【摘要】：研究目的基于高脂肪飲食誘導的NAFLD大鼠模型,再分別給予四種膳食飲食包括普通飼料、高脂肪飼料、高碳水化合物飼料和高蛋白質(zhì)飼料,以分組研究。通過檢測不同膳食組大鼠血清短鏈脂肪酸(SCFA)和肝組織勻漿中促炎細胞因子IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-ɑ水平及肝組織中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信號通路的變化情況,從而探討膳食因素的改變對NAFLD發(fā)生發(fā)展的影響以及NAFLD發(fā)病相關機制。研究方法將42只6周齡、體質(zhì)量在140-180g區(qū)間的雄性潔凈級SD大鼠,通過一周時間的適應性喂養(yǎng),隨機分成2個膳食組即對照組(12只)和模型組(30只),對照組采用普通飼料膳食飲食,模型組采用高脂肪飼料膳食飲食。8周后每組各隨機處死6只大鼠,并根據(jù)大鼠肝臟組織形態(tài)學和病理學結果及生化指標確定NAFLD大鼠模型的建立情況。NAFLD大鼠模型成功建立以后,隨機將模型組更換為四種膳食飲食,每組各6只大鼠,即包括普通膳食組、高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組,高脂膳食組繼續(xù)用含高脂肪的飼料喂養(yǎng),其余各組更換膳食飲食,即高蛋白膳食組采用高蛋白質(zhì)飼料膳食飲食,高糖膳食組采用高碳水化合物飼料膳食飲食,普通膳食組采用普通飼料膳食飲食。于12周末處死大鼠。采用HE染色方法觀察大鼠鏡下肝組織結構的改變;運用生物化學的方法測量大鼠肝勻漿中低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、總膽固醇(TC);運用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法檢測肝組織勻漿白介素IL-6、IL-1β、IL-18、腫瘤壞死因子TNF-ɑ;氣相色譜法檢測血清短鏈脂肪酸(SCFA);運用免疫組織化學(IHC)法測定大鼠肝臟組織中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPKα)原位表達程度;采用實時熒光定量PCR(Real Time-PCR)法測定大鼠肝臟內(nèi)乙酰輔酶A羧化酶(ACC)和羥甲基戊二酸單酰Co A還原酶(HMGR)mRNA轉錄水平。結果1.NAFLD大鼠模型建立結果通過8周的高脂膳食,模型組大鼠的體質(zhì)量、濕肝重及肝指數(shù)較同期對照組明顯增加;模型組肝臟組織勻漿中TC、TG、LDL-C含量較同期對照組明顯升高,HDL-C明顯降低;大鼠肝組織的形態(tài)學及HE染色光鏡下觀察結果均表明模型組大鼠的肝組織脂質(zhì)沉積增加;通過本實驗結果顯示8周的高脂膳食能夠引起肝細胞的脂肪變性,即高脂肪膳食成功誘導建立NAFLD大鼠模型。2.膳食因素干預結果1)肝臟組織形態(tài)學和病理學結果通過觀察大鼠肝臟組織的形態(tài)學表現(xiàn)發(fā)現(xiàn)對照組大鼠的肝臟組織為暗紅色,肝臟質(zhì)地柔軟肝緣銳利,無明顯異常改變;普通膳食組大鼠肝臟組織體積稍變大,顏色比正常肝臟暗淡,肝臟表面粗顆粒感,肝邊沿略變鈍,質(zhì)地尚柔軟;高脂膳食組、高蛋白膳食組和高糖膳食組大鼠肝臟體積明顯變大,呈現(xiàn)蒼白色,肝緣變鈍,表面能夠見到結節(jié)及灶狀改變。HE染色鏡下表現(xiàn),對照組大鼠肝組織內(nèi)小葉結構清楚分布整齊,胞質(zhì)均勻,中心可見胞核;普通膳食組仍可見肝組織小葉結構,部分肝組織細胞水腫,細胞內(nèi)能夠看到少量的脂滴空泡,呈輕癥脂肪變;高脂膳食組、高蛋白膳食組和高糖膳食組肝組織小葉分布不清,界線與結構不清楚,胞質(zhì)疏散,肝索結構混亂,肝臟細胞腫脹明顯,呈氣球樣改變,胞質(zhì)中出現(xiàn)大小不一的脂滴,表現(xiàn)為中-重癥脂肪變。2)肝臟組織生化指標檢測結果與對照組對比,高脂膳食組、高糖膳食組、高蛋白膳食組和普通膳食組大鼠肝臟組織勻漿中TG,TC,LDL-C含量增加,HDL-C降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與普通膳食組相比較,高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組大鼠肝臟組織勻漿中TC,TG,LDL-C含量增加,HDL-C降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3)血清中SCFA水平高脂膳食組、高糖膳食組、高蛋白膳食組和普通膳食組與對照組比較,大鼠血清中總SCFAs水平和乙酸鹽水平均增高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),丙酸鹽和丁酸鹽水平無明顯差異;高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組與普通膳食組比較,大鼠血清中總SCFAs水平和乙酸鹽水平均增高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),丙酸鹽和丁酸鹽水平無明顯差異。