【摘要】：目的:探討腺病毒介導(dǎo)的shRNA下調(diào)第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶張力蛋白同源物(PTEN)基因表達(dá)對(duì)體外培養(yǎng)的活化肝星狀細(xì)胞(HSC)纖絲狀肌動(dòng)蛋白(F-actin)的影響。方法:體外培養(yǎng)大鼠活化HSC(HSCT6),將攜帶靶向PTEN的RNA干擾序列[短發(fā)夾RNA(shRNA)]并表達(dá)綠色熒光蛋白(GFP)的重組腺病毒AdshRNA/PTEN及僅表達(dá)GFP的對(duì)照空病毒Ad-GFP轉(zhuǎn)染HSC,實(shí)時(shí)熒光定量PCR及Western blotting實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HSC的PTEN mRNA及蛋白表達(dá);利用激光掃描共聚焦顯微鏡檢測(cè)HSC的形態(tài)、F-actin的分布及熒光強(qiáng)度、偽足以及應(yīng)力纖維的變化,并采用鈣熒光探針Rhod-2/AM負(fù)載檢測(cè)HSC內(nèi)Ca~(2+)濃度的變化。實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照(control)組(在腺病毒轉(zhuǎn)染步驟以DMEM代替腺病毒液)、Ad-GFP組(轉(zhuǎn)染表達(dá)GFP的空病毒Ad-GFP)和Ad-shRNA/PTEN組(轉(zhuǎn)染重組腺病毒Ad-shRNA/PTEN)。結(jié)果:靶向PTEN的shRNA成功轉(zhuǎn)染體外活化HSC,顯著下調(diào)HSC的PTEN mRNA及蛋白表達(dá)(P0.05);PTEN表達(dá)下調(diào)使活化HSC呈星形向四周伸展,F-actin排列緊密規(guī)則,數(shù)量增多,偽足充分向外伸展,應(yīng)力纖維絲增長(zhǎng)增粗;Ad-shRNA/PTEN組F-actin的熒光強(qiáng)度較control組及Ad-GFP組顯著增強(qiáng)(P0.05),而control組與Ad-GFP組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性;Ad-shRNA/PTEN組HSC內(nèi)Ca~(2+)濃度較control組及Ad-GFP組明顯升高(P0.05),而control組與Ad-GFP組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。結(jié)論:PTEN表達(dá)下調(diào)使體外活化肝星狀細(xì)胞骨架蛋白F-actin的形成及細(xì)胞骨架的重構(gòu)增強(qiáng),并增加了HSC內(nèi)的Ca~2濃度。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of adenoviral mediated shRNA down-regulation of phosphatase tensin homologue (PTEN) gene expression on (HSC) filamentous actin (F-actin) in activated hepatic stellate cells cultured in vitro. Methods: activated rat HSC (HSCT6) was cultured in vitro. Recombinant adenoviral AdshRNA/PTEN carrying PTEN targeting RNA interference sequence [short hairpin RNA (shRNA)] and expressing green fluorescent protein (GFP) and control empty virus Ad-GFP expressing GFP only were transfected into HSC,. The PTEN mRNA and protein expression of HSC were detected by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blotting. The morphology, F-actin distribution, fluorescence intensity, pseudopod and stress fiber of HSC were detected by laser scanning confocal microscope, and the concentration of Ca~ (2) in HSC was detected by calcium fluorescence probe Rhod-2/AM. The experiment was divided into control (control) group (DMEM instead of adenoviral solution in adenoviral transfer step), Ad-GFP group (empty virus Ad-GFP expressing GFP) and Ad-shRNA/PTEN group (recombinant adenoviral Ad-shRNA/PTEN). Results: shRNA targeting PTEN was successfully transformed into activated HSC, in vitro to significantly down-regulate the expression of PTEN mRNA and protein in HSC (P 0.05). The down-regulation of PTEN expression made the activated HSC stretch around the star, the arrangement of F-actin was closely regular, the number increased, the pseudopod fully extended outward, and the stress filament increased and thickened. The fluorescence intensity of F-actin in Ad-shRNA/PTEN group was significantly higher than that in control group and Ad-GFP group (P 0.05), but there was no significant difference between control group and Ad-GFP group. The concentration of Ca~ (2) in HSC in Ad-shRNA/PTEN group was significantly higher than that in control group and Ad-GFP group (P 0.05), but there was no significant difference between control group and Ad-GFP group. Conclusion: the down-regulation of PTEN expression enhances the formation of activated hepatic stellate cytoskeleton protein F-actin and the remodeling of cytoskeleton in vitro, and increases the concentration of Ca~2 in HSC.
【作者單位】： 華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院消化內(nèi)科;華北理工大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;
【基金】：河北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.H2013209327) 中國(guó)肝炎防治基金會(huì)天晴肝病研究基金資助項(xiàng)目(No.CFHPC20132078)
【分類號(hào)】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 靖旭;孫金隆;張曉蕓;唐可欣;尹青令;吳海燕;王金紅;王濟(jì)濰;成敏;;Jasplakinolide通過穩(wěn)定細(xì)胞骨架調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞功能[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2013年08期

