【摘要】： 第一部分大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及其鑒定 目的分離、培養(yǎng)、純化大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞;并通過(guò)流式細(xì)胞儀技術(shù)對(duì)其進(jìn)行鑒定。 方法采用全骨髓細(xì)胞貼壁培養(yǎng)篩選法分離純化大鼠MSCs。分析培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞出現(xiàn)的分化表型,判斷是否為MSCs。 結(jié)果大鼠MSCs呈梭形,漩渦狀方式生長(zhǎng),應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)MSCs表型:CD90.1高表達(dá)(99.2%),CD29高表達(dá)(98.9%),CD34低表達(dá)(0.5%),CD45低表達(dá)(0.9%)�？赏茰y(cè)培養(yǎng)的細(xì)胞為MSCs。 結(jié)論采用全骨髓貼壁篩選法可以成功分離培養(yǎng)出高純度大鼠MSC。 第二部分骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療大鼠肝功能衰竭 目的采用MSC尾靜脈移植治療肝衰竭大鼠,并且與模型對(duì)照組及正常對(duì)照組進(jìn)行比較,觀察各組大鼠的肝功能、生存率、MSCs的歸巢情況、肝組織病理改善情況、TNF-α水平。 方法將按第一部分方法培養(yǎng)出的大鼠MSCs用DAPI進(jìn)行標(biāo)記;采用CCL4灌胃的方法制作大鼠暴發(fā)性肝功能衰竭模型,分為實(shí)驗(yàn)組和模型對(duì)照組,空白對(duì)照組大鼠灌服生理鹽水;將標(biāo)記的細(xì)胞經(jīng)尾靜脈移植入實(shí)驗(yàn)組和正常對(duì)照組,模型對(duì)照組尾靜脈注射等量的生理鹽水;實(shí)驗(yàn)組與模型對(duì)照組進(jìn)行比較,持續(xù)觀察并記錄2組大鼠一般狀況、生存率等情況,分別于術(shù)后7d、14d處死兩組大鼠,檢測(cè)肝功能及肝臟病理變化,ELISA法檢測(cè)TNF-α水平;冰凍切片后熒光顯微鏡下觀察MSCs歸巢至肝臟的情況,并與正常對(duì)照組比較。 結(jié)果DAPI可成功標(biāo)記MSCs,細(xì)胞標(biāo)記效率達(dá)98%;造模后大鼠24小時(shí)內(nèi)逐漸進(jìn)入肝衰竭狀態(tài),表現(xiàn)為拒食,活動(dòng)明顯減少,萎靡、嗜睡或逐漸發(fā)展為昏迷狀態(tài),對(duì)外界刺激反應(yīng)較遲鈍或至無(wú)反應(yīng),全身毛蓬松,尿失禁,尿色深黃,便溏,解剖發(fā)現(xiàn)中毒性鼓腸,皮下或粘膜下有出血點(diǎn);生化檢查發(fā)現(xiàn)肝功能嚴(yán)重?fù)p害,組織學(xué)檢查顯示肝細(xì)胞大片壞死、大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn);從移植術(shù)后3d開始,實(shí)驗(yàn)組存活大鼠一般情況比模型對(duì)照組好轉(zhuǎn)更加明顯,移植術(shù)后7d時(shí),實(shí)驗(yàn)組與模型對(duì)照組比較,ALT指標(biāo)、生存率、TNF-α水平均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),病理切片炎癥改善情況實(shí)驗(yàn)組更為明顯;移植術(shù)后14d時(shí)實(shí)驗(yàn)組與模型對(duì)照組比較,肝功能指標(biāo)、生存率、TNF-α水平均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),病理切片炎癥改善情況實(shí)驗(yàn)組更為明顯;移植術(shù)后7d及14d,實(shí)驗(yàn)組MSC歸巢細(xì)胞逐漸增多,空白對(duì)照組只觀察到很少量歸巢細(xì)胞。 結(jié)論骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)經(jīng)尾靜脈同種異體移植,可以歸巢到肝衰竭大鼠肝臟,能夠促進(jìn)急性肝衰竭大鼠肝功能的恢復(fù),減輕肝臟組織炎癥壞死和免疫狀況,促進(jìn)肝臟組織修復(fù),對(duì)急性肝功能衰竭具有明顯的治療作用。
【圖文】：

無(wú)菌操作取脛骨和股骨

大鼠全骨髓細(xì)胞懸液（×200）
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R575.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2614105