【摘要】：重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)是臨床常見的一種急腹癥,起病急、并發(fā)癥多。在SAP時,細菌可通過受損的腸粘膜移位引起的繼發(fā)感染起著至關(guān)重要的作用。研究發(fā)現(xiàn),SAP時腸黏膜屏障功能受到損傷,腸黏膜的通透性增高,腸道內(nèi)毒素及細菌容易發(fā)生移位,甚至敗血癥,誘發(fā)和加重全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)、多器官功能障礙綜合癥(Multiple organ dysfunction syndrome,MODS),這是導致SAP死亡的主要原因。SAP時腸黏膜屏障功能的作用至關(guān)重要。研究影響腸黏膜屏障功能的因素,減少腸黏膜屏障功能的損傷,對SAP的治療很有幫助。近年來生長因子在SAP的發(fā)生發(fā)展過程中的作用越來越引起人們的重視。生長因子(growth factor)是一類多肽類物質(zhì),能與親和力高的、特異的細胞膜受體結(jié)合,調(diào)節(jié)細胞生長與其他細胞功能等。生長因子有很多種,如表皮生長因子類(轉(zhuǎn)化生長因子α,表皮生長因子)、類胰島素生長因子(IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、轉(zhuǎn)化生長因子β家族(TGF-β、骨形態(tài)發(fā)生蛋白BMP、活化素、生長分化因子GDF)等。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及生長分化因子(Growth Differentiation Factor,GDF),在急性胰腺炎中的作用越來越受重視,VEGF能增加血管通透性,促進血管內(nèi)皮細胞的增殖,在刺激生長和病理性血管新生中起主要作用。GDF在多種病理及生理情況下,發(fā)揮促凋亡、抗腫瘤的作用,他們在SAP時腸黏膜損害中的作用研究較少。目的:本實驗旨在通過測定VEGF,GDF-9、GDF-15蛋白及m RNA在SAP大鼠小腸中的表達情況,分析VEGF,GDF-9、GDF-15在重癥急性胰腺炎大鼠腸黏膜屏障中的水平變化;并通過分析應(yīng)用NOD通路抑制劑二甲基苯甲酰羥甲酮(Caspase-1抑制劑)預(yù)處理后的小腸VEGF,GDF-9、GDF-15的變化,初步探討VEGF,GDF-9、GDF-15在重癥急性胰腺炎腸黏膜屏障中的意義。方法:將60只SD大鼠隨機分成假手術(shù)(N)組、急性胰腺炎(SAP)組和急性胰腺炎+Caspase-1抑制劑(SC)組,各組再分為6 h、12 h 2個亞組,每個亞組各10只,應(yīng)用5%�；悄懰徕c逆行注入胰管內(nèi)的方法制作動物模型。分別在造模后6 h、12 h留取胰腺、血、回腸,進行HE染色,觀察胰腺及腸道的組織病理學變化,應(yīng)用ELISA方法檢測血漿中D-乳酸水平以評價腸黏膜通透性,應(yīng)用Western-blot、RT-PCR的方法觀察比較三組VEGF,GDF-9、GDF-15蛋白及m RNA的表達的異同。結(jié)果:1胰腺組織的病理評分:HE染色結(jié)果示:N組大鼠6h的胰腺組織細胞形態(tài)大致正常,12 h偶見細胞水腫;SAP組胰腺組織可見炎性反應(yīng)、組織充血水腫、出血及壞死灶,12 h比6 h更明顯;SC組胰腺病變較SAP組輕,可見較少炎癥細胞浸潤、出血及壞死灶;病理學評分示,SAP組、SC組各時間點胰腺的病理學評分與N組比較,評分升高(P0.01),SC組與SAP組比較評分減低,6 h組與12 h組均有統(tǒng)計學意義(P0.01),SAP、SC組組胰腺病理評分12 h組比6 h組顯著增高(分別P0.01,P0.05),N組6 h與12 h時間點相比,沒有顯著差異(P0.05)。