【摘要】：目的探討乙型肝炎病毒剪接特異性蛋白(Hepatitis B spliced protein,HBSP)與轉(zhuǎn)化生長因子1誘導(dǎo)蛋白1(transforming growth factor-β1-induced transcript 1,TGFβ1I1)相互作用對TGFβ1誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelialmesenchymal transition,EMT)的影響。方法構(gòu)建HBSP慢病毒表達(dá)載體,利用293T細(xì)胞包裝慢病毒顆粒,感染Huh7肝癌細(xì)胞株。以5ng/mLTGFβ1分別誘導(dǎo)穩(wěn)定表達(dá)HBSP的慢病毒細(xì)胞株及其對照細(xì)胞株,觀察細(xì)胞形態(tài)的變化,并提取細(xì)胞蛋白,Westernblot檢測上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)志物E-鈣黏素(E-cadherin,E-cad)、緊密連接蛋白(Claudin-1)、β-鏈蛋白(β-catenin)、N-鈣黏素(N-cadherin,N-cad)的變化。進(jìn)而以TGFβ1I1特異性siRNA轉(zhuǎn)染上述細(xì)胞,Westernblot觀察以上指標(biāo)變化情況。最后以侵襲小室實驗和劃痕實驗分別檢測TGFβ1誘導(dǎo)的細(xì)胞侵襲與遷移能力的變化。結(jié)果篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)HBSP的慢病毒細(xì)胞株Huh7-HBSP-flag-HIV及其對照細(xì)胞株Huh7-flag-HIV。以TGFβ1誘導(dǎo)后在顯微鏡下觀察到細(xì)胞形態(tài)由緊密的上皮形態(tài)變?yōu)樗缮⒌拈g質(zhì)形態(tài);特異性抗體檢測表明上皮標(biāo)志物E-cad、Claudin-1、β-catenin表達(dá)量下降,而間質(zhì)標(biāo)志物N-cad表達(dá)上升。侵襲小室實驗和劃痕實驗表明TGFβ1誘導(dǎo)的HBSP表達(dá)株侵襲及遷移能力增強。而轉(zhuǎn)染TGFβ1I1特異性siRNA可逆轉(zhuǎn)以上現(xiàn)象。結(jié)論 HBSP與TGFβ1I1相互作用可促進(jìn)TGFβ1誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化并增強其侵襲遷移能力,提示HBSP在HBV相關(guān)性肝細(xì)胞肝癌發(fā)生發(fā)展中具有重要的致病意義。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of the interaction of hepatitis B virus splicing specific protein (Hepatitis B spliced protein,HBSP) and transforming growth factor-1 (TGF-1) inducible protein 1 (transforming growth factor- 尾 1-induced transcript 1 (TGF- 尾 1I1) on the epithelial interstitial transformation (epithelialmesenchymal transition,EMT) induced by TGF 尾 1 in hepatocellular carcinoma cells. Methods the expression vector of HBSP lentivirus was constructed. The lentivirus particles were packaged by 293T cells and infected with Huh7 hepatoma cell line. Lentivirus cells expressing HBSP stably and their control cells were induced by 5ng/mLTGF 尾 1, respectively, and the morphological changes of the cells were observed. The changes of E-cadherin E-cadherin (E-cad), tight junction protein (Claudin-1), 尾 -catenin (尾 -catenin) and N-cadherin (N-cadherin N-cad) were detected by Western blot. Then, TGF 尾 1I1 specific siRNA was transfected into the above cells by Western blot to observe the changes of the above indexes. Finally, invasive chamber test and scratch test were used to detect the changes of cell invasion and migration induced by TGF 尾 1, respectively. Results Lentivirus cell line Huh7-HBSP-flag-HIV and control cell line Huh7-flag-HIV. were screened for stable expression of HBSP. After induction with TGF 尾 1, it was observed that the cell morphology changed from dense epithelial morphology to loose interstitial morphology under microscope, and the expression of E-cad-Claudin-1, 尾 -catenin was decreased, while the expression of interstitial marker N-cad was increased. Invasive chamber test and scratch test showed that TGF 尾 1 induced invasion and migration of HBSP expression strain. Transfection of TGF 尾 1I1 specific siRNA could reverse the above phenomenon. Conclusion the interaction between HBSP and TGF 尾 1I1 can promote the epithelial mesenchymal transformation induced by TGF 尾 1 and enhance its invasion and migration, suggesting that HBSP may play an important role in the pathogenesis and development of HBV related hepatocellular carcinoma.
【作者單位】： 福建醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 消化道惡性腫瘤省部共建教育部重點實驗室 福建省腫瘤微生物學(xué)重點實驗室
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年基金項目(No.81201293) 福建省衛(wèi)生廳醫(yī)學(xué)創(chuàng)新課題(No.2012-CX-14) 福建省高校杰出青年科研人才培育計劃(No.JA11104) 國家衛(wèi)生和計劃生育委員會共建科學(xué)研究基金-福建省衛(wèi)生教育聯(lián)合攻關(guān)計劃(No.WKJ-FJ-29) 福建省高等學(xué)校新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計劃(No.JA13129) 福建省衛(wèi)生系統(tǒng)中青年骨干人才培養(yǎng)項目(No.2014-ZQN-ZD-25)聯(lián)合資助~~
【分類號】：R512.62;R735.7

