【摘要】：背景與目的：急性肝損傷(Acute liver injury)是臨床較為常見、嚴重影響人類健康的全球危害性疾病。外界有毒物質、病原微生物以及藥物等均可能造成急性肝損傷,該疾病表現為：短時間內肝細胞出現壞死、出血,血清谷丙/草轉氨酶及細胞因子急劇升高,累積多臟器功能障礙,嚴重至肝功能衰竭。目前對于急性肝損傷的機制仍然不明確。越來越多的證據表明肝臟由于其雙重血供,該器官其實也是一個特殊的免疫耐受微環(huán)境。研究表明導致肝損傷的原因并非是外界物質的直接作用,而是表達在受感染的肝臟細胞表面針對抗原所產生的免疫應答導致嚴重的免疫失衡,繼而產生大量的炎癥因子致使肝損傷發(fā)生直至嚴重的多器官功能障礙。CD24是一種人和鼠中多種細胞表面表達的、具有多種不同生物學功能的低分子量的細胞表面膜蛋白。CD24分子被證實調控了自身反應性T細胞和抑制抗原遞呈及T細胞活化作用。刀豆蛋白A誘導的肝損傷模型較為真實的模擬急性免疫性肝損傷的體內過程。然而CD24分子在刀豆蛋白A誘導的急性肝損傷中的作用尚未報道。本論文的主要研究內容概括如下：一、CD24缺陷小鼠與同窩野生型小鼠在刀豆蛋白A誘導的急性肝損傷模型中肝損傷程度(包括肝臟病理、血清ALT水平和細胞因子表達水平)的差別。二、研究造成差別的免疫機制(包括肝臟細胞亞群和相關細胞信號通路)。方法：通過尾靜脈注射刀豆蛋白A建立小鼠急性肝損傷模型,比較CD24缺陷小鼠及同窩野生型小鼠在刀豆蛋白A誘導的急性肝損傷程度(包括肝臟病理、血清ALT水平和細胞因子表達水平)的差異。檢測肝臟及脾臟中CD4+T及CD8+T細胞表面CD24表達的表達水平。檢測CD24缺陷小鼠和對照組小鼠T細胞的成熟情況。確認CD24缺陷小鼠導致急性肝損傷差異的細胞來源(胞內染色確定CD4+、CD8+T和NKT細胞釋放IFN-γ)。再通過過繼轉輸實驗體內確定急性肝損傷差異的免疫細胞來源。通過刀豆蛋白A、抗CD3/CD28抗體及PMA/Ionomycin體外刺激CD24缺陷小鼠及對照小鼠T細胞,確認產生IFN-γ差異的T細胞。通過Western blot方法分析CD24缺陷小鼠及對照小鼠在刀豆蛋白A作用后,肝臟及脾臟T細胞相關信號通路的差異,尋找相關的信號分子。結果：(1)刀豆蛋白A刺激后使T細胞上CD24分子表達明顯上調;(2)體內實驗表明刀豆蛋白A對CD24缺陷小鼠所造成的肝損傷程度明顯低于野生型小鼠;(3)體內實驗和體外實驗均證實,在刀豆蛋白A造成肝損傷情況下,CD24缺陷的CD4+T細胞所分泌的IFN-γ較少；(4)在刀豆蛋白A誘導的肝損傷后,CD24缺陷小鼠肝臟STAT1磷酸化明顯降低。結論：我們通過構建T細胞介導的刀豆蛋白A肝損傷模型,證實CD24缺陷小鼠在刀豆蛋白A肝損傷模型中的保護肝臟損傷的效應及機制,證實CD24缺陷小鼠通過降低肝臟細胞STAT1磷酸化來降低CD4+T分泌IFN-γ介導刀豆蛋白A作用后的肝損傷減輕作用,為臨床治療急性肝損傷提供潛在的治療靶點。
[Abstract]:BACKGROUND & OBJECTIVE: Acute liver injury (acute liver injury) is a kind of global harmful disease which is more common in clinic and has a serious effect on human health. Acute liver injury can be caused by external toxic substances, pathogenic micro-organisms and drugs, and the disease is manifested as the occurrence of necrosis of the liver cells in a short time, the bleeding of the liver cells, the rapid increase of the serum glutamic acid/ grass transaminases and the cytokines, the accumulation of the multi-organ dysfunction, and the serious to the liver failure. The mechanism for acute liver injury is still unclear. An increasing number of evidence suggests that the liver is a special immune tolerance microenvironment due to its double blood supply. Studies have shown that the cause of liver injury is not a direct effect of external substances, but that the expression of an immune response to an antigen on the surface of an infected liver cell leads to a serious immune imbalance, In turn, a large number of inflammatory factors are produced that cause liver injury to occur until severe multiple organ dysfunction occurs. CD24 is a low-molecular-weight cell surface membrane protein that is expressed in a variety of cell surfaces in a human and a mouse and has a variety of different biological functions. The CD24 molecules were confirmed to regulate the self-reactive T cells and to inhibit the antigen-presenting and T-cell activation. The model of liver injury induced by bean protein A is a real model for simulating the in-vivo process of acute immune liver injury. However, the role of CD24 in acute liver injury induced by bean protein A has not been reported. The main contents of this thesis are as follows: 1. The difference of the degree of liver injury (including liver pathology, serum ALT level and the level of cytokine expression) in the model of acute liver injury induced by CCD24-deficient mice and the wild-type mice in the same fossa. II. The immune mechanism (including the subpopulation of the liver and the relevant cell signal pathway) of the differential was studied. Methods: The model of acute liver injury in mice was established by tail vein injection of the bean protein A, and the difference of the degree of acute liver injury (including liver pathology, serum ALT level and the level of cytokine expression) induced by CD24 deficient mice and the wild-type mice in the same fossa was compared. The expression level of CD4 + T and CD8 + T cell surface CD24 in the liver and spleen was detected. The maturation of T cells in the CD24-deficient mice and the control group was detected. It was confirmed that the CD24 deficient mice lead to a different cell source for acute liver injury (intracellular staining to determine CD4 +, CD8 + T, and NKT cells to release IFN-1). and the source of the immune cells of the difference of the acute liver injury is determined through the adoptive transfer experiment body. The T cells of the IFN-P difference were confirmed by the in vitro stimulation of the CD24 deficient mice and the control mouse T cells by the knife-bean protein A, the anti-CD3/ CD28 antibody, and the PMA/ Ionone in vitro. Western blot was used to analyze the difference of the signal pathways between the liver and the spleen T cells and to find relevant signal molecules in the mice of CD24 and control mice after the action of the knife-bean protein A. Results: (1) The expression of CD24 on T-cells was up-regulated after the stimulation of the knife-bean protein A; (2) in-vivo experiments, the degree of liver injury of the CD24-deficient mice was significantly lower than that of the wild-type mice; and (3) in vivo and in vitro experiments were confirmed. In the case of the liver injury caused by the bean protein A, the number of IFN-1 secreted by the CD4 + T cells of the CD24 deficiency was less; and (4) after the liver injury induced by the bean protein A, the phosphorylation of the STAT1 in the liver of the CD24 deficient mice was significantly reduced. Conclusion: We have confirmed the effect and mechanism of CD24-deficient mice in the protection of liver injury in the model of liver injury of the bean protein A by constructing a T cell-mediated liver injury model of the bean-bean protein A. It is confirmed that the CD24-deficient mice can reduce the liver injury and reduce the liver injury after the action of the CD4 + T-secreting IFN-1-mediated bean protein A by reducing the phosphorylation of the STAT1 in the liver cells, thereby providing a potential therapeutic target for the clinical treatment of the acute liver injury.
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R575

