【摘要】：目的利用細(xì)胞模型研究非諾貝特在緩解非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的作用及其分子機(jī)制。方法首先以0~0.9mmol/L梯度濃度的油酸處理正常肝細(xì)胞LO2 48h建立脂肪肝細(xì)胞模型;同時(shí),以非諾貝特處理正常細(xì)胞或模型組細(xì)胞48h,然后用CCK-8試劑盒測(cè)定細(xì)胞活力,用油紅O染色觀(guān)察細(xì)胞內(nèi)脂滴形成或抑制情況,利用試劑盒檢測(cè)細(xì)胞中的三酰甘油(TG)以及上清液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平,蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)細(xì)胞中蛋白激酶B(AKT)、p-AKT、FSAN及Nrf2蛋白水平,并使用2′,7′-二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的活性氧自由基(ROS)含量。結(jié)果油酸濃度超過(guò)0.5mmol/L后細(xì)胞活力顯著降低,非諾貝特可抑制高濃度油酸對(duì)細(xì)胞的損傷。油酸處理后細(xì)胞中出現(xiàn)大量脂滴,細(xì)胞內(nèi)TG含量以及上清液中的ALT、AST水平顯著升高,給予非諾貝特處理后細(xì)胞中脂滴減少,TG、ALT和AST含量均顯著降低。油酸處理后細(xì)胞中AKT、p-AKT、FSAN和Nrf2蛋白水平升高,給予非諾貝特可抑制上述蛋白水平的升高。同時(shí),非諾貝特逆轉(zhuǎn)了由油酸導(dǎo)致的細(xì)胞內(nèi)ROS累積。結(jié)論非諾貝特可以抑制油酸引起的脂肪積累,并緩解脂肪累積導(dǎo)致的細(xì)胞損傷,其機(jī)制是通過(guò)下調(diào)AKT/FSAN信號(hào)通路,從而降低ROS水平,進(jìn)而減少ROS導(dǎo)致的細(xì)胞損傷。
[Abstract]:Objective to study the role and molecular mechanism of fenofibrate in relieving (NAFLD) in patients with non alcoholic fatty liver disease. Methods Fatty liver cell model was established by treating normal hepatocytes with oleic acid at gradient concentration of 0~0.9mmol/L for 48h, and normal cells or model cells treated with fenofibrate for 48h, then the cell viability was measured by CCK-8 kit. Oil red O staining was used to observe the formation or inhibition of lipid droplets in cells. The levels of triglyceride (TG) and (ALT), (ALT), in supernatant were detected by Elisa kit. The protein levels of protein kinase B (AKT), p-AKTN FSAN and Nrf2 were detected by Western blot, and the content of reactive oxygen free radical (ROS) in cells was determined by using 2-chloride-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA). Results when the concentration of oleic acid exceeded 0.5mmol/L, the cell viability was significantly decreased, and fenofibrate could inhibit the damage caused by high concentration of oleic acid. After oleic acid treatment, a large number of lipid droplets appeared in cells, and the content of TG and ALT,AST in supernatant increased significantly. After fenofibrate treatment, the lipid droplets in cells decreased, and the contents of TG,ALT and AST decreased significantly. The protein levels of AKT,p-AKT,FSAN and Nrf2 increased after oleic acid treatment, and fenofibrate inhibited the increase. At the same time, fenofibrate reversed the accumulation of ROS in cells induced by oleic acid. Conclusion fenofibrate can inhibit fat accumulation induced by oleic acid and alleviate cell damage induced by lipid accumulation. The mechanism of fenofibrate is to decrease the level of ROS by down-regulating the AKT/FSAN signaling pathway and then to reduce the cell damage induced by ROS.
【作者單位】： 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院;華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院兒科;
【分類(lèi)號(hào)】：R575.5

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本文編號(hào)：2292506