【摘要】：非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)是指除乙醇，肝炎病毒，藥物等其他明確的肝損傷因素外，以彌漫性肝臟脂質(zhì)蓄積，伴或不伴炎癥為主要病理特征的一系列疾病的統(tǒng)稱，包括單純性脂肪肝，非酒精性脂肪性肝炎，肝纖維化，肝硬化，肝細(xì)胞癌，另外還包括一些嚴(yán)重并發(fā)癥如急性肝衰竭等。非酒精性脂肪性肝病目前已經(jīng)成為發(fā)達(dá)國家慢性肝病以及隱源性肝硬化的主要病因，其發(fā)病率和死亡率呈現(xiàn)逐年增長的趨勢。單純性脂肪肝是一個可逆的過程，而非酒精性脂肪性肝炎則是單純性脂肪肝發(fā)展為肝硬化的必經(jīng)途徑，研究非酒精性脂肪性肝炎的發(fā)病機(jī)制并阻礙其向肝硬化過程發(fā)展過程是目前亟不可待的任務(wù)。 近年來，腸源性內(nèi)毒素血癥引發(fā)肝細(xì)胞一系列炎癥打擊損傷的研究越來越炙手可熱，在單純性脂肪肝進(jìn)展為肝炎過程中扮演著重要角色。腸源性內(nèi)毒素血癥的發(fā)生與各種因素相關(guān)，各種原因引起的腸道菌群失調(diào)，腸道細(xì)菌過度生長，腸粘膜屏障功能損傷，最終導(dǎo)致細(xì)菌移位形成腸源性內(nèi)毒素血癥。革蘭氏陰性桿菌細(xì)胞壁的主要成分LPS是腸源性內(nèi)毒素的主要成分，經(jīng)肝臟枯否細(xì)胞的模式識別受體識別后介導(dǎo)LPS-CD14-TLR4信號通路誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞因子包括TNF-α、IL-6等的大量表達(dá)，造成肝臟損傷。腸粘膜屏障功能損傷的早期表現(xiàn)即為腸粘膜通透性的增高，腸粘膜通透性作為聯(lián)系腸道毒素與肝臟的橋梁起了至關(guān)重要的作用。腸粘膜通透性改變與許多疾病相關(guān)，如酒精性脂肪性肝病，炎癥性腸病，急性胰腺炎，慢性腎功能衰竭，肺間質(zhì)纖維化等，非酒精脂肪性肝病也有相關(guān)文獻(xiàn)。酒精直接損傷，氧化應(yīng)激，腸道缺血再灌注等許多因素均能打破腸粘膜細(xì)胞凋亡和增殖之間的相互平衡，引起腸道上皮細(xì)胞凋亡增加，細(xì)胞間緊密連接完整性破壞等造成腸粘膜通透性增加，近年來關(guān)于酒精性肝病，炎癥性腸病等腸道上皮凋亡與腸道通透性的研究越來越多，但關(guān)于非酒精性脂肪性肝炎腸道上皮細(xì)胞凋亡的研究還比較少，因此本實(shí)驗(yàn)研究非酒精性脂肪性肝炎大鼠內(nèi)毒素的形成是否與腸粘膜上皮細(xì)胞凋亡及腸粘膜通透性有關(guān)。 目的：應(yīng)用高脂飲食構(gòu)建大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型，測定末端回腸上皮細(xì)胞凋亡水平、腸粘膜通透性水平和血清內(nèi)毒素的水平，了解它們之間的相關(guān)性。 方法：雄性Sprague-Dawley大鼠20只，平均體重為180±20g，自由喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為2組：①對照組10只，給予標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)；②模型組10只，給予高脂飼料喂養(yǎng)（88%普通飼料+2%膽固醇+10%豬油）；實(shí)驗(yàn)動物均分籠飼養(yǎng)于25±2℃、明暗各12h的動物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，自由進(jìn)食和飲水。每周記錄動物體重1次，連續(xù)進(jìn)行至24周末，處死所有大鼠。 完整切除肝臟，觀察肝臟的大體情況，稱取肝臟濕重；采用全自動生化分析儀測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT），谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和甘油三酯(TG)水平；采用鱟試劑法測定血清內(nèi)毒素水平；HE染色觀察肝臟組織和末端回腸黏膜病理學(xué)變化，并對肝臟組織進(jìn)行NAS炎癥積分；采用分光光度法測定血清D-乳酸水平；制作末端回腸組織石蠟切片應(yīng)用TUNEL方法測定腸道上皮細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果：①喂飼24周末時，大鼠肝組織HE染色結(jié)果顯示：模型組大鼠出現(xiàn)明顯的肝細(xì)胞脂肪變、氣球樣變和部分炎癥細(xì)胞浸潤，證實(shí)了給予高脂飲食成功建立了非酒精性脂肪性肝炎大鼠模型。