【摘要】：目的:蛋白酶激活受體-2(Proteinase-actived receptors-2，PAR-2)屬于七次跨膜的G蛋白偶聯(lián)受體，胰蛋白酶、肥大細(xì)胞釋放的類胰蛋白酶以及人工合成的多肽SLIGRL-NH2、SLIGKV-NH2都可激活該受體。PAR-2受體在胃腸道廣泛表達(dá)，除與胃腸道上皮細(xì)胞的離子轉(zhuǎn)運(yùn)、內(nèi)臟敏感性等功能有關(guān)外，還與胃腸動(dòng)力的調(diào)控密切相關(guān)，但具體的調(diào)控機(jī)制尚未明確。本實(shí)驗(yàn)研究PAR-2mRNA及蛋白在小鼠胃腸道的表達(dá)情況及PAR-2激動(dòng)劑對(duì)小鼠胃腸動(dòng)力的影響，并著重探討PAR-2激活后對(duì)小鼠離體回腸縱行肌收縮振幅的影響及其相關(guān)作用機(jī)制。 方法: 1分別通過(guò)RT-PCR及免疫組織化學(xué)法研究小鼠胃腸道（胃、十二指腸、空腸及回腸）中PAR-2mRNA及蛋白的表達(dá)情況； 2活體實(shí)驗(yàn):將120只雌性BABL/c小鼠隨機(jī)進(jìn)行分組，共分為6組，每組20只，分別為空白對(duì)照組、抑氨肽酶素A對(duì)照組、LRGILS-NH2（5μmol/kg）+抑氨肽酶素A組、SLIGRL-NH2（1μmol/kg）+抑氨肽酶素A組，SLIGRL-NH2（2.5μmol/kg）+抑氨肽酶素A組、SLIGRL-NH2（5μmol/kg）+抑氨肽酶素A組，測(cè)定各組藥物對(duì)小鼠胃內(nèi)色素排空率和小腸推進(jìn)率的影響； 3離體實(shí)驗(yàn):觀察胰蛋白酶、SLIGRL-NH2、LRGILS-NH2及各種預(yù)處理藥品(阿托品、TTX、辣椒素、NK1拮抗劑及NK2受體拮抗劑)作用后對(duì)小鼠回腸縱行肌收縮振幅的影響。 結(jié)果: 1PAR-2mRNA在小鼠消化道（胃、十二指腸、空腸及回腸）均有廣泛表達(dá)；PAR-2在小鼠消化道（胃、十二指腸、空腸及回腸）的粘膜層、粘膜下層、肌層均呈免疫陽(yáng)性反應(yīng)； 2在體實(shí)驗(yàn):PAR-2激動(dòng)劑對(duì)小鼠胃內(nèi)色素排空率和小腸推進(jìn)率的影響 2.1抑氨肽酶素A組與空白對(duì)照組相比，對(duì)小鼠胃內(nèi)色素排空率和小腸推進(jìn)率影響均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）。 2.2與空白對(duì)照組相比，SLIGRL-NH2在2.5μmol/kg及5μmol/kg濃度時(shí)均能顯著提高胃內(nèi)色素排空率和小腸推進(jìn)率（p0.001）。 2.3與空白對(duì)照組相比，LRGILS-NH2即使在5μmol/kg也不能明顯影響小腸推進(jìn)比和胃內(nèi)色素排空率（p0.05）； 3離體實(shí)驗(yàn):PAR-2激動(dòng)劑及相關(guān)工具藥對(duì)小鼠回腸縱行肌收縮振幅的影響。 3.1PAR-2激動(dòng)劑（胰蛋白酶、SLIGRL-NH2）都可以增強(qiáng)小鼠離體回腸縱行肌的自主收縮幅度,并呈現(xiàn)濃度依賴效應(yīng)；PAR-2反肽LRGILS-NH2（10-9-10-5M）對(duì)小鼠離體回腸縱行肌的自主收縮幅度無(wú)明顯影響。 3.2阿托品對(duì)PAR-2引起的回腸縱行肌收縮的增強(qiáng)效應(yīng)無(wú)明顯影響。 3.3TTX對(duì)PAR-2引起的回腸縱行肌收縮的增強(qiáng)效應(yīng)的影響:TTX（2uM）預(yù)處理30min+胰蛋白酶組與胰蛋白酶組相比，明顯降低了小鼠回腸縱行肌收縮幅度振幅（p0.05）；與此類似的是TTX（2uM）預(yù)處理30min+SLRGIL-NH2組與SLRGIL-NH2組相比，也明顯降低了小鼠回腸縱行肌收縮振幅（p0.05）。 3.4辣椒素對(duì)PAR-2引起的回腸縱行肌收縮的增強(qiáng)效應(yīng)的影響：辣椒素（10-4M）預(yù)處理30min+胰蛋白酶組與胰蛋白酶組相比，明顯降低了小鼠回腸縱行肌收縮振幅（p0.05）；辣椒素（10-4M）預(yù)處理30min+SLRGIL-NH2組與SLRGIL-NH2組相比，也明顯降低了小鼠回腸縱行肌收縮振幅（p0.05）。 3.5NK1及NK2受體對(duì)PAR-2引起的回腸縱行肌收縮的增強(qiáng)效應(yīng)的影響:sc-203095（1uM）預(yù)處理30min+胰蛋白酶組與胰蛋白酶組相比，明顯降低了小鼠回腸縱行肌收縮振幅（p0.05）；MEN10376（1uM）預(yù)處理30min+胰蛋白酶組與胰蛋白酶組相比，明顯降低了小鼠回腸縱行肌振幅（p0.05）；sc-203095（1uM）、MEN10376（1uM）預(yù)處理30min+胰蛋白酶組與胰蛋白酶組相比，明顯降低了小鼠回腸縱行肌振幅（p0.05）；sc-203095（1uM）預(yù)處理30min+SLRGIL-NH2組與SLRGIL-NH2組相比,明顯降低了小鼠回腸縱行肌收縮振幅（p0.05）；MEN10376組（1uM）預(yù)處理30min+SLRGIL-NH2組與SLRGIL-NH2組相比，，明顯降低了小鼠回腸縱行肌收縮振幅（p0.05）；sc-203095（1uM）、MEN10376（1uM）預(yù)處理30min+SLRGIL-NH2組與SLRGIL-NH2組相比，明顯降低了小鼠回腸縱行肌收縮振幅（p0.001）。 結(jié)論: 1PAR-2在小鼠的胃腸道（胃、十二指腸、空腸、回腸）中呈廣泛表達(dá)狀態(tài)，與小鼠胃腸動(dòng)力的調(diào)控密切相關(guān)。 2在活體實(shí)驗(yàn)中PAR-2激活后能夠明顯的促進(jìn)小鼠胃腸道食物的通過(guò)。 3在離體實(shí)驗(yàn)中PAR-2激動(dòng)劑能明顯增強(qiáng)小鼠離體回腸縱行肌的收縮振幅，并且這種增強(qiáng)作用與神經(jīng)有關(guān)，主要涉及TRPV1敏感的感覺(jué)神經(jīng)通路及NK1和NK2受體。
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【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R57

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 段園志;唐旭東;王鳳云;馬祥雪;;PAR-2信號(hào)通路與功能性胃腸病[J];世界華人消化雜志;2017年13期

本文編號(hào)：2347307