【摘要】： 目的 1.研究阿德福韋酯治療慢性乙型肝炎患者病毒動力學(xué)改變。2.研究抗病毒治療過程中兩個時相轉(zhuǎn)變時期外周血和肝臟局部HBV DNA和cccDNA的表達(dá)。 方法 通過建立實時熒光定量PCR體系檢測cccDNA (covalently closed circular DNA, cccDNA)。采用不同濃度質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品建立實時熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線,采用跨缺口的引物及PSAD酶消化樣品中混雜的rcDNA及線狀雙鏈DNA,以提高PCR技術(shù)檢測cccDNA的特異性,同時驗證該方法的重復(fù)性和靈敏性。以13例慢性乙肝患者為研究對象,應(yīng)用實時熒光定量PCR檢測治療前(13例)和治療后12周(7例)肝組織及血清中HBV DNA和HBV cccDNA,聯(lián)合檢測外周血病毒、生化指標(biāo)以研究抗病毒治療過程中肝內(nèi)及外周血的病毒動力學(xué)改變。 結(jié)果 建立cccDNA的實時熒光定量PCR檢測方法,線性范圍為102-108copies/ml�；颊吒谓M織中均可檢測到cccDNA,血清中cccDNA的陽性率為35.5%。肝臟HBVDNA表達(dá)與外周HBV DNA (r=0.823, P0.001)、HBsAg (r=0.623, P=0.002)、HBeAg (r=0.507, P=0.023)正相關(guān),cccDNA表達(dá)與外周血HBV DNA(r=0.499, P=0.025)、HBsAg (r=0.546, P=0.013)正相關(guān),與HBeAg無相關(guān)性,治療12周時肝內(nèi)HBV DNA和cccDNA較治療前分別下降了95.17%和96.63%,與外周血HBV DNA(99.6%)一致。 結(jié)論 1.建立實時熒光定量PCR檢測cccDNA (covalently closed circular DNA, cccDNA)體系。 2.肝臟HBV DNA表達(dá)與外周血HBV DNA、HBsAg、HBeAg正相關(guān),肝臟cccDNA表達(dá)與外周血HBV DNA、HBsAg正相關(guān)。 3.阿德福韋酯治療慢性乙肝患者,在治療后12周內(nèi)肝臟HBV DNA及cccDNA快速下降,在病毒動力學(xué)的快速下降期有95.17%和96.63%的病毒被清除,肝臟局部早期的病毒清除動力學(xué)與外周病毒清除動力學(xué)一致。
【圖文】：

圖3質(zhì)粒酶切后電泳圖像乙醇純化質(zhì)粒，以回收的質(zhì)粒作為標(biāo)準(zhǔn)品。該序鑒定過，實驗過程中采用乙肝基因不同部位的的條帶，，測序結(jié)果亦證實其堿基序列與目的基因因。按前述公式梯度稀釋后，分別以.cccDNAM12345678NTCZ000bPI000bP75ObPSOObP250bPIOObP

圖3質(zhì)粒酶切后電泳圖像收后乙醇純化質(zhì)粒，以回收的質(zhì)粒作為標(biāo)準(zhǔn)品。該質(zhì)測序鑒定過，實驗過程中采用乙肝基因不同部位的致的條帶，測序結(jié)果亦證實其堿基序列與目的基因長基因。按前述公式梯度稀釋后，分別以.cccDNAM12345678NTC
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R512.62

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