【摘要】： 目的觀察急性乙型肝炎(Acute hepatitis B,AHB)發(fā)病過(guò)程中患者體內(nèi)HBV特異性CD8~+T細(xì)胞上免疫抑制性分子程序性死亡因子1(Programmed cell death 1,PD-1)的表達(dá)及其動(dòng)態(tài)變化、功能特點(diǎn),揭示其與記憶性T細(xì)胞形成的關(guān)系,探討PD-1與急性乙型肝炎進(jìn)展的相關(guān)性。 方法合成4種識(shí)別HBV不同抗原表位的五聚體,同時(shí)采集16例HLA-A2陽(yáng)性的急性乙肝患者病程早期的外周血,用五聚體染色后,通過(guò)流式細(xì)胞儀分析HBV特異性CD8~+T細(xì)胞的頻率及其表面PD-1分子的表達(dá)特點(diǎn)。同時(shí)進(jìn)行肝功能、乙肝5項(xiàng)和血清HBV DNA檢測(cè)。并用肽刺激及細(xì)胞內(nèi)染色方法檢測(cè)HBV特異性CD8~+T細(xì)胞的增殖和產(chǎn)生細(xì)胞因子的能力。而且,長(zhǎng)期隨訪18例HLA-A2陽(yáng)性的急性乙型肝炎患者,分早、中、晚期用流式細(xì)胞儀檢測(cè)HBV特異性CD8~+T細(xì)胞上抑制性分子PD-1、記憶性細(xì)胞標(biāo)志CCR7、CD45RA、CD127和活化標(biāo)志CD38的表達(dá),檢測(cè)凋亡情況,檢測(cè)阻斷PD-1/PD-L1信號(hào)通路前后,不同階段HBV特異性CD8~+T細(xì)胞增殖及產(chǎn)生細(xì)胞因子的變化情況,并結(jié)合臨床資料,綜合分析PD-1/PD-L1在急性HBV感染過(guò)程中與記憶性T細(xì)胞形成的關(guān)系。 結(jié)果所有AHB病人發(fā)病早期均表現(xiàn)出高頻度、多特異性的HBV特異性CD8~+T細(xì)胞反應(yīng),并且PD-1表達(dá)在這些細(xì)胞上被明顯上調(diào)。體外阻斷PD-1/PD-L1間的相互作用能夠恢復(fù)HBV特異性CD8~+T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的能力。相關(guān)性分析也顯示PD-1分子的上調(diào)表達(dá)與轉(zhuǎn)氨酶水平呈正相關(guān)。隨訪發(fā)現(xiàn),AHB病人發(fā)病早期表現(xiàn)出的高頻度、多特異性的HBV特異性CD8~+T細(xì)胞反應(yīng)和在HBV特異性CD8~+T細(xì)胞上的PD-1高表達(dá)在晚期均明顯降低。而且,早期高表達(dá)PD-1的HBV表位特異性CD8~+T細(xì)胞凋亡程度明顯高于中、低水平表達(dá)PD-1的HBV表位特異性CD8~+T細(xì)胞。在高表達(dá)PD-1的病程早期,HBV特異性CD8~+T細(xì)胞的增殖及產(chǎn)生細(xì)胞因子的能力均較弱,中、晚期隨著PD-1的下降或消失,上述能力均明顯增強(qiáng)。早、中期阻斷PD-1/PD-L1信號(hào)通路可以明顯提高上述功能。隨著病程中、晚期肝功正常,HBsAg陰轉(zhuǎn),HBVDNA低于檢測(cè)值,HBV特異性CD8~+T細(xì)胞上記憶性細(xì)胞標(biāo)志CCR7、CD45RA和CD127表達(dá)逐漸升高,而活化標(biāo)志CD38表達(dá)逐漸下降,提示記憶性T細(xì)胞的形成。 結(jié)論在HBV急性感染過(guò)程早期PD-1/PD-L1通路在調(diào)節(jié)HBV特異性CD8~+T細(xì)胞功能方面起重要作用。PD-1分子的高表達(dá),有效抑制了HBV特異性CD8~+T細(xì)胞分泌IFN-γ的能力,從而避免了AHB患者肝臟遭受更為嚴(yán)重的免疫損傷。病程中PD-1表達(dá)與炎癥程度呈正相關(guān)。阻斷PD-1/PD-L1通路后HBV特異性CD8~+T細(xì)胞抗病毒免疫功能增強(qiáng)。在HBV急性自限性感染過(guò)程中,HBV特異性CD8~+T細(xì)胞PD-1表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化與記憶性T細(xì)胞的形成密切相關(guān)。
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周數(shù)(u/l)271127488621401032946932187914293119176762384275989377(eopies/ml)(%)8.13E+020.282.90E+040.25l.89E+030.047.25E+030.043污3E+030.288.54E+030.063.09E+040.024.82E+040.19.99E+040.035.00E+020一125.00E+020.369.69E+040.11.00E+070.141.20E+060.055.00E+020.096.64E+050.12(%)(%)(o/o)0一680.20.090.790.070一240.050.050.330.080.630一070.170.080.230。l2.110.510.110.80.080.670.020.060.950.084.980一090.480.1l。l0.020.210.180.040.080.070.260.020一060.020.110.480.030.080.040。190.06(03000002.1卜0.h200.100，，1.且22.1，山22

圖2外周血HBV特異性CDS+T細(xì)胞的頻率及PD一1分子的表達(dá)特點(diǎn)B，，lr二一oooa戶二0071r二0石87P二0.0050OO護(hù)0’擴(kuò)

本文編號(hào)：2612826