【摘要】： 四跨膜蛋白是一個(gè)特殊的細(xì)胞膜糖蛋白家族,通常由4個(gè)高度疏水的保守跨膜區(qū)段,2個(gè)較短的胞內(nèi)區(qū),以及2個(gè)差異相對(duì)較大的胞外區(qū)構(gòu)成。四跨膜蛋白參與細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、黏附、遷移和浸潤(rùn)等多種功能,是一個(gè)極其重要的蛋白質(zhì)家族。TM4SF4蛋白(Transmembrane 4 superfamily member 4)是一個(gè)四跨膜蛋白超家族的成員,最初是作為一個(gè)在人小腸上皮細(xì)胞和肝細(xì)胞中表達(dá)的四跨膜糖蛋白被發(fā)現(xiàn)的,能夠調(diào)控細(xì)胞密度相關(guān)的增殖抑制。我們實(shí)驗(yàn)室首先克隆了大鼠中的同源基因rat TM4SF4,并發(fā)現(xiàn)它在2/3肝切除后的再生肝中表達(dá)升高,推測(cè)可能與肝細(xì)胞再生相關(guān)。但是該蛋白在體內(nèi)的具體功能和作用機(jī)制還不清楚。 本論文的第一部分工作,我們采用四氯化碳大鼠急性肝損傷模型,研究了TM4SF4在四氯化碳急性肝損傷中作用。RT-PCR和Western blot檢測(cè)表明,在四氯化碳急性肝損傷的過程中,TM4SF4的mRNA和蛋白表達(dá)都急劇升高。用尾靜脈注射的方法,將正義的或反義的TM4SF4表達(dá)質(zhì)粒注入大鼠體內(nèi),上調(diào)或下調(diào)肝臟內(nèi)TM4SF4的表達(dá);然后用血清ALT/AST活力、肝臟組織學(xué)損傷評(píng)定等指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)肝臟的損傷程度,并用熒光實(shí)時(shí)定量PCR和Western blot等方法來(lái)檢測(cè)損傷相關(guān)基因表達(dá)情況的變化。結(jié)果表明,TM4SF4的過表達(dá),會(huì)加強(qiáng)肝臟的損傷,并使血清ALT、AST活力的升高。而下調(diào)TM4SF4基因的表達(dá),則會(huì)減輕肝臟的壞死程度,降低血清ALT、AST的活力。TM4SF4的表達(dá)上調(diào),還會(huì)影響一些生長(zhǎng)因子和受體的表達(dá)水平,如TNF-α、TNFR1和c-met等。此外,TUNEL檢測(cè)表明,TM4SF4的表達(dá)上調(diào),還能促進(jìn)CCl4引起的肝細(xì)胞凋亡,并且改變一些促凋亡基因和抑凋亡基因的表達(dá)。因此,我們的實(shí)驗(yàn)表明大鼠TM4SF4基因在四氯化碳誘導(dǎo)的肝臟急性損傷中表達(dá)上升,并且在促進(jìn)肝臟損傷中起重要的作用,其作用機(jī)制可能與TNF-α和HGF/c-met信號(hào)通路有關(guān)。 本論文的第二部分工作,我們對(duì)TM4SF4蛋白在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)和功能進(jìn)行了研究。對(duì)臨床肝癌和癌旁樣品的Western blot和免疫組化的檢測(cè)表明,TM4SF4蛋白在肝細(xì)胞癌中高表達(dá),而在相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)明顯較低或檢測(cè)不到。在肝癌細(xì)胞中導(dǎo)入TM4SF4表達(dá)質(zhì)粒,TM4SF4基因的高表達(dá)能顯著促進(jìn)肝癌細(xì)胞的克隆形成能力和細(xì)胞增殖速度。采用RNA干擾技術(shù)抑制肝癌細(xì)胞BEL-7404中TM4SF4基因的表達(dá)后,能明顯抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)和侵襲能力。免疫熒光共定位實(shí)驗(yàn)表明,TM4SF4定位于細(xì)胞膜上,并且能在EGF的刺激作用下進(jìn)入到細(xì)胞質(zhì)中。同時(shí)發(fā)現(xiàn)抑制TM4SF4的表達(dá),能夠使EGFR通路下游JAK激酶和STAT3的磷酸化程度減弱;過表達(dá)TM4SF4能夠增強(qiáng)STAT3-誘導(dǎo)的啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活力。我們的實(shí)驗(yàn)表明,TM4SF4基因在肝細(xì)胞癌中表達(dá)上升,TM4SF4的過表達(dá)能夠促進(jìn)肝癌細(xì)胞的惡性增殖,并參與EGFR/STAT3信號(hào)通路的活化。 我們的工作第一次對(duì)TM4SF4的功能進(jìn)行了較深入地研究,由此發(fā)現(xiàn)了TM4SF4的異常高表達(dá)能促進(jìn)肝臟的損傷和肝癌細(xì)胞的惡性增殖,并且第一次對(duì)TM4SF4的作用機(jī)理進(jìn)行了初步的探討,發(fā)現(xiàn)TM4SF4與TNF-α、HGF/c-Met和EGFR/STAT3信號(hào)通路有關(guān)。目前對(duì)于這個(gè)基因的功能和作用機(jī)制、以及表達(dá)調(diào)控等方面正在進(jìn)行深入的研究。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R575;R735.7

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 張雅凝;家蠶中一個(gè)新的膜蛋白基因HW的融合表達(dá)和純化[D];浙江理工大學(xué);2011年

2 菅桂倩;基于新型特征提取算法的蛋白質(zhì)分類研究[D];山東大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：2603855