發(fā)布時(shí)間：2019-08-27 07:31

【摘要】：【研究背景】梗阻性黃疸（以下簡(jiǎn)稱梗黃）是臨床實(shí)踐中常見癥狀，后期易發(fā)生膽系感染，形成敗血癥，嚴(yán)重者易并發(fā)多器官功能衰竭。臨床解除膽道梗阻有膽汁內(nèi)引流術(shù)和膽汁外引流術(shù)兩種方式。研究顯示膽汁內(nèi)引流術(shù)使膽汁流入腸道而恢復(fù)膽汁腸肝循環(huán)，符合生理代謝，患者體力、營(yíng)養(yǎng)等恢復(fù)較好；而膽汁外引流導(dǎo)致膽汁完全丟失，雖然解除梗黃，但后期身體機(jī)能恢復(fù)較差，消瘦明顯。研究還表明膽汁內(nèi)外引流系有創(chuàng)手術(shù)，梗黃患者術(shù)前實(shí)施膽汁引流可產(chǎn)生并發(fā)癥，甚至錯(cuò)過最佳手術(shù)時(shí)間，抵消可能帶來(lái)的良好預(yù)期。因此，臨床上梗黃患者采用何種引流術(shù)至今未形成共識(shí)。目前，大量文獻(xiàn)報(bào)道膽汁內(nèi)引流好于膽汁外引流，但具體作用機(jī)制不清。我們系列動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)膽汁內(nèi)引流術(shù)具有恢復(fù)肝Kuffer細(xì)胞免疫功能、改善梗黃形成的內(nèi)毒血癥、糾正分泌紊亂的細(xì)胞因子以及對(duì)腸道slgA分泌、Occludin蛋白形成和腸黏膜巨噬細(xì)胞免疫功能等有作用，而膽汁外引流術(shù)上述作用不但不明顯，反而出現(xiàn)免疫功能惡化的趨勢(shì)；研究還顯示梗黃除了肝臟功能受損外，腸黏膜功能同樣受到損傷，引起腸內(nèi)細(xì)菌和毒素通過屏障入血，形成腸源性感染，促使內(nèi)源性炎癥因子大量分泌，加重病情，膽汁內(nèi)引流術(shù)可以逆轉(zhuǎn)上述病理改變，而膽汁外引流不能，而兩種引流方法區(qū)1別在于膽汁是否在腸道中復(fù)現(xiàn)。近些年文獻(xiàn)報(bào)道膽汁不但有助于物質(zhì)的消化吸收，其中的膽汁酸（bile acids，BAs）可作為信號(hào)分子，通過受體途徑調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、能量代謝以及抑制腸內(nèi)細(xì)菌過度增殖等，但對(duì)于BAs作為信號(hào)分子在腸道中的作用研究不清。因此，我們假設(shè)：BAs作為信號(hào)遞質(zhì)與腸黏膜組織中膽汁酸膜受體GP-BAR1結(jié)合，通過其信號(hào)通路調(diào)節(jié)GP-BAR1在腸黏膜組織中表達(dá)以及改變腸黏膜屏障功能。 【研究目的】觀察梗黃形成與解除過程中，大鼠腸黏膜組織形態(tài)的改變、腸黏膜組織GP-BAR1受體及其mRNA表達(dá)的變化，進(jìn)一步探討膽汁內(nèi)引流術(shù)優(yōu)于膽汁外引流術(shù)的分子生物學(xué)機(jī)制。 【材料與方法】采用成年Sprague Dawley雄性大鼠60只，隨機(jī)分為4組，即假手術(shù)組（SH，n=15）、膽汁內(nèi)引流組（ID，n=15）、膽汁外引流組（ED，n=15）和梗阻性黃疸組（OJ，n=15）。利用既往成熟的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型：首次手術(shù)建立OJ模型和SH模型。術(shù)后第8天在OJ模型基礎(chǔ)上行第2次手術(shù)，建立ID模型和ED模型。SH組、OJ組在首次術(shù)后第8天留取標(biāo)本，ID組和ED組在首次術(shù)后第15天留取標(biāo)本。造模成功后，取末端回腸組織常規(guī)HE染色觀察腸黏膜組織形態(tài)學(xué)變化，采用Western blot法檢測(cè)末端回腸黏膜組織GP-BAR1受體蛋白表達(dá)，采用RT-PCR方法檢測(cè)腸黏膜組織GP-BAR1mRNA的表達(dá)水平。 【結(jié)果】四組大鼠模型成功建立。Western blot方法檢測(cè)膽汁酸受體GP-BAR1在大鼠回腸黏膜組織中有表達(dá)。OJ組大鼠腸黏膜組織膽汁酸受體GP-BAR1表達(dá)明顯高于SH組（0.641±0.087vs0.398±0.062，P＜0.01）；行膽汁外引流后（ED組）腸黏膜組織的GP-BAR1受體表達(dá)稍有下降（ED vs OJ，0.597±0.093vs0.641±0.087，P＞0.05），但尚未降到SH組水平（ED vs SH，0.597±0.093vs0.398±0.062，P＜0.01）；然而，膽汁內(nèi)引流后（ID組）腸黏膜組織GP-BAR1受體表達(dá)明顯下調(diào)（ID vs OJ，0.447±0.057vs0.641±0.087，P＜0.01；ID vs ED，0.447±0.057vs0.597±0.093，P＜0.01），接近于SH組表達(dá)水平（ID vs SH，0.447±0.057vs0.398±0.062，P＞0.05）。OJ組腸黏膜組織GP-BAR1mRNA明顯高于SH組（OJ vs SH，0.796±0.114vs0.407±0.072，P＜0.01）；行外引流后(ED組）表達(dá)稍有減弱（ED vs OJ，0.729±0.134vs0.796±0.114，P＞0.05）但尚未降到假手術(shù)組水平（ED vs SH，0.729±0.134vs0.407±0.072，P＜0.01）；行內(nèi)引流后（ID組）GP-BAR1mRNA表達(dá)明顯下調(diào)（ID vs OJ，0.483±0.107vs0.796±0.114，P＜0.01；ID vs ED，0.483±0.107vs0.729±0.134，P＜0.01），與假手術(shù)組（SH組）比較無(wú)明顯差異（ID vs SH，0.483±0.107vs0.407±0.072，，P＞0.05）。 【結(jié)論】梗阻性黃疸大鼠腸黏膜組織中GP-BAR1及其mRNA表達(dá)水平明顯增強(qiáng)，膽汁內(nèi)引流術(shù)可以逆轉(zhuǎn)這種改變，但外引流卻不能，提示膽汁內(nèi)引流優(yōu)于外引流的機(jī)制可能與腸黏膜組織GP-BAR1及其mRNA的表達(dá)調(diào)控有關(guān)。
【圖文】：

