本文關鍵詞：H0-1基因促進緊密連接蛋白Claudin-4表達增強腸粘膜屏障抗損傷與修復的作用初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 缺血再灌注損傷(Ischemia Reperfusion Injury, IRI)是指組織、器官缺血一段時間后,血管再通,組織器官灌注重新恢復后,細胞功能代謝障礙及結構破壞反而較缺血時進一步加重,器官功能進一步惡化的臨床綜合征。研究表明缺血再灌注損傷的早期變化為腸道屏障遭到破壞,腸粘膜通透性增強。上皮細胞間緊密連接是構成腸粘膜屏障的重要組成部分,能夠防止腸腔內(nèi)有害物質(zhì)如毒素或細菌穿過腸黏膜進入體內(nèi)其他組織器官和血液循環(huán)。各種原因引起的腸粘膜屏障的損害是導致機體內(nèi)環(huán)境紊亂和全身性感染的扳機。因此腸屏障功能已成為判斷危重病人預后的重要指標,腸道不僅是多器官功能障礙綜合征(Multiple organ dysfunction syndrome, MODS)的靶器官,更是MODS的啟動者。而眾所周知,血紅素氧化酶-1(Heme oxygenase-1, HO-1)是唯一可以被誘導的血紅素氧化酶,是生物體內(nèi)血紅素分解的限速酶。血紅素降解產(chǎn)生三種產(chǎn)物在抗氧化、細胞內(nèi)外信息的傳遞以及維持機體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等方面發(fā)揮重要的生理功能。研究表明HO-1及其代謝參與體內(nèi)各種氧化應激及炎癥反應,發(fā)揮抗炎、抗凋亡及細胞保護作用。因此有學者認為HO-1是未來治療胃腸道疾病的重要靶點。本研究通過建立大鼠缺血再灌注損傷模型及腸粘膜屏障體外模型觀察腸上皮細胞間緊密連接蛋白HO-1和Claudin-4蛋白表達的變化,以進一步揭示小腸缺血再灌注損傷的發(fā)病機制。 方法： 采用“腸系膜上動脈結扎60min法”建立大鼠腸缺血再灌注模型,構建人HO-1基因過表達載體并建立HO-1基因過表達結腸癌細胞株。動物實驗對象分為為6組,分別為假手術組,腸系膜缺血后再灌注3、6、12、24、48h組,每組5只；細胞實驗分為實驗組Caco-pS/HO-1和空白對照組Caco-pS2。采用SYBR Green相對定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(QRT-PCR)、蛋白免疫印跡法(Western Blot)以及免疫組織化學檢測缺血再灌注損傷后個時間點及過表達載體轉(zhuǎn)染前后H0-1及Claudin-4mRNA及蛋白的表達水；行CCK-8細胞增殖實驗和免疫熒光法觀察HO-1分子在細胞內(nèi)的分布情況。應用SPSS18.0統(tǒng)計軟件對實驗結果進行分析。 結果： 1.RT-PCR及Western Blot結果顯示緊密連接蛋白claudin-4在缺血再灌注后3h后蛋白表達逐漸升高,于12h達到最高,隨后逐漸恢復正常; 2.雙酶切及雙向測序證實載體構建成功,并于Caco-2細胞內(nèi)WB和PT-PCR證實。免疫熒光染色后,經(jīng)共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),H0-1蛋白主要分布在細胞質(zhì)和細胞膜; 3.CCK-8增殖實驗顯示：第五天對照組pS：3.2500±0.2477實驗組pS/HO-1:5.4300±0.2497,與對照組相比較,實驗組細胞增殖能力明顯高于對照組(P0.05)。細胞劃痕實驗：實驗組細胞于劃痕后48小時劃痕愈合,而對照組不愈合。48小時后,實驗組、對照組細胞劃痕平均寬度為分別為(17.25±7.31)vs(126.37±11.14)μ m(P0.05)。 4.HO-1過表達載體轉(zhuǎn)染Caco-2細胞后,經(jīng)Western Blot檢測示緊密連接蛋白Claudin-4明顯增加(1.04±0.15)vs(0.50±0.07)(P0.05)。 結論： 1.成功建立大鼠小腸缺血再灌注損傷動物模型； 2.成功構建HO-1基因真核過表達載體并建立HO-1基因過表達結腸癌細胞株； 3.緊密連接蛋白Claudin-4缺血再灌注損傷后先增加超出正常后恢復,有利于腸粘膜屏障抗損傷及修復; 4.HO-1基因調(diào)節(jié)緊密連接蛋白Claudin-4表達促進腸粘膜細胞增殖,增強粘膜抗損傷與修復功能。
【關鍵詞】：HO-1基因 Claudin-4 腸粘膜屏障 缺血再灌注損傷 損傷修復
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R574
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 符號說明11-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-29
• 實驗結果29-31
• 討論31-33
• 結論33-34
• 附圖表34-38
• 參考文獻38-40
• 綜述40-48
• 參考文獻44-48
• 致謝48-49
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文49-50
• 學位論文評閱及答辯情況表50

【參考文獻】

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1 周君琳,凌亦凌,魯士寶,關立,劉清河,王志偉,黃欣莉;絲裂原活化蛋白激酶在一氧化碳抗大鼠肢體缺血再灌注所致肺損傷中的作用[J];中華實驗外科雜志;2005年02期

2 Eirini Pantazi;Mohamed Amine Zaouali;Mohamed Bejaoui;Emma Folch-Puy;Hassen Ben Abdennebi;Joan Roselló-Catafau;;Role of sirtuins in ischemia-reperfusion injury[J];World Journal of Gastroenterology;2013年43期

  本文關鍵詞：H0-1基因促進緊密連接蛋白Claudin-4表達增強腸粘膜屏障抗損傷與修復的作用初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：261384