【摘要】：目的觀察甘露糖結(jié)合凝集素(mannose binding lectin,MBL)對人結(jié)腸癌細胞株Caco-2屏障功能的影響并探討其分子機制。方法體內(nèi)實驗:取14只C57小鼠,按隨機數(shù)字表法分為假手術(shù)組和LPS組(經(jīng)腹腔注射LPS,構(gòu)建腸炎癥損傷模型),通過免疫組化和Real-time PCR觀察MBL的變化情況,HE染色觀察腸黏膜的損傷情況。體外實驗:Caco-2細胞分為對照組、空轉(zhuǎn)染組和MBL shRNA組(應(yīng)用MBL干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Caco-2細胞),采用Real-time PCR、Western blot檢測緊密連接蛋白的表達情況,并檢測其跨上皮電阻(TER)。結(jié)果體內(nèi)實驗TER顯示LPS組腸黏膜通透性(80.32±5.43)比假手術(shù)組(140.45±4.78)明顯增加(P0.01),HE染色顯示LPS處理后腸黏膜完整性比假手術(shù)組降低,免疫組化和Real-time PCR檢測結(jié)果顯示LPS處理組MBL表達升高(P0.05)。在體外實驗中,我們成功構(gòu)建MBL shRNA質(zhì)粒模型,MBL shRNA組細胞中MBL的蛋白和mRNA表達[(0.34±0.09),(0.42±0.12)]較對照組及空轉(zhuǎn)染組明顯降低(P0.05)。MBL shRNA組的緊密連接蛋白Occludin和Claudin-1的蛋白[(0.43±0.10)、(0.53±0.11)]和mRNA水平[(0.43±0.08)、(0.45±0.10)]明顯低于其余組(P0.05);MBL shRNA組TER值(80.33±7.64)降低較其余組明顯(P0.05)。結(jié)論下調(diào)MBL基因可減少腸上皮細胞緊密連接蛋白Occludin和Claudin-1 mRNA及蛋白水平的表達,減弱腸上皮細胞的屏障保護功能。
【圖文】：

理后的TEＲ值占處理前的百分比表示。每組做1復(fù)孔，，實驗重復(fù)3次［8］。1．4統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)以xs

本文編號：2519404