【摘要】： 四跨膜蛋白是一個特殊的細胞膜糖蛋白家族,通常由4個高度疏水的保守跨膜區(qū)段,2個較短的胞內(nèi)區(qū),以及2個差異相對較大的胞外區(qū)構(gòu)成。四跨膜蛋白參與細胞生長增殖、黏附、遷移和浸潤等多種功能,是一個極其重要的蛋白質(zhì)家族。TM4SF4蛋白(Transmembrane 4 superfamily member 4)是一個四跨膜蛋白超家族的成員,最初是作為一個在人小腸上皮細胞和肝細胞中表達的四跨膜糖蛋白被發(fā)現(xiàn)的,能夠調(diào)控細胞密度相關(guān)的增殖抑制。我們實驗室首先克隆了大鼠中的同源基因rat TM4SF4,并發(fā)現(xiàn)它在2/3肝切除后的再生肝中表達升高,推測可能與肝細胞再生相關(guān)。但是該蛋白在體內(nèi)的具體功能和作用機制還不清楚。 本論文的第一部分工作,我們采用四氯化碳大鼠急性肝損傷模型,研究了TM4SF4在四氯化碳急性肝損傷中作用。RT-PCR和Western blot檢測表明,在四氯化碳急性肝損傷的過程中,TM4SF4的mRNA和蛋白表達都急劇升高。用尾靜脈注射的方法,將正義的或反義的TM4SF4表達質(zhì)粒注入大鼠體內(nèi),上調(diào)或下調(diào)肝臟內(nèi)TM4SF4的表達;然后用血清ALT/AST活力、肝臟組織學(xué)損傷評定等指標(biāo)來評價肝臟的損傷程度,并用熒光實時定量PCR和Western blot等方法來檢測損傷相關(guān)基因表達情況的變化。結(jié)果表明,TM4SF4的過表達,會加強肝臟的損傷,并使血清ALT、AST活力的升高。而下調(diào)TM4SF4基因的表達,則會減輕肝臟的壞死程度,降低血清ALT、AST的活力。TM4SF4的表達上調(diào),還會影響一些生長因子和受體的表達水平,如TNF-α、TNFR1和c-met等。此外,TUNEL檢測表明,TM4SF4的表達上調(diào),還能促進CCl4引起的肝細胞凋亡,并且改變一些促凋亡基因和抑凋亡基因的表達。因此,我們的實驗表明大鼠TM4SF4基因在四氯化碳誘導(dǎo)的肝臟急性損傷中表達上升,并且在促進肝臟損傷中起重要的作用,其作用機制可能與TNF-α和HGF/c-met信號通路有關(guān)。 本論文的第二部分工作,我們對TM4SF4蛋白在肝細胞癌中的表達和功能進行了研究。對臨床肝癌和癌旁樣品的Western blot和免疫組化的檢測表明,TM4SF4蛋白在肝細胞癌中高表達,而在相應(yīng)癌旁組織中的表達明顯較低或檢測不到。在肝癌細胞中導(dǎo)入TM4SF4表達質(zhì)粒,TM4SF4基因的高表達能顯著促進肝癌細胞的克隆形成能力和細胞增殖速度。采用RNA干擾技術(shù)抑制肝癌細胞BEL-7404中TM4SF4基因的表達后,能明顯抑制細胞的生長和侵襲能力。免疫熒光共定位實驗表明,TM4SF4定位于細胞膜上,并且能在EGF的刺激作用下進入到細胞質(zhì)中。同時發(fā)現(xiàn)抑制TM4SF4的表達,能夠使EGFR通路下游JAK激酶和STAT3的磷酸化程度減弱;過表達TM4SF4能夠增強STAT3-誘導(dǎo)的啟動子的轉(zhuǎn)錄活力。我們的實驗表明,TM4SF4基因在肝細胞癌中表達上升,TM4SF4的過表達能夠促進肝癌細胞的惡性增殖,并參與EGFR/STAT3信號通路的活化。 我們的工作第一次對TM4SF4的功能進行了較深入地研究,由此發(fā)現(xiàn)了TM4SF4的異常高表達能促進肝臟的損傷和肝癌細胞的惡性增殖,并且第一次對TM4SF4的作用機理進行了初步的探討,發(fā)現(xiàn)TM4SF4與TNF-α、HGF/c-Met和EGFR/STAT3信號通路有關(guān)。目前對于這個基因的功能和作用機制、以及表達調(diào)控等方面正在進行深入的研究。
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R575;R735.7

【引證文獻】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 張雅凝;家蠶中一個新的膜蛋白基因HW的融合表達和純化[D];浙江理工大學(xué);2011年

2 菅桂倩;基于新型特征提取算法的蛋白質(zhì)分類研究[D];山東大學(xué);2012年

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本文編號：2603855