脂+炎癥組與單純高脂組相比,其水平降低(P0.05)。 結(jié)論:慢性低豐度系統(tǒng)性炎癥可引起C57BL/6J小鼠肝臟及HepG2細胞內(nèi)脂質(zhì)異常積聚,干擾了膽固醇外流及膽汁酸合成過程。 目的:探討炎癥通過干擾過氧化物酶體增殖物活化受體(PPAR)、肝X受體α(LXRα)、三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1(ABCA1)、膽固醇7α羥化酶1(CYP7A1)介導的膽固醇外排致肝內(nèi)脂質(zhì)積聚的分子機制。 方法:在前面兩個部分所建立的小鼠及細胞模型上,采用實時定量PCR(Real-Time PCR)法和蛋白免疫印跡(Western Blotting)法分別檢測小鼠肝臟和HepG2細胞中PPARα、PPARγ、LXRα、ABCA1、CYP7A1等基因mRNA和蛋白的表達水平。 結(jié)果:Real-Time PCR結(jié)果表明,無論在小鼠肝臟或HepG2細胞中,與對照組相比,高脂組中PPARα、PPARγ、LXRα、ABCA1、CYP7A1的mRNA表達顯著上調(diào),炎癥組表達則下調(diào),而高脂+炎癥組中上述各基因的mRNA表達水平較高脂組明顯下降(P0.05)。Western Blotting結(jié)果顯示蛋白表達情況與基因相符。 結(jié)論:炎癥應激可以通過下調(diào)肝臟中PPARα/PPARγ-LXRα-ABCA1/CYP7A1的表達,抑制膽固醇的外流和膽汁酸合成,加重脂質(zhì)在肝臟的沉積從而引起肝損害。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R575.5

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本文編號：2618553