SH 組（HE×100）SH 組（HE×200）圖 1 四組大鼠回腸 HE 染色結(jié)果3 腸黏膜組織 GP-BAR1 受體表達(dá)結(jié)果GP-BAR1 是一種細(xì)胞膜受體蛋白，研究證明在腸道中也有表達(dá)，膽汁酸是其天然配體。用干凈的載玻片將腸道黏膜刮取，采用 Western blot 檢測(cè)不同組別的腸黏膜 GP-BAR1 蛋白表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用 Gel-Pro 圖像分析系統(tǒng)分別測(cè)定回腸末端 GP-BAR1 蛋白和內(nèi)參β-actin 蛋白 IOD 值，得出比值 R 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。分析結(jié)果顯示：OJ 組 GP-BAR1 蛋白表達(dá)的最多（0.641±0.087），行外引流后其稍有下降（0.597±0.093）（ED vsOJ，P＞0.05），行內(nèi)引流術(shù)后GP-BAR1 蛋白明顯下降（0.447±0.057）（ID vs OJ，P < 0.01），假手術(shù)組其表達(dá)量最低（0.398±0.062）（SHvsOJ，P<0.01）。

SH 組（HE×100）SH 組（HE×200）圖 1 四組大鼠回腸 HE 染色結(jié)果3 腸黏膜組織 GP-BAR1 受體表達(dá)結(jié)果GP-BAR1 是一種細(xì)胞膜受體蛋白，研究證明在腸道中也有表達(dá)，膽汁酸是其天然配體。用干凈的載玻片將腸道黏膜刮取，采用 Western blot 檢測(cè)不同組別的腸黏膜 GP-BAR1 蛋白表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用 Gel-Pro 圖像分析系統(tǒng)分別測(cè)定回腸末端 GP-BAR1 蛋白和內(nèi)參β-actin 蛋白 IOD 值，得出比值 R 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。分析結(jié)果顯示：OJ 組 GP-BAR1 蛋白表達(dá)的最多（0.641±0.087），行外引流后其稍有下降（0.597±0.093）（ED vsOJ，P＞0.05），行內(nèi)引流術(shù)后GP-BAR1 蛋白明顯下降（0.447±0.057）（ID vs OJ，P < 0.01），假手術(shù)組其表達(dá)量最低（0.398±0.062）（SHvsOJ，P<0.01）。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R575

【共引文獻(xiàn)】

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1 蘇璇;羅開發(fā);吳亮;吳麗麗;李聞;;梗阻性黃疸大鼠膽汁內(nèi)、外引流術(shù)后血漿二胺氧化酶活性變化與腸粘膜屏障變化的相關(guān)性研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年17期

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1 蘇璇;膽汁內(nèi)外引流術(shù)對(duì)梗阻性黃疸大鼠血漿二胺氧化酶活性及腸源性防御素-5mRNA表達(dá)水平的影響[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2014年

本文編號(hào)：2529613