【摘要】： 目的觀察急性乙型肝炎(Acute hepatitis B,AHB)發(fā)病過程中患者體內(nèi)HBV特異性CD8~+T細胞上免疫抑制性分子程序性死亡因子1(Programmed cell death 1,PD-1)的表達及其動態(tài)變化、功能特點,揭示其與記憶性T細胞形成的關系,探討PD-1與急性乙型肝炎進展的相關性。 方法合成4種識別HBV不同抗原表位的五聚體,同時采集16例HLA-A2陽性的急性乙肝患者病程早期的外周血,用五聚體染色后,通過流式細胞儀分析HBV特異性CD8~+T細胞的頻率及其表面PD-1分子的表達特點。同時進行肝功能、乙肝5項和血清HBV DNA檢測。并用肽刺激及細胞內(nèi)染色方法檢測HBV特異性CD8~+T細胞的增殖和產(chǎn)生細胞因子的能力。而且,長期隨訪18例HLA-A2陽性的急性乙型肝炎患者,分早、中、晚期用流式細胞儀檢測HBV特異性CD8~+T細胞上抑制性分子PD-1、記憶性細胞標志CCR7、CD45RA、CD127和活化標志CD38的表達,檢測凋亡情況,檢測阻斷PD-1/PD-L1信號通路前后,不同階段HBV特異性CD8~+T細胞增殖及產(chǎn)生細胞因子的變化情況,并結合臨床資料,綜合分析PD-1/PD-L1在急性HBV感染過程中與記憶性T細胞形成的關系。 結果所有AHB病人發(fā)病早期均表現(xiàn)出高頻度、多特異性的HBV特異性CD8~+T細胞反應,并且PD-1表達在這些細胞上被明顯上調(diào)。體外阻斷PD-1/PD-L1間的相互作用能夠恢復HBV特異性CD8~+T細胞分泌細胞因子的能力。相關性分析也顯示PD-1分子的上調(diào)表達與轉氨酶水平呈正相關。隨訪發(fā)現(xiàn),AHB病人發(fā)病早期表現(xiàn)出的高頻度、多特異性的HBV特異性CD8~+T細胞反應和在HBV特異性CD8~+T細胞上的PD-1高表達在晚期均明顯降低。而且,早期高表達PD-1的HBV表位特異性CD8~+T細胞凋亡程度明顯高于中、低水平表達PD-1的HBV表位特異性CD8~+T細胞。在高表達PD-1的病程早期,HBV特異性CD8~+T細胞的增殖及產(chǎn)生細胞因子的能力均較弱,中、晚期隨著PD-1的下降或消失,上述能力均明顯增強。早、中期阻斷PD-1/PD-L1信號通路可以明顯提高上述功能。隨著病程中、晚期肝功正常,HBsAg陰轉,HBVDNA低于檢測值,HBV特異性CD8~+T細胞上記憶性細胞標志CCR7、CD45RA和CD127表達逐漸升高,而活化標志CD38表達逐漸下降,提示記憶性T細胞的形成。 結論在HBV急性感染過程早期PD-1/PD-L1通路在調(diào)節(jié)HBV特異性CD8~+T細胞功能方面起重要作用。PD-1分子的高表達,有效抑制了HBV特異性CD8~+T細胞分泌IFN-γ的能力,從而避免了AHB患者肝臟遭受更為嚴重的免疫損傷。病程中PD-1表達與炎癥程度呈正相關。阻斷PD-1/PD-L1通路后HBV特異性CD8~+T細胞抗病毒免疫功能增強。在HBV急性自限性感染過程中,HBV特異性CD8~+T細胞PD-1表達的動態(tài)變化與記憶性T細胞的形成密切相關。
【圖文】：

周數(shù)(u/l)271127488621401032946932187914293119176762384275989377(eopies/ml)(%)8.13E+020.282.90E+040.25l.89E+030.047.25E+030.043污3E+030.288.54E+030.063.09E+040.024.82E+040.19.99E+040.035.00E+020一125.00E+020.369.69E+040.11.00E+070.141.20E+060.055.00E+020.096.64E+050.12(%)(%)(o/o)0一680.20.090.790.070一240.050.050.330.080.630一070.170.080.230。l2.110.510.110.80.080.670.020.060.950.084.980一090.480.1l。l0.020.210.180.040.080.070.260.020一060.020.110.480.030.080.040。190.06(03000002.1卜0.h200.100，，1.且22.1，山22

圖2外周血HBV特異性CDS+T細胞的頻率及PD一1分子的表達特點B，，lr二一oooa戶二0071r二0石87P二0.0050OO護0’擴

本文編號：2612826