2 郝禮森;張曉嵐;安君艷;劉娜;田曉鵬;;PTEN在肝纖維化大鼠肝組織中的動(dòng)態(tài)表達(dá)[J];中國(guó)病理生理雜志;2009年06期

3 郝禮森;張曉嵐;田曉鵬;安君艷;劉娜;;大鼠肝纖維化組織中PTEN蛋白的定位分布[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2009年04期

4 劉剛;胡蘊(yùn)玉;趙建寧;吳蘇稼;周光新;;Ⅰ型膠原促進(jìn)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞粘附的細(xì)胞機(jī)制[J];中華創(chuàng)傷骨科雜志;2006年06期

5 張利軍,魏蕾;WAVE2與細(xì)胞骨架的研究進(jìn)展[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年05期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 郝禮森;宋小杰;章廣玲;王靜;劉博;張朋壘;張明婷;靳麗敏;;腺病毒介導(dǎo)的shRNA下調(diào)PTEN表達(dá)對(duì)活化肝星狀細(xì)胞骨架蛋白F-actin的影響[J];中國(guó)病理生理雜志;2017年03期

2 郝禮森;張家琪;劉博;章廣玲;靳麗敏;張明婷;張朋壘;;PTEN表達(dá)下調(diào)促進(jìn)體外活化大鼠肝星狀細(xì)胞黏附[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2017年03期

3 張昌志;劉麗榮;李霜;王圓圓;石明雋;郭兵;;抑癌基因PTEN與纖維化疾病關(guān)系的研究進(jìn)展[J];國(guó)際泌尿系統(tǒng)雜志;2015年01期

4 郝禮森;張曉嵐;任昌鎮(zhèn);李立文;王靜;莫艷波;邊榮榮;魏月;張家琪;劉玉齡;;PTEN過表達(dá)抑制體外活化肝星狀細(xì)胞Akt的磷酸化[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2014年07期

5 孫江維;王東;孫海鈺;;人成骨細(xì)胞與復(fù)合型多孔生物支架降解產(chǎn)物的相容性[J];中國(guó)組織工程研究;2013年51期

6 郭劍;劉小娟;張國(guó)尊;孫慧聰;劉林力;郭金波;劉蕾;姚冬梅;宋梅;張曉嵐;;腺病毒介導(dǎo)的shRNA下調(diào)PTEN表達(dá)對(duì)體外活化肝星狀細(xì)胞增殖與凋亡的影響[J];中國(guó)病理生理雜志;2012年09期

7 崔群;韓建國(guó);李家鋒;;組織工程骨修復(fù)種植體周圍骨缺損的應(yīng)用研究[J];徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2012年04期

8 董鑫;孟國(guó)林;白峰;劉建;劉昌勝;郝賦;何樹;陳實(shí);趙軼男;李征宇;姜杰;;不同孔徑CPC材料對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2011年07期