2腸道病理評分:N組大鼠腸黏膜結(jié)構(gòu)正常,無炎癥細胞浸潤;SAP組大鼠可見絨毛及上皮層壞死脫落,可見炎癥細胞浸潤;SC組可見較少炎癥細胞浸潤,偶見上皮及絨毛結(jié)構(gòu)不完整;SAP組和SC組與N組相比,評分顯著升高(P0.01);SC組較SAP組病理學變化減輕,評分降低(P0.01);N、SC組6 h與12 h相比,沒有顯著差異(P0.05),SAP組12 h時間點高于6 h(P0.05)。3血漿D-乳酸水平:N組的6 h與12 h之間相比,沒有顯著差異(P0.05),與N組兩個時間點相比,SAP組大鼠血漿D-乳酸含量均有所升高(P0.01),SC組含量較N組的各個時間點升高(P0.01);SC組各時間點與SAP組相比是顯著下降(P0.01);SAP組和SC組血漿D-乳酸水平12 h組均高于6 h水平(P0.05)。4小腸組織VEGF的表達:Western blot檢測VEGF蛋白的表達情況,SAP組、SC組與N組6 h、12 h相比,蛋白表達均顯著增高(P0.01);SC組與SAP組相比均減低(P0.01);各組6 h與12 h之間相比,SAP、SC組有差異,12 h組表達量高于6 h組(P0.05),N組沒有顯著差異(P0.05)。RT-PCR檢測VEGFm RNA表達情況,SAP組與N組相比,表達均明顯增高(P0.01),SC組與SAP組相比VEGF m RNA表達減低,有統(tǒng)計學意義(P0.05),但較N組6 h、12 h表達增高(分別P0.05,P0.01)。各組6 h與12 h之間相比,SAP、SC組有差異,12 h組表達量高于6 h組(P0.05),N組沒有顯著差異(P0.05)。5小腸組織GDF-15的表達:Western blot檢測GDF-15蛋白的表達情況,SAP組、SC組與N組比較,蛋白表達均顯著增高(P0.01);SC組與SAP組相比無明顯改變;各組兩個時間點之間相比,SAP、SC組有差異,6 h組表達量高于12 h組(P0.01),N組沒有顯著差異(P0.05)。RT-PCR檢測GDF-15的表達情況,SAP組、SC組與N組比較GDF-15m RNA表達增高(P0.05),SC組與SAP組相比無明顯差異。各6 h與12 h之間相比,SAP組有差異,6 h組表達量高于12 h組(P0.01),SC、N組沒有顯著差異(P0.05)。6小腸組織GDF-9的表達:Western blot檢測GDF-9蛋白的表達情況,SAP組、SC組與N組相比,6 h組、12 h組蛋白表達均增高(P0.01),SC組與SAP組相比,6 h組、12 h組均減低(P0.05);各組兩個時間點之間相比,SC組、SAP組有差異(P0.05),且6h組表達量高于12組,N組沒有顯著差異(P0.05)。RT-PCR檢測GDF-9m RNA表達情況,SAP組、SC組與N組相比,6 h組、12 h組表達均增高(P0.01),SC組與SAP組相比,6 h組、12 h組均減低,有統(tǒng)計學意義(P0.01);各組兩個時間點之間相比,SC組、SAP組有差異(P0.05)且6 h組表達量高于12 h組,N組無明顯差異(P0.05)。7小腸組織VEGF蛋白的表達與血漿中D-乳酸的表達水平呈正相關(guān)。結(jié)論:1 SAP大鼠小腸組織中VEGF、GDF-15、GDF-9呈高表達,為腸黏膜屏障調(diào)節(jié)因子。2 NOD通路抑制劑二甲基苯甲酰羥甲酮(Caspase-1抑制劑)可抑制NOD通路活性減輕胰腺及腸黏膜的損傷,減少腸黏膜VEGF、GDF-9的表達,不影響GDF-15的表達。
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【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R576

【參考文獻】

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本文編號：2328273