【摘要】：研究背景： 肝纖維化（Hepaticfibrosis）這一病理過程是各種慢性肝病進(jìn)展為肝硬化的共同途徑。肝纖維化最終發(fā)展為肝硬化和肝癌的比率甚高，高達(dá)25％～40％，而肝硬化的并發(fā)癥和肝癌的死亡率是嚴(yán)重危害人們健康的世界性問題。肝纖維化是一個(gè)具有可逆性的病理過程，因此，阻止肝纖維化的進(jìn)展是改善肝病預(yù)后的重要策略。目前研究認(rèn)為，慢性炎癥反應(yīng)是肝纖維化發(fā)生發(fā)展的重要因素。近期的研究表明，高遷移率族蛋白B1（Highmobilitygroupproteinbox1，HMGB1）作為典型的內(nèi)源性危險(xiǎn)相關(guān)分子（Danger-associatedmolecularpatterns，DAMPs），在肝損傷引發(fā)的炎癥反應(yīng)中起著重要的作用。針對(duì)HMGB1在肝纖維化中作用的研究，引發(fā)了學(xué)者們極大的興趣。因此，我們旨在觀察HMGB1對(duì)肝臟慢性炎癥反應(yīng)和纖維化反應(yīng)的作用。 目的： 通過觀察高遷移率組蛋白1（Highmobilitygroupboxprotein1，HMGB1）對(duì)肝纖維化小鼠的相關(guān)炎癥因子和纖維化因子的影響，探討HMGB1在肝臟慢性炎癥和纖維化中的作用。 方法： 第一部分實(shí)驗(yàn)：昆明雄性小鼠40只，采用CCL-4灌胃法制備肝纖維化模型，隨機(jī)分為正常對(duì)照組（1ul/g生理鹽水灌胃，每5天一次）、2周模型組、4周模型組、6周模型組（1ul/gCCL4油溶液灌胃，每5天一次）。各組動(dòng)物處理前12小時(shí)禁食，摘除眼球法取血，ELISA法檢測(cè)血清中透明質(zhì)酸（HA）、Ⅰ型膠原蛋白（Col-Ⅰ）、Ⅲ型前膠原蛋白（PⅢP）和腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白介素6（IL-6）的含量；分別對(duì)肝組織病理切片進(jìn)行HE染色和天狼猩紅染色；Westernblot法檢測(cè)肝組織HMGB1的表達(dá)水平。 第二部分實(shí)驗(yàn)：昆明雄性小鼠20只，采用CCL4灌胃法制備肝纖維化模型，隨機(jī)分為模型組（1ul/gCCL4油溶液灌胃，每5天一次）、干預(yù)組（1ul/gCCL4油溶液灌胃，50ug/mouseHMGB1-Ab和5ug/g丙酮酸乙酯腹腔注射,每5天一次）。各組動(dòng)物處理前12小時(shí)禁食，摘除眼球法取血，ELISA法檢測(cè)血清中HA、Col-Ⅰ、PⅢP和IL-6、TNF-α的含量；分別對(duì)肝組織病理切片進(jìn)行HE染色和天狼猩紅染色；半定量RT-PCR法檢測(cè)小鼠肝組織中TGF-β、α-SMA和MMP-9mRNA的表達(dá)。 結(jié)果： 1、建立小鼠肝纖維化模型。6周模型組病理切片顯示肝細(xì)胞變性壞死比較嚴(yán)重，伴有炎癥細(xì)胞浸潤，并出現(xiàn)肝纖維組織增生；ELISA法檢測(cè)血清膠原蛋白含量結(jié)果顯示，正常對(duì)照組血清中HA、Col-Ⅰ、PⅢP含量較少；2周、4周、6周模型組血清中HA、Col-Ⅰ、PⅢP含量均較正常對(duì)照組明顯增加(P＜0.05)；6周模型組血清中HA、Col-Ⅰ、PⅢP含量均較4周模型組明顯增加(P＜0.05)。 2、CCL4致肝纖維化模型IL-6、TNF-α和HMGB1的變化。ELISA法檢測(cè)正常對(duì)照組血清中IL-6、TNF-α含量較少；2周、4周、6周模型組血清中IL-6、TNF-α含量均較對(duì)照組明顯增加(P＜0.05)；6周組血清中IL-6、TNF-α含量均較4周組明顯增加(P＜0.05)。Western-blot結(jié)果表明正常對(duì)照組肝組織內(nèi)無HMGB1表達(dá)，肝纖維化過程中肝組織HMGB1的表達(dá)隨著CCL4損傷周期的延長而逐漸升高，與正常對(duì)照組比較，2周、4周、6周模型組的HMGB1表達(dá)量明顯增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；與4周模型組比較，6周HMGB1的表達(dá)量顯著增加（P0.05）。 3、拮抗HMGB1可降低血清中IL-6、TNF-α的含量。ELISA法檢測(cè)各組動(dòng)物血清中炎癥因子含量結(jié)果顯示，與模型組比較，干預(yù)組動(dòng)物血清中IL-6、TNF-α的含量明顯減少（P0.05）。 4、拮抗HMGB1可降低肝纖維化程度。HE染色顯示，模型組肝細(xì)胞彌漫性脂肪變性，中央靜脈周圍肝細(xì)胞灶狀壞死，炎癥細(xì)胞浸潤，匯管區(qū)周圍纖維化，纖維間隔形成。干預(yù)組肝細(xì)胞少量的脂肪變性，炎癥細(xì)胞浸潤減少，匯管區(qū)有纖維產(chǎn)生，但無間隔形成。天狼猩紅染色結(jié)果顯示模型組肝組織內(nèi)膠原纖維向肝小葉延伸，并形成纖維間隔，與模型組相比較，干預(yù)組肝組織內(nèi)膠原纖維顯著下降（0.57％±0.21％vs1.02％±0.33％；P0.05）。ELISA法檢測(cè)各組動(dòng)物血清中膠原蛋白含量結(jié)果顯示，與模型組比較，干預(yù)組動(dòng)物血清中HA、Col-Ⅰ、PⅢP的含量明顯減少（P0.05）。RT-PCR結(jié)果顯示與模型組小鼠肝臟組織TGF-β、α-SMA的表達(dá)量相比較，干預(yù)組小鼠肝臟組織這些因子的表達(dá)量均明顯降低（P0.05），同時(shí)MMP-9mRNA的表達(dá)量增高。 結(jié)論：1.CCl4致肝纖維化動(dòng)物模型中，HMGB1和相關(guān)炎癥因子IL-6、TNF-α的表達(dá)增高.2.HMGB1的促纖維化作用與促炎作用有關(guān)。拮抗HMGB1后，相關(guān)炎癥因子的濃度降低，致纖維化因子減少，，肝纖維化程度減輕。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R575.2

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2617398