9 王韻晴;盧婷利;趙雯;惠倩倩;孔丹鳳;陳濤;;骨組織工程支架材料的研究進(jìn)展[J];材料導(dǎo)報(bào);2011年03期

10 孫海鈺;王東;范偉;衛(wèi)小春;楊述華;;Ⅰ型膠原物理涂層新型多孔硫酸鈣支架對(duì)兔橈骨缺損修復(fù)的影響[J];山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2008年09期

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 溫克;賀平年;婁建石;;血管內(nèi)皮細(xì)胞糖萼與心血管疾病[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2008年08期

2 楊大春;楊永健;張?chǎng)?肖貞良;;心肌肥厚的PTEN負(fù)性調(diào)控與血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)病理生理雜志;2008年05期

3 王應(yīng)燈;張薇;徐莉英;莊鋒;田淑敏;;血管緊張素Ⅱ?qū)δI小球內(nèi)皮細(xì)胞骨架和單層通透性的影響[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2007年07期

4 宋力,黃巧冰,趙克森;蛋白激酶C與內(nèi)皮細(xì)胞骨架蛋白和血管通透性研究進(jìn)展[J];中國(guó)微循環(huán);2003年03期

5 邵開峰,吳澤志,王伯初,龍勉,蔡紹皙;細(xì)胞骨架對(duì)肝癌細(xì)胞粘附性的影響[J];重慶大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2000年03期

6 劉文,宋芝娟,梁念慈,佘戟,莫麗兒;槲皮素一硫酸酯對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的豬血小板聚集和肌動(dòng)蛋白聚合的影響[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);1998年01期

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 陳文;鄧存良;劉濤;陳楓;黃捷;;腎上腺髓質(zhì)素對(duì)大鼠活化肝星狀細(xì)胞調(diào)亡的影響[J];四川醫(yī)學(xué);2007年02期

2 萬維琴;朱丹丹;顧錫娟;段義農(nóng);黃彩群;;Septin4_I2基因活化肝星狀細(xì)胞中的表達(dá)及序列生物信息學(xué)分析[J];中國(guó)病原生物學(xué)雜志;2013年05期

3 劉博偉;于靜;陳源文;李定國(guó);蘭玲;袁媛;賈長(zhǎng)河;張昊;;生長(zhǎng)抑制因子AcSDKP對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1促活化肝星狀細(xì)胞合成和分泌細(xì)胞外基質(zhì)的影響[J];中國(guó)藥房;2012年05期

4 郝禮森;張曉嵐;任昌鎮(zhèn);李立文;王靜;莫艷波;邊榮榮;魏月;張家琪;劉玉齡;;PTEN過表達(dá)抑制體外活化肝星狀細(xì)胞Akt的磷酸化[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2014年07期

5 胡彬;王赫;徐會(huì);王鈞毅;趙娜;楊俊濤;;游離脂肪酸抑制TRAIL誘導(dǎo)的活化肝星狀細(xì)胞凋亡[J];肝臟;2014年02期

6 郭劍;劉小娟;張國(guó)尊;孫慧聰;劉林力;郭金波;劉蕾;姚冬梅;宋梅;張曉嵐;;腺病毒介導(dǎo)的shRNA下調(diào)PTEN表達(dá)對(duì)體外活化肝星狀細(xì)胞增殖與凋亡的影響[J];中國(guó)病理生理雜志;2012年09期

7 孫英梅;李文杰;陶劍平;;HepG2細(xì)胞表達(dá)蛋白HCVC體外活化肝星狀細(xì)胞的研究[J];中國(guó)病原生物學(xué)雜志;2013年10期

8 李光明;謝青;李定國(guó);姜山;劉海防;徐芹芳;金由辛;;抗結(jié)締組織生長(zhǎng)因子小干擾RNA對(duì)鼠原代肝易狀細(xì)胞增殖的影響[J];中華肝臟病雜志;2006年03期

9 ;[J];;年期

相關(guān)會(huì)議論文 前2條

1 蔣明德;孫浩平;鄭淑梅;;MAPK反義寡核苷酸對(duì)乙醛活化HSC生物特性的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下冊(cè)）[C];2007年

2 易蘇紅;張yN;吳漢軍;張宗h，

本文編號(hào)：2494122