【摘要】：目的：基因變異在IBD發(fā)病的病因機(jī)制中發(fā)揮了較重要的作用,西方國(guó)家關(guān)于1BD的研究已經(jīng)報(bào)道了100多個(gè)易感基因位點(diǎn),但是目前尚無(wú)研究報(bào)道中國(guó)人群的IBD易感基因。本研究以一個(gè)父女同患CD的漢族家庭為切入點(diǎn),采用全外顯子測(cè)序等先進(jìn)技術(shù)方法進(jìn)行基因分析,以期尋找中國(guó)IBD的致病基因或新的易感基因位點(diǎn),同時(shí)對(duì)中國(guó)家系IBD患者的臨床特征與西方患者進(jìn)行比較,評(píng)估中國(guó)家系IBD患者發(fā)病的危險(xiǎn)因素。 方法：收集家族發(fā)病的IBD患者及其家族成員的病史資料,進(jìn)行遺傳學(xué)和流行病學(xué)分析。比較家系患者和散發(fā)IBD患者的臨床特征。篩選驗(yàn)證已知IBD基因IL10RA、ILIORB、NOD2(包含702、908、1007等易感位點(diǎn))、X1AP上的7個(gè)位點(diǎn)。源自同一個(gè)漢族家庭家系1的4個(gè)DNA樣本(2例CD患者,2例為正常對(duì)照)經(jīng)全外顯子測(cè)序,得到的基因數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)生物信息學(xué)分析、多重?cái)?shù)據(jù)厙過(guò)濾篩選,縮小候選基因范圍,這些潛在的風(fēng)險(xiǎn)基因先在外顯子測(cè)序患者的10例家系成員中進(jìn)行Sanger測(cè)序驗(yàn)證“共分離”,然后再在大樣本人群中(401例健康對(duì)照、278例散發(fā)CD患者和123例散發(fā)uC患者)進(jìn)行飛行質(zhì)譜基因分型驗(yàn)證,經(jīng)過(guò)生物信息學(xué)分析,最終鎖定風(fēng)險(xiǎn)基因。 結(jié)果：流行病學(xué)研究顯示發(fā)現(xiàn)有一項(xiàng)生活壓力事件即移居至一個(gè)新環(huán)境對(duì)家系IBD患者的發(fā)病產(chǎn)生顯著影響,是IBD患病的一項(xiàng)風(fēng)險(xiǎn)因素。IBD家系患者平均診斷年齡比中國(guó)大陸的一般的IBD患者總體年齡更年輕,但跟兩方的患者相比,發(fā)病及診斷年齡卻相對(duì)較晚。中國(guó)患者的腸外表現(xiàn)和并發(fā)癥如肛周疾病和瘺管的發(fā)生更少見(jiàn),手術(shù)干預(yù)治療也較少見(jiàn)。對(duì)10個(gè)IBD家系患者進(jìn)行Sanger測(cè)序,發(fā)現(xiàn)他們都不攜帶已知IBD基因及位點(diǎn),甚至在相應(yīng)外顯子區(qū),這7個(gè)位點(diǎn)附近的基因序列中也未檢測(cè)到變異。經(jīng)過(guò)家系系譜圖分析,家系2、3、4可能為多基因遺傳方式,家系1為常染色體隱性遺傳的可能性較大,可假設(shè)為單基因遺傳方式進(jìn)行研究。外顯子測(cè)序后,得到的基因數(shù)據(jù)縮小候選基因范圍至22個(gè)基因,未發(fā)現(xiàn)已報(bào)道的IBD易感基因位點(diǎn)。經(jīng)過(guò)“共分離”和飛行質(zhì)譜基因分型驗(yàn)證等分析,最終鎖定兩個(gè)風(fēng)險(xiǎn)基因：PDCL和DLG1。進(jìn)一步對(duì)25個(gè)難治的年輕CD患者進(jìn)行PDCL和DLG1基因全外顯子區(qū)的Sanger測(cè)序驗(yàn)證后發(fā)現(xiàn)：無(wú)1例患者攜帶PDCL基因全外顯子區(qū)的任何突變；有2例患者攜帶DLGI基因外顯子9的一個(gè)突變(c.833GA. p.R278Q)。通過(guò)追蹤這2例患者和他們的家庭成員的病史,進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)了其中一例男性CD患者的兩個(gè)堂姐妹和他的一個(gè)哥哥的回腸末端均有潰瘍,病理組織學(xué)顯示非特異性慢性炎癥,而且均被Sanger測(cè)序證實(shí)攜帶DLG1基因第9外顯子的R278Q (c.833GA)變異。另外一對(duì)同患CD的雙胞胎兄弟和另一對(duì)同患UC的姐妹均不攜帶DLG1基因所有25個(gè)外顯子區(qū)的任何一個(gè)突變。 結(jié)論：本研究首次報(bào)道了DLG1基因可能為中國(guó)漢族克羅恩病家系發(fā)病的一個(gè)新的易感基因。本研究報(bào)道了中國(guó)人群IBD的家族聚集性,首次報(bào)道了中國(guó)雙生子同患CD。中國(guó)IBD家系患者與西方患者在流行病學(xué)特征上有共性,也有特性,基因易感性有種族差異,也可能還存在其它的與疾病相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)基因。
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【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R574

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2356415