【摘要】：背景:隨著重度潰瘍性結(jié)腸炎(severe ulcerative colitis,SUC)發(fā)病率與病死率的不斷攀升,以及其發(fā)病急、進(jìn)展快的特點(diǎn),SUC已逐漸成為臨床關(guān)注的重點(diǎn)。糖皮質(zhì)激素是目前公認(rèn)治療SUC的最主要藥物,但不同的患者對(duì)激素治療有著不同的臨床藥物反應(yīng),部分患者存在激素抵抗。據(jù)有關(guān)報(bào)道顯示糖皮質(zhì)激素治療總有效率為70%,約30%的SUC達(dá)不到臨床緩解,存在糖皮質(zhì)激素抵抗現(xiàn)象。對(duì)于激素抵抗患者往往需要進(jìn)行藥物升級(jí)療法,甚至需要手術(shù)治療,若能提前預(yù)測(cè)患者對(duì)激素的敏感程度則能為臨床醫(yī)生選擇不同的治療方案提供幫助。目前尚缺乏一種可靠的標(biāo)準(zhǔn)提前預(yù)知患者對(duì)激素治療的敏感程度,研究顯示機(jī)體對(duì)糖皮質(zhì)激素敏感與否與異常增多的糖皮質(zhì)激素受體-β(GR-β)以及與NF-KB信號(hào)通路的活性增強(qiáng)有關(guān)。骨保護(hù)素(osteoprotegerin,OPG)是一種受體蛋白,近年來有學(xué)者提出OPG能反應(yīng)炎癥性腸病病變程度、部位、類型,并能預(yù)測(cè)UC患兒對(duì)糖皮質(zhì)激素的敏感性,有望成為協(xié)助炎癥性腸病診療的新指標(biāo)。目的:通過檢測(cè)SD大鼠SUC模型激素治療前后血清中OPG水平的變化以及結(jié)腸組織GR-β基因和NF-KB蛋白的表達(dá),從而探討OPG能否作為預(yù)測(cè)SD大鼠結(jié)腸炎對(duì)激素敏感性的檢測(cè)指標(biāo)。方法:60只質(zhì)量約250-280g的雄性SD大鼠;隨機(jī)編號(hào)為1-60號(hào),采用單籠飼養(yǎng)。TNBS組為1-40號(hào),模型組(M組)為41-50號(hào),對(duì)照組(N組)為51-60號(hào)。TNBS組和M組均采用5%TNBS+50%乙醇(v/v)溶液建立大鼠急性結(jié)腸炎的重癥模型,N組采用同等容量的50%的乙醇溶液灌腸。造模成功后的第三天予以干預(yù)處理,TNBS組大鼠每日于同一時(shí)間予以地塞米松磷酸鈉(2mg/kg)腹腔注射1次,共注射10天;M組、N組大鼠按相同計(jì)算方法予以腹腔注射生理鹽水。每日對(duì)大鼠的疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI指數(shù))進(jìn)行評(píng)分,分別于造模成功后第3天與第13天取大鼠眼眶靜脈血用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢查血清中OPG水平。第13天處死所有大鼠,采集結(jié)腸標(biāo)本行肉眼觀結(jié)腸病變損害程度(CMDI)評(píng)分;取病變結(jié)腸組織行HE染色后觀察并行病理評(píng)分(TDI評(píng)分)。據(jù)DAI指數(shù)變化、TDI以及CDMI評(píng)分綜合結(jié)果將TNBS組分為激素有效組(S組)以及激素?zé)o效組(I組)。取病變明顯的結(jié)腸組織,用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)N、M、S、I組結(jié)腸組織中的GR-β受體基因表達(dá)情況,蛋白NF-KB p65含量的檢測(cè)由蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)完成;激素治療前后OPG變化采用配對(duì)t檢驗(yàn)完成,GR-β與NF-KB p65分別采用單因素方差分析完成。結(jié)果:1、N組結(jié)腸組織形態(tài)、結(jié)構(gòu)清楚,無炎性細(xì)胞浸潤(rùn),其DAI指數(shù)、CDMI及TDI結(jié)果均比其他各組得分低,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);M組DAI指數(shù)、CDMI及TDI評(píng)分均最高,大鼠可見不同程度的精神、食欲下降、腹瀉以及血便,肉眼可見腸粘膜的水腫和壞死,HE染色可見結(jié)腸粘膜結(jié)構(gòu)破壞以及炎性細(xì)胞的浸潤(rùn),杯狀細(xì)胞減少,表明潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型復(fù)制成功。2、ELISA結(jié)果:(+表示造模第3天時(shí)的血清標(biāo)本,-表示造模第13天的血清標(biāo)本)OPG含量在N組最低,M組第3天時(shí)的OPG(M+)明顯高于其他各組。S組激素治療后(S-)的OPG含量明顯低于治療前(S+)(p0.01),然而I組激素治療前(I+)和治療后(I-),N組第3天(N+)和第13天(N-)的OPG含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3、GR-β受體基因表達(dá)結(jié)果:I組中的GR-β受體基因表達(dá)量顯著高于其他各組,GR-β表達(dá)量在N組最低。除N組與S組之間無差異(p0.05)外,其余各組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。其中,GR-β基因在I組的表達(dá)量明顯高于S組。4、NF-KB p65蛋白表達(dá)量:M組NF-KB p65蛋白表達(dá)最多,N組最少;且I、S、M、N任意兩組之間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。其中I組蛋白表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于S組(p0.01)。5、ROC曲線分析OPG最佳截?cái)嘀禐?542.9360 pg/ml,ROC曲線下面積為0.910;GR-βROC曲線下面積為0.944,NF-KB p65 ROC曲線下面積為0.891。結(jié)論:1、三硝基苯磺酸溶液灌腸法是建立潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型較為理想的方法,當(dāng)TNBS劑量為180 mg/kg時(shí)所得到的SD大鼠結(jié)腸炎模型可達(dá)到重癥標(biāo)準(zhǔn)。2、本實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了GR-β受體以及NF-KB p65可以間接預(yù)測(cè)大鼠對(duì)糖皮質(zhì)激素的敏感程度。3、UC大鼠的血清OPG可以間接反映對(duì)糖皮質(zhì)激素治療的敏感程度,可作為臨床激素療效的檢測(cè)指標(biāo)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R574.62

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2429390