【摘要】：目的:觀察棕櫚酸(palmitic acid,PA)對(duì)Hep G2和Hepa1-6細(xì)胞中鋅alpha2糖蛋白(Zinc alpha2 glycoprotein,ZAG)及法尼酯受體(Farnesoid X receptor,FXR)表達(dá)的影響以及探討Hep G2細(xì)胞過表達(dá)ZAG后對(duì)棕櫚酸誘導(dǎo)的TG沉積的影響。方法:1.體外培養(yǎng)Hep G2和Hepa1-6細(xì)胞,用濃度分別為0m M、0.2m M、0.4m M、0.6m M的棕櫚酸分別干預(yù)Hep G2和Hepa1-6細(xì)胞24小時(shí),Western blot在蛋白水平檢測(cè)ZAG及FXR表達(dá)。2.用六孔板體外培養(yǎng)Hep G2細(xì)胞,用過表達(dá)ZAG質(zhì)粒和空質(zhì)粒經(jīng)脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染Hep G2細(xì)胞24h后,0.4m M棕櫚酸干預(yù)24h,采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的水平,油紅O染色觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴,Western blot在蛋白水平檢測(cè)代謝性核受體(FXR、PPARα、LXR和SREBP1c)、脂肪酸合成(FAS、ACC、SCD-1等)、脂肪酸攝取(FATP4)、脂肪酸β-氧化(CPT1A)、脂聯(lián)素(Adiponectin)等基因表達(dá)。結(jié)果:1.隨著棕櫚酸濃度的增加,Hep G2和Hepa1-6細(xì)胞ZAG蛋白表達(dá)水平逐漸減少(P0.01),且PA濃度為0.6m M時(shí),其表達(dá)水平最低;此外,FXR蛋白表達(dá)水平也均降低,PA濃度為0.4m M時(shí),Hep G2細(xì)胞FXR蛋白表達(dá)水平明顯降低(P0.01),PA濃度為0.6m M時(shí),Hepa1-6細(xì)胞FXR蛋白表達(dá)水平明顯降低(P0.01)。2.油紅O染色顯示,在棕櫚酸干預(yù)下,與對(duì)照組相比較,過表達(dá)ZAG組的Hep G2細(xì)胞內(nèi)橘紅色脂滴明顯減少;細(xì)胞內(nèi)甘油三酯測(cè)定顯示,與對(duì)照組相比較,過表達(dá)ZAG組的Hep G2細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量減少。3.與p IRES2-GFP組相比,p IRES2-h ZAG組ZAG、Adiponectin、FXR、PPARα、CPT1A表達(dá)增加(p0.05),SREBP-1c、LXR、FAS、ACC、SCD-1表達(dá)降低(p0.01),FATP表達(dá)無明顯差異(p0.05),p IRES2-GFP+PA組ZAG、Adiponectin、FXR、PPARα表達(dá)降低(p0.01),SREBP-1c、LXR、FAS、ACC、SCD-1、FATP、CPT1A表達(dá)增加(p0.01);與p IRES2-GFP+PA組相比,p IRES2-h ZAG+PA組ZAG、Adiponectin、FXR、PPARα、CPT1A表達(dá)增加(p0.01),SREBP-1c、LXR、FAS、ACC、SCD-1、FATP表達(dá)降低(p0.01)。結(jié)論:1.過表ZAG能減少棕櫚酸誘導(dǎo)的Hep G2細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的沉積。2.過表ZAG可通過增加代謝性核受體FXR、PPARα的表達(dá)和降低LXR、SREBP1c的表達(dá),使脂肪酸合成基因FAS、SCD-1、ACC及脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)基因FATP4的表達(dá)降低,脂肪酸β氧化基因CPT1A的表達(dá)增加,從而減少Hep G2細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的沉積。目的:構(gòu)建沉默ZAG的RNAi慢病毒載體,感染Hep G2細(xì)胞,觀察感染病毒的Hep G2細(xì)胞在棕櫚酸誘導(dǎo)下甘油三酯沉積的變化。方法:1.用三條不同序列的LV-AZGP1-RNAi和LV-GFP-RNAi病毒分別感染Hep G2細(xì)胞,MOI=10,RT-q PCR篩選最佳沉默效果的LV-AZGP1-RNAi病毒。2.用上述沉默效果最佳的LV-AZGP1-RNAi病毒感染Hep G2細(xì)胞,MOI=10,感染72小時(shí)后,用0.4m M棕櫚酸干預(yù)細(xì)胞24小時(shí),采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的水平,油紅O染色觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴,Western blot在蛋白水平檢測(cè)代謝性核受體(FXR、PPARα、LXR和SREBP1c)、脂肪酸合成(FAS、ACC、SCD-1等)、脂肪酸攝取(FATP4)、脂肪酸β-氧化(CPT1A)、脂聯(lián)素(Adiponectin)等基因表達(dá)。結(jié)果:1.RT-q PCR結(jié)果顯示:在Hep G2細(xì)胞中,相對(duì)于LV-GFP-RNAi組,LV-AZGP1-RNAi-1組、LV-AZGP1-RNAi-2組及LV-AZGP1-RNA-3組AZGP1基因敲減效率都70%(P0.01),其中LV-AZGP1-RNAi-2組沉默效果最佳。2.油紅O染色顯示,在棕櫚酸干預(yù)下,與對(duì)照組相比較,沉默ZAG組的Hep G2細(xì)胞內(nèi)橘紅色脂滴明顯增加;細(xì)胞內(nèi)甘油三酯測(cè)定顯示,與對(duì)照組相比較,沉默ZAG組的Hep G2細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量增加。3.與LV-GFP-RNAi組相比,LV-AZGP1-RNAi組ZAG、Adiponectin、FXR、PPARα、CPT1A表達(dá)降低(P0.05),SREBP-1c、LXR、FAS、ACC、SCD-1表達(dá)增加(P0.01),FATP表達(dá)無明顯變化(P0.05),LV-GFP-RNAi+PA組ZAG、Adiponectin、FXR、PPARα表達(dá)降低(P0.01),SREBP-1c、LXR、FAS、ACC、SCD-1、FATP、CPT1A表達(dá)增加(P0.01);與LV-GFP-RNAi+PA組相比,LV-AZGP1-RNAi+PA組ZAG、Adiponectin、FXR、PPARα、CPT1A表達(dá)降低(P0.01),SREBP-1c、LXR、FAS、ACC、SCD-1、FATP表達(dá)增加(P0.01)。結(jié)論:1.沉默ZAG能增加棕櫚酸誘導(dǎo)的Hep G2細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的沉積。2.沉默ZAG可通過降低代謝性核受體FXR、PPARα的表達(dá)和增加LXR、SREBP-1c的表達(dá),使脂肪酸合成基因FAS、SCD-1、ACC及脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)基因FATP4的表達(dá)增加,脂肪酸β氧化基因CPT1A的表達(dá)降低,從而增加Hep G2細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的沉積。
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【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R575.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Fatty Acid Synthase and Hormone-sensitive Lipase Expression in Liver Are Involved in Zinc-α2-glycoprotein-induced Body Fat Loss in Obese Mice[J];Chinese Medical Sciences Journal;2010年03期

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本文編號(hào)：2498463