②大鼠體重、肝濕重和肝指數(shù)(肝濕重/體重×100%)：24周末稱重，模型組大鼠的體重、肝重、肝指數(shù)較對照組均明顯增高（567.60±18.89vs460.71±14.71,19.68±2.68vs11.53±0.98,3.47±0.43vs2.5±0.12, P0.05）。③血清生化指標(biāo)：模型組血清ALT, AST, TG水平較對照組水平明顯增高(103.44±8.41vs39.10±9.37,276.95±25.06vs145.37±15.19,0.93±0.14vs0.54±0.10, P0.05)。④模型組血清內(nèi)毒素水平較對照組相比顯著增高（0.3600±0.0293vs0.1747±0.0121, P 0.05）。⑤血清D-乳酸水平：模型組大鼠血清D-乳酸水平較對照組相比顯著增高（0.375±0.0353vs0.182±0.0107, P0.05）。⑥肝臟組織病理學(xué)特點(diǎn)：對照組大鼠未見肝細(xì)胞脂肪變或氣球樣變，少數(shù)大鼠肝組織光鏡下可見少量炎性細(xì)胞浸潤；模型組大鼠肝細(xì)胞內(nèi)均可見充滿大量脂肪空泡，，肝細(xì)胞氣球樣變，亦可見到程度不等的小葉內(nèi)炎細(xì)胞浸潤，匯管區(qū)炎細(xì)胞浸潤和點(diǎn)灶狀壞死，NAS積分與正常組相比有顯著性差異（6.90±0.57vs0.70±0.48, P0.05）。⑦末端回腸粘膜病理學(xué)改變：對照組大鼠末端回腸黏膜各層結(jié)構(gòu)完整，絨毛排列整齊緊密有序，上皮細(xì)胞形態(tài)未見明顯異常，未見黏膜充血水腫或炎性細(xì)胞浸潤；模型組大鼠末端回腸小腸絨毛疏松，部分萎縮，斷裂缺損，黏膜上皮細(xì)胞脫落，粘膜層部分可見水腫和炎性細(xì)胞浸潤。⑧末端回腸上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)模型組較對照組相比明顯增高（0.609±0.071vs0.407±0.037, P0.05）。⑨Pearson’s相關(guān)性分析分析上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)與血清D-乳酸沒有顯著正相關(guān)，有一定相關(guān)性，r=0.488；凋亡指數(shù)與血清內(nèi)毒素水平有一定相關(guān)性，r=0.397；血清D-乳酸水平與血清內(nèi)毒素水平呈顯著正相關(guān)，r=0.954,P0.05。 結(jié)論： 1NASH大鼠存在腸源性內(nèi)毒素血癥和腸粘膜屏障功能的損傷。 2腸粘膜上皮細(xì)胞凋亡增加可能參與了腸粘膜屏障的損傷，進(jìn)一步加重了腸源性內(nèi)毒素血癥，導(dǎo)致NASH的發(fā)生和進(jìn)展。
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【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R575.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 吳承堂;任永鋒;劉晉峰;張軍花;雷尚通;;L-精氨酸對嚴(yán)重腹腔感染大鼠腸上皮細(xì)胞凋亡的影響[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2007年11期

2 范建高,徐正婕,王國良,丁曉東,田麗艷,鄭曉英;大鼠非酒精性脂肪性肝炎形成過程中血清內(nèi)毒素含量的變化[J];中華肝臟病雜志;2003年02期

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4 周靜,王杉,葉穎江,楊q

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