發(fā)布時間：2020-03-24 04:09

【摘要】：目的:已有許多研究表明,巨噬細胞凋亡抑制因子(Apoptosis inhibitor of macrophage,AIM/CD5L)在脂質(zhì)內(nèi)穩(wěn)態(tài)平衡的調(diào)節(jié)與自身免疫疾病中發(fā)揮著重要的作用,但是其在炎性肝損傷中的作用目前尚不明確。補體B因子(Complement factor B,CFB)在許多免疫反應中起著重要的作用,但并無研究提出CFB與CD5L之間是否能夠相互作用。本研究旨在探討CD5L基因在乙酰氨基酚(APAP)誘導的藥物性肝損傷中的作用,CD5L和CFB能否相互作用及兩者在肝臟炎癥相關模型中的功能初探。方法:我們建立APAP誘導的野生型(WT)小鼠及CD5L~(-/-)基因缺陷小鼠急性肝損傷模型,檢測血清中ALT、AST水平,對小鼠肝臟進行HE染色,觀察肝臟損傷情況;通過免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)、酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)實驗和兔紅細胞溶血實驗來驗證CD5L與CFB之間存在是否存在相互作用;;通過實時熒光定量核酸擴增檢測系統(tǒng)(RT-qPCR)檢測人單核巨噬細胞THP-1的M1-M2分型轉化實驗和人肝星狀細胞(LX02)纖維化實驗中相關基因的表達情況;通過免疫印跡試驗(Western Blot)檢測THP-1炎癥相關蛋白的活化情況。結果:采用藥物APAP刺激后,CD5L~(-/-)基因敲除鼠較WT小鼠表現(xiàn)出更嚴重的肝臟損傷,ALT和AST水平更高,且肝臟中壞死和凋亡的細胞更多,范圍更大;Co-IP和ELISA實驗證實CD5L與CFB之間存在相互作用;CD5L能夠抑制CFB介導的兔紅細胞的溶血反應;CD5L使THP-1巨噬細胞向M2分型轉化,CFB誘導巨噬細胞向M1分型轉化,在同時加入CD5L及CFB時,巨噬細胞無明顯M1或M2分型轉化趨勢;CD5L能夠促進由TGF-β和LPS誘導的人肝星狀細胞(LX02)的纖維化,而CFB對于LX02纖維化無明顯作用;CD5L蛋白能夠使THP-1細胞中Akt、ERK蛋白磷酸化,但CFB無法對CD5L介導的Akt、ERK蛋白磷酸化產(chǎn)生影響。結論:CD5L基因的敲除可使由APAP誘導的小鼠藥物性肝損傷加重,CD5L蛋白能夠減輕肝臟炎癥的發(fā)生;CD5L與CFB之間存在相互作用,在紅細胞溶血反應及THP-1細胞分型實驗中也存在著生物學功能上的拮抗作用。CD5L能夠降低TGF-β和LPS誘導產(chǎn)生的肝星狀細胞纖維化;CD5L能夠刺激THP-1細胞中Akt和ERK的活化。
【圖文】：

圖 1. CD5L 缺陷小鼠的構建與鑒定（a）通過 CRISPR/Cas9 基因敲除技術，，將位于小鼠基因組 Chr 3, GRCm38.p3的 CD5L 基因外顯子 2 到外顯子 5 進行敲除；（b）使用 Western Blot 免疫印跡法，檢測 CD5L-/-及 WT 小鼠肝臟中表達 CD5L 蛋白的情況。

圖 2.CD5L 基因的敲除可使由 APAP 誘導的小鼠藥物性肝損傷加重（a）（b）腹腔注射 APAP 后８小時和 24 小時，WT 和 CD5L-/-小鼠血清中 ALT、AST 水平。每組小鼠 5-6 只。當*P＜0.05，則認為組間差異有統(tǒng)計學意義。（c）WT 和 CD5L-/-小鼠肝臟組織 HE 染色的圖像（100X）。在 CD5L-/-小鼠中可以觀察
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R575

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