4)肝臟組織IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-ɑ濃度與同期對照組對比,高脂膳食組、高糖膳食組、高蛋白膳食組和普通膳食組肝組織勻漿IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-ɑ水平均升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與同期普通膳食組相比,高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組肝組織勻漿IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-ɑ水平均升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。5)肝臟組織中AMPK-α2和p-AMPKα表達水平高脂膳食組、高糖膳食組、高蛋白膳食組和普通膳食組與同期對照組比較,大鼠肝臟組織中AMPK-α2和p-AMPKα表達水平均降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組與同期普通膳食組比較,大鼠肝臟組織中AMPK-α2和p-AMPKα表達水平均降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。6)肝臟組織中ACC和HMGR mRNA轉錄水平高脂膳食組、高糖膳食組、高蛋白膳食組和普通膳食組與對照組相比,大鼠肝臟組織勻漿中ACC及HMGR mRNA轉錄水平均增高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組與普通膳食組比較,大鼠肝臟組織勻漿中ACC及HMGR mRNA的轉錄水平均增高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論1.通過8周的高脂膳食可以誘導形成NAFLD大鼠模型,表明長期的高脂膳食飲食能夠引起肝組織細胞脂質(zhì)沉積,誘發(fā)肝細胞的脂肪變性。2.高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組大鼠血清中乙酸鹽水平和總SCFAs水平均升高,而丙酸鹽和丁酸鹽水平無明顯差異;提示SCFA可能對NAFLD發(fā)病產(chǎn)生一定影響,其中乙酸鹽可能對NAFLD的病理進展過程產(chǎn)生重要影響。3.高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組大鼠肝臟組織勻漿中促炎細胞因子IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-ɑ含量明顯增加,表明炎性細胞因子IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-ɑ促進了NAFLD肝臟組織的慢性低度炎性反應過程的發(fā)生發(fā)展。4.高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組肝臟組織中AMPK-α2和p-AMPKα表達水平降低,而高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組肝組織勻漿中ACC及HMGR mRNA的轉錄水平增高,提示AMPK活性及ACC和HMGR的轉錄水平能夠?qū)Ω闻K細胞脂質(zhì)調(diào)節(jié)過程產(chǎn)生影響,從而影響NAFLD的發(fā)生發(fā)展過程。5.膳食模式的變化如高脂肪、高碳水化合物和高蛋白質(zhì)等飲食危險因素均可加重NAFLD炎癥反應過程的發(fā)展,表明高脂肪、高碳水化合物和高蛋白質(zhì)等不合理的飲食結構是NAFLD的患病危險因素。
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【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R575

【參考文獻】

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本文編號：2422607