【摘要】： 背景和目的：越來(lái)越多的研究表明肝再生障礙是肝衰竭患者死亡的一個(gè)主要原因,但目前國(guó)內(nèi)外對(duì)肝衰竭患者肝再生障礙的機(jī)制并不清楚。本研究通過(guò)體外實(shí)驗(yàn),探討肝衰竭患者血漿對(duì)HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)及增殖的影響,并進(jìn)一步探討其對(duì)HepG2細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、細(xì)胞周期蛋白依賴激酶4(cyclin-dependent kinase 4, CDK4)表達(dá)的影響,初步了解肝衰竭患者肝再生障礙的原因及機(jī)制。方法：(1)血漿置換時(shí)收集肝衰竭患者血漿、肝素抗凝；(2)應(yīng)用MTT法檢測(cè)50%肝衰竭患者血漿對(duì)HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖作用,并與正常對(duì)照血漿及小牛血清做對(duì)照；(3)分別使用5ng/ml表皮生長(zhǎng)因子(epidermal growth factor, EGF), 10ng/mlEGF, 20ng/mlEGF刺激50%肝衰竭患者血漿培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞,并觀察細(xì)胞生長(zhǎng)及增殖情況；(4)采用Hoechst染色法觀察肝衰竭患者血漿對(duì)HepG2細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)；(5)采用Western-blotting(WB)技術(shù)檢測(cè)肝衰竭患者血漿對(duì)HepG2細(xì)胞內(nèi)Cyclin D1、CDK4蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果：(1)MTT比色法結(jié)果表明,與正常對(duì)照血漿比較,肝衰竭患者血漿在體外對(duì)HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)及增殖有明顯的抑制作用,在作用12h后,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)，且這種抑制作用呈現(xiàn)時(shí)間依賴性；(2)EGF對(duì)正常對(duì)照組HepG2細(xì)胞的生長(zhǎng)及增殖有明顯促進(jìn)作用,但僅大劑量EGF對(duì)肝衰竭組HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖有一過(guò)性刺激作用。與EGF刺激正常對(duì)照組比較,肝衰竭組各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞生長(zhǎng)與增殖仍受到明顯抑制。(3)形態(tài)學(xué)觀察：Hoechst凋亡染色結(jié)果表明,肝衰竭患者血漿作用于HepG2細(xì)胞后,細(xì)胞凋亡率無(wú)明顯增加(P0.05)；(4)WB結(jié)果顯示,隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng),肝衰竭患者血漿抑制HepG2細(xì)胞內(nèi)Cyclin D1、CDK4的表達(dá)。結(jié)論：肝衰竭患者血漿對(duì)HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)及增殖具有較強(qiáng)的抑制作用,大劑量EGF對(duì)肝衰竭患者血漿培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞增殖雖有一過(guò)性刺激作用,但并不能逆轉(zhuǎn)其抑制作用；肝衰竭患者血漿抑制HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的機(jī)制可能與其抑制細(xì)胞內(nèi)Cyclin D1、CDK4的表達(dá)有關(guān)。
【圖文】：

2.EGF不能逆轉(zhuǎn)肝衰竭患者血漿對(duì)HePGZ細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的抑制作用用sng/ml， 1on留ml，Zong/ml三個(gè)不同濃度EGF分別刺激正常對(duì)照組細(xì)胞和肝衰竭組細(xì)胞。正常對(duì)照組細(xì)胞在不同時(shí)間段的吸光值(OD值)見(jiàn)表4.1，圖2.1;肝衰竭組細(xì)胞不同時(shí)間段的吸光值(OD值)見(jiàn)表4.2，，圖2.2。結(jié)果發(fā)現(xiàn):不同濃度EGF對(duì)正常對(duì)照組HePGZ細(xì)胞生長(zhǎng)及增殖均有刺激作用，其中以20ng/ml濃度EGF對(duì) HepGZ細(xì)胞的作用最強(qiáng)，在24h時(shí)，Zong/ml濃度組與sng/ml，long/ml濃度組有顯著差異(P<o.ol)，但72h時(shí)，3個(gè)濃度EGF組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。然而

表4.2EGF對(duì)肝衰竭組HepGZ細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的誘導(dǎo)(x幻)Table4.2InduetionofgrowthandProliferationofHePG2cellsbyEGFinthePreseneeofPlasmafromPatieniswithliverfailure(x劫)6h12h24h48h72hsng/ml2.03月〕.3196士0.241.89州〕.301.78切.18#1.71切.1710ng/ml2.07士0.161.91士0.191.86均.131.89切.091.85士0.3720ng/ml1.99均.151.98切.231.99士0.112.01均.121.81切.18注:#與Zong/ml組比較尸<0.05Note:#P<0.05，eomParedwithgrouptreatedwith20ng/mlEGF
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R575.3

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本文編號(hào)：2615003