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 童英,閻向東,吳少平,姚小曼;乙醇急性肝損傷敏感指標的研究[J];中華預防醫(yī)學雜志;2000年03期

2 陸祖福,黃芳,汪家梨,曾毅丹,吳小南;慈菇對鎘致小鼠急性肝損傷的保護作用[J];福建醫(yī)科大學學報;2001年02期

3 張偉,楊建輝;中醫(yī)藥抗急性肝損傷的研究近況[J];江西中醫(yī)藥;2005年06期

4 黎創(chuàng)幸;;三黃制劑對小鼠急性肝損傷的影響[J];現代食品與藥品雜志;2006年03期

5 楊坤;韓燕全;魯小杰;張東升;楊新波;黃正明;;芹龍顆�？辜毙愿螕p傷的實驗研究[J];解放軍藥學學報;2007年05期

6 單靜喜;任江;姜樹民;;急性肝損傷研究近況[J];遼寧中醫(yī)藥大學學報;2008年01期

7 楊莉莉;董文;賀巾超;任秀寶;顏煒群;;重組牛胰蛋白酶抑制劑對小鼠急性肝損傷的保護作用[J];中國藥理學通報;2008年04期

8 李俊松;余宗亮;王明艷;蔡寶昌;;山茱萸炮制前后對小鼠急性肝損傷保護作用的研究[J];南京中醫(yī)藥大學學報;2008年04期

9 何光力;劉潔;潘嘉;艾麗;彭龍玲;;肝舒膠囊對急性肝損傷動物的保護作用[J];華西藥學雜志;2009年06期

10 姚瑩華;劉強;陳育堯;孫學剛;呂志平;;丹參多糖對小鼠急性肝損傷的保護作用[J];中國實驗方劑學雜志;2010年06期

相關會議論文 前10條

1 王俊平;楊穎;李紅霞;張瑾;馮秋玲;;急性肝損傷鼠~(13)C-美沙西丁呼氣試驗的研究[A];中華醫(yī)學會第七次全國消化病學術會議論文匯編（下冊）[C];2007年

