【摘要】： 研究背景：既往研究表明，乙肝病毒(HBV)在肝外組織的復(fù)制引起諸如乙肝相關(guān)性病毒性心肌炎等多種肝外表現(xiàn)，但是乙肝病毒如何傳染肝外組織引起如乙肝相關(guān)性病毒性心肌炎等臨床表現(xiàn)，其發(fā)病機(jī)理仍然不清。 目的：為了探討人內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)和人及鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)是否能被HBV感染，具有攜帶HBV而修復(fù)肝外損傷的組織，進(jìn)一步研究乙肝病毒肝外表現(xiàn)的發(fā)病機(jī)理。同時，探討HBV傳染的種屬同源性問題。 方法：在本研究中，我們用乙肝病毒高拷貝陽性血清感染人臍帶血內(nèi)皮祖細(xì)胞、人和SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及SD乳鼠心肌細(xì)胞，并將感染的祖／干細(xì)胞移植入心肌梗死模型和急性腎缺血模型的SD大鼠。免疫組化、流式細(xì)胞儀、PCR和透射電鏡檢測體外培養(yǎng)的細(xì)胞，同時免疫組化和免疫熒光檢測SD大鼠的各臟器組織。 結(jié)果：本研究發(fā)現(xiàn)，在體外培養(yǎng)系統(tǒng)中用乙肝病毒對祖／干細(xì)胞、SD乳鼠心肌細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)進(jìn)行干預(yù)，人內(nèi)皮祖細(xì)胞可通過吞噬乙肝病毒而引起感染，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞也可被HBV感染，但不感染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞和SD乳鼠心肌細(xì)胞。在人內(nèi)皮祖細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可檢測到HBV DNA和變異的乙肝病毒顆粒，并在以后的維持培養(yǎng)中逐漸下降以至于消失。同時，乙肝表面抗原(HBsAg)和核心抗原(HBcAg)也在內(nèi)皮祖細(xì)胞、人和鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)。但是，HBV共價閉合環(huán)狀DNA(HBV cccDNA)始終是陰性。在體研究發(fā)現(xiàn)，在心肌梗死周邊部和繼發(fā)性損傷的腎、肺和肝組織，免疫組化和免疫熒光均發(fā)現(xiàn)乙肝抗原的表達(dá)。 結(jié)論：乙肝病毒不能感染乳鼠的心肌細(xì)胞，但能感染SD大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞和人間充質(zhì)干細(xì)胞，病毒對不同種屬的干細(xì)胞的感染可能是人畜共患性疾病的感染基礎(chǔ)。 內(nèi)皮祖細(xì)胞和人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可被乙肝病毒感染，但不在這兩種細(xì)胞中復(fù)制，并將乙肝病毒攜帶至被修復(fù)的組織，這充分說明內(nèi)皮祖細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞帶乙肝病毒修復(fù)組織的功能是乙肝病毒性心肌炎和其他乙肝肝外表現(xiàn)的發(fā)病機(jī)理之一。意味著干細(xì)胞具有帶病毒修復(fù)組織的功能，這也可能是病毒性疾病和病毒相關(guān)性腫瘤疾病的發(fā)病機(jī)理之一。
【圖文】：

圖2MSC免疫表型和細(xì)胞周期2.2.MSC是乙肝病毒感染的靶細(xì)胞為了觀察MSC是否能被乙肝病毒感染，我們把培養(yǎng)的細(xì)胞分為4組，即病毒血清干預(yù)組和正常人血清干預(yù)組，將培養(yǎng)的第3代MSC在接種于含玻片的培養(yǎng)皿時開始干預(yù)，千預(yù)2天后換新鮮培養(yǎng)液，繼續(xù)維持培養(yǎng)1一2天。免疫組化表明，病毒血清干預(yù)組HBcAg在干預(yù)3天后開始表達(dá)(圖3.IB)，主要在細(xì)胞質(zhì)發(fā)現(xiàn)(圖3.le，3.ID)。正常血清Mse

2.3.透射電鏡檢測用透射電鏡檢測病毒干預(yù)后的MSC發(fā)現(xiàn)，在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)偶見到大小不等的病毒顆粒見圖4A，，比內(nèi)皮祖細(xì)胞中少得多(見第二章Fig.SA一SC)。這種HBv病毒顆粒為圓形或橢圓形病毒顆粒，直徑大小在 50to200nm，大多數(shù)直徑在 80nm左右。在電鏡下計(jì)算5個不同20，000倍視野的平均數(shù)的HBV顆粒為2.5士2.1個;這些病毒顆粒主要在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，而不在粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(RER)和細(xì)胞核中。細(xì)胞傳代后消失。在正常人血清干
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R512.62

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本文編號：2601364