【摘要】：研究目的：研究乙型肝炎病毒（HBV）在新疆地區(qū)回族和柯爾克孜族人群中的基因型分布情況并進(jìn)行DNA定量分析，并探討回族和柯爾克孜族人群中HBV基因型與C區(qū)變異相關(guān)性。 研究方法：1、收集新疆地區(qū)回族、柯爾克孜族HBV感染者血清，提取病毒DNA，應(yīng)用熒光分型PCR（GQ-PCR）法與二代測(cè)序（NGS）技術(shù)進(jìn)行HBV基因型分型檢測(cè)，同時(shí)以實(shí)時(shí)熒光定量PCR法對(duì)其HBV DNA載量進(jìn)行定量檢測(cè)。2、探討HBV基因型在兩民族人群中的基因型分布特點(diǎn)，通過生物信息學(xué)手段將HBV C區(qū)的測(cè)序結(jié)果與GeneBank中的HBV參考株進(jìn)行核苷酸同源性比對(duì)，繪制系統(tǒng)發(fā)生樹，確定HBV C區(qū)的變異規(guī)律。3、分析各基因型及c區(qū)變異與慢性乙型肝炎病情的相關(guān)性。 研究結(jié)果：1、共收集了211例慢性HBV感染者，其中回族100例，包括男54例，女46例；柯爾克孜族111例，其中男56例，女55例，所有樣本均以雙抗體夾心ELISA法篩檢證實(shí)HBsAg為陽(yáng)性。2、HBV基因分型結(jié)果：成功分型94例回族樣本中，B型7例，占7.44%；C型62例，占65.95%；D型20例，占21.27%；混合型5例，占5.32%�？聽柨俗巫鍢颖境晒Ψ中�99例，其中B型10例，占10.10%；C型6例，占6.06%；D型75例，占75.76%；混合型8例，占8.08%。研究結(jié)果表明回族人群以C型為優(yōu)勢(shì)型，而柯爾克孜族人群則D型為優(yōu)勢(shì)型。3、HBV-DNA定量檢測(cè)結(jié)果顯示：HBV-DNA載量在3~10log10copies/ml之間，回族平均6.511.13log10copies/ml，柯爾克孜族平均5.67 1.04log10copies/ml。高、中、低拷貝組在兩個(gè)人群中的分布有顯著差異。4、基因變異分析結(jié)果顯示：B、C、D三種基因型在BCP區(qū)和BP區(qū)的突變形式與突變頻率不同，回族中A1762T和G1764A以C基因型突變率最高（45%和46%），D型次之（28%），B型最少（14%）；而G1896A、G1899A以D基因型突變率最高（66%和19%）�？聽柨俗巫迮c回族在D基因型的突變頻率表現(xiàn)相似。 結(jié)論：新疆地區(qū)回族和柯爾克孜族群體乙型肝炎病毒的基因型分布具有本民族的自身特點(diǎn)，其各基因型與C區(qū)變異的相關(guān)性也具有顯著差異，研究結(jié)果提示在新疆多民族地區(qū)進(jìn)行乙肝防治時(shí)，應(yīng)該根據(jù)不同民族群體HBV所具有的基因型和基因變異特點(diǎn)與規(guī)律，采取不同的防治策略，有針對(duì)性的制定防控措施，有效降低新疆各族民眾乙型肝炎的感染率和發(fā)病率，提高新疆各族人民的健康水平和衛(wèi)生質(zhì)量。
【圖文】：

（9）棄去收集管，將離心柱放入一個(gè)干凈的 2ml 收集管中；（10）小心的打開離心柱，加入 500μl 緩沖液 AW1， 8000rpm 離心 1 min；（11）棄去收集管及液體，將離心柱放入另一干凈 2ml 收集管中，加入 500μl 緩液 AW2，14,000rpm 離心 3 min；（12）將離心柱放入干凈的 1.5ml 離心管中，加入 200μl 緩沖液 AE，常溫下放置min；（13）8000rpm 離心 1min，棄去離心柱，收集 DNA，-20℃保存?zhèn)溆谩? HBV 基因型檢測(cè)5.1 實(shí)時(shí)定量 PCR 法檢測(cè) HBV 基因型本實(shí)驗(yàn)以 HBV 基因組中型特異性堿基的聚集區(qū)域?yàn)榘袇^(qū)域，在此區(qū)域內(nèi)設(shè)計(jì)特的引物或探針擴(kuò)增以區(qū)分不同的型別（所謂型特異性堿基是指各型在同一位置上各自對(duì)于其他型而異的堿基）。特異性引物和探針，配以熱啟動(dòng) DNA 聚合酶等成份組成酸擴(kuò)增試劑, 使用熒光 PCR 儀進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，并檢測(cè)熒光信號(hào)，，實(shí)現(xiàn)對(duì)未知樣本的別檢測(cè)。

新疆回族、柯爾克孜族 HBV 基因型分布特點(diǎn)與基因組變異規(guī)律的相關(guān)性研究一欄中設(shè)置樣本名稱；探針檢測(cè)模式設(shè)置為：Reporter Dye1：FAM，Quencher Dye1：NONReporter Dye2：VIC ，Quencher Dye2：NONE，Reporter Dye3：CY5，Quencher DyNONE，Reporter Dye4：TEXAS RED，Quencher Dye2：NONE，Passive Reference：NO打開 instrument 窗口，設(shè)置循環(huán)條件：50℃ 2 分鐘（1 個(gè)循環(huán)）→95℃ 15 分鐘（1環(huán)）→94℃ 15 秒→55℃ 45 秒（收集熒光，45 個(gè)循環(huán)）。設(shè)置完成后，保存文件行程序。5.1.5．結(jié)果分析反應(yīng)結(jié)束后自動(dòng)保存結(jié)果，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值、End 值Threshold 值（可根據(jù)實(shí)際情況自行調(diào)整，Start 值可以在 3～15、End 值可設(shè)在 5～在 Log 圖譜窗口設(shè)置 Threshold 的 Value 值，使閾值線位于擴(kuò)增曲線指數(shù)期,陰性質(zhì)的擴(kuò)增曲線平直或低于閾值線），點(diǎn)擊 Analysis 自動(dòng)獲得分析結(jié)果，在此基礎(chǔ)上，閾值線位置使所得標(biāo)準(zhǔn)曲線的 R2值最大即可在 Report 窗口讀取檢測(cè)結(jié)果。
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R512.62

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2523252