2 胡建平;趙詩云;;肝復康片對小鼠急性肝損傷的保護作用[A];首屆江西省科協(xié)學術年會江西省中醫(yī)藥學術發(fā)展論壇論文集[C];2010年

3 李娟;張逢源;李江;閆乾順;姚遙;;多枝檉柳醇提物對小鼠急性肝損傷的保護作用[A];2013年中國藥學大會暨第十三屆中國藥師周論文集[C];2013年

4 李三強;杜景霞;朱沙;;熱休克預處理對對乙酰氨基酚所致小鼠急性肝損傷的保護作用[A];2013年（第三屆）中國藥物毒理學年會暨藥物非臨床安全性評價研究論壇論文摘要[C];2013年

5 劉雋;黃建釗;范偉;張毅;張瑩;石承先;張德林;馮新富;宋陸軍;秦新裕;;骨髓細胞移植治療小鼠急性肝損傷的實驗研究[A];2007年貴州省醫(yī)學會外科分會學術年會論文匯編[C];2007年

6 李秋影;李欣欣;莫紅梅;曹晶;周水平;郭志昕;;水飛薊賓及卵磷脂抗小鼠急性肝損傷研究[A];2010年中國藥學大會暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

7 呂正兵;李謙;葉波平;邊杉;王穎;阮期平;吳梧桐;;鯊肝活性肽對對乙酰氨基酚致小鼠急性肝損傷的保護作用[A];華東六省一市生物化學與分子生物學會2003年學術交流會論文摘要集[C];2003年

8 李燕君;尚芳紅;王森弘;李莉;徐曉玉;;銀天顆粒對小鼠急性肝損傷保護作用研究[A];化學與創(chuàng)新藥物——2013年中國化學會產學研合作研討會會議論文集[C];2013年

9 王春妍;胡東勝;;大承氣湯對急性肝損傷大鼠腸源性內毒素血癥的干預作用[A];第十八次全國中西醫(yī)結合肝病學術會議論文匯編[C];2009年

10 王春妍;曹武奎;李海;;核因子-κB在急性肝損傷中作用及機制研究[A];第一屆全國疑難重型肝病大會、第四屆全國人工肝及血液凈化學術年會論文集[C];2008年

相關博士學位論文 前10條

1 鄭晨宏;CD24分子在刀豆蛋白A誘導小鼠急性肝損傷中的作用及機制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2016年

2 鄒珊珊;β-連環(huán)蛋白在TNF-α和Fas誘導急性肝損傷中的雙重作用機制研究[D];第二軍醫(yī)大學;2013年

3 郭尹玲;從“濕熱變證”論治急性肝損傷的動物實驗研究及機制初探[D];成都中醫(yī)藥大學;2010年

4 劉文軍;嚴重創(chuàng)傷后腎缺血再灌注與急性肝損傷的保護性研究[D];昆明醫(yī)學院;2008年

5 詹亦貝;5'-AMP對哺乳動物急性肝損傷保護作用的研究[D];南京理工大學;2014年

6 王春妍;急性肝損傷腸源性內毒素血癥的基礎研究及藥物干預[D];吉林大學;2007年

7 劉雋;骨髓細胞移植治療小鼠急性肝損傷的實驗研究[D];復旦大學;2007年

8 趙冰潔;加味達原飲對急性肝損傷濕邪內蘊證模型大鼠的治療作用研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2011年

9 張偉;黃連素減輕缺氧無血清誘導的骨髓間充質干細胞凋亡以及減輕四氯化碳誘導的急性肝損傷[D];南京醫(yī)科大學;2010年

10 趙正保;抗腸源性內毒素藥物《雙利肝》的藥學研究[D];山西醫(yī)科大學;2005年

相關碩士學位論文 前10條

1 宋昊;草蓯蓉乙醇提取物對撲熱息痛誘導小鼠急性肝損傷的保護作用[D];延邊大學;2015年

2 齊軍;4-苯基丁酸對四氯化碳誘導小鼠急性肝損傷的影響[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

3 李琰;渥曼青霉素對LPS/D-GalN誘導急性肝損傷中肝組織壞死、凋亡及自噬的影響[D];山東大學;2015年

4 閆春雷;急性肝損傷大鼠肝臟11β-HSD1基因和蛋白質表達的變化及其與轉氨酶相關性研究[D];山東大學;2015年

5 劉德明;水飛薊賓對α-鵝膏毒肽所致小鼠急性肝損傷的保護作用研究[D];廣東藥學院;2015年

6 陶英賢;左卡尼汀對丙戊酸鈉誘導的大鼠急性肝損傷的保護作用研究[D];佳木斯大學;2015年

7 許元寶;脂多糖預處理減輕對乙酰氨基酚所致急性肝損傷[D];安徽醫(yī)科大學;2014年

8 卞晶晶;骨髓間充質干細胞移植對急性肝損傷的治療作用與NF-κB和CUGBP1的表達[D];青島大學;2015年

9 龐文簫;蟬翼藤提取物甲基阿魏酸對四氯化碳急性肝損傷小鼠模型保護作用及其機制研究[D];桂林醫(yī)學院;2015年

10 車倩;糖酵解抑制劑2-脫氧葡萄糖減輕LPS/D-Gal誘導的急性肝損傷[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

，

本文編號：2370474