【參考文獻(xiàn)】

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1 ;TGF-β1-promoted epithelial-to-mesenchymal transformation and cell adhesion contribute to TGF-β1-enhanced cell migration in SMMC-7721 cells[J];Cell Research;2003年05期

【共引文獻(xiàn)】

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3 陳婉南;黃俊高;梁菲菲;閆小利;軒丹丹;林旭;;乙型肝炎病毒剪接特異性蛋白HBSP與TGFβ1誘導(dǎo)蛋白1相互作用促進(jìn)TGFβ1誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化[J];中國人獸共患病學(xué)報;2017年04期

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6 謝金玲;卓少元;;健脾益氣方含藥血清對人肝癌細(xì)胞SMMC-7721增殖與侵襲能力的影響[J];廣西中醫(yī)藥;2016年01期

7 連嬌燕;庹必光;;轉(zhuǎn)化生長因子β信號通路在肝細(xì)胞癌生物學(xué)行為中的研究進(jìn)展[J];世界華人消化雜志;2015年24期

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9 李浩;吳金術(shù);蔣波;梁中書;;Tip30基因表達(dá)對肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響[J];中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2014年08期

10 王峰;軒小燕;彭方慧;王留興;樊青霞;;食管鱗癌EC-9706細(xì)胞中mTOR信號通路在TGF-β1介導(dǎo)的EMT中的作用[J];腫瘤;2013年02期

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8 洪衛(wèi)國,金磊,劉士敬,王福生;乙型肝炎病毒在家庭內(nèi)感染的調(diào)查[J];中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志;2004年04期

9 何淼;;乙型肝炎病毒的“冤、假、錯”案[J];肝博士;2006年01期

10 姜恩榮;;乙型肝炎病毒宮內(nèi)傳播的研究[J];職業(yè)與健康;2008年03期

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2 楊兵;張莉萍;文陽安;黃世峰;;乙型肝炎病毒X蛋白穩(wěn)定表達(dá)株的構(gòu)建及沉默效果觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗管理專業(yè)委員會第六屆全國臨床檢驗實驗室管理學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

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4 成軍;;乙型肝炎病毒耐藥的研究進(jìn)展[A];第三屆全國重型肝病及人工肝血液凈化學(xué)術(shù)年會論文集（上冊）[C];2007年

5 成軍;;加強乙型肝炎病毒耐藥的認(rèn)識和監(jiān)測[A];第一屆全國疑難重型肝病大會、第四屆全國人工肝及血液凈化學(xué)術(shù)年會論文集[C];2008年

6 黃圓;羅依;譚亞敏;韓曉雁;朱曉黎;施繼敏;謝萬灼;黃河;;異基因造血干細(xì)胞移植中乙型肝炎病毒再激活的臨床研究[A];第七屆全國血液免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會暨2008年浙江省血液病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

7 楊建功;黃兵;錢健幫;何小峰;;乙型肝炎病毒e抗原陰性慢性乙型肝炎預(yù)后的臨床分析[A];第6屆全國疑難及重癥肝病大會論文集[C];2011年

8 傅佳鵬;吳其愷;王平;李煒;李曉良;鄧欣;;164例乙型肝炎病毒耐藥病例耐藥位點的分析[A];第二十次全國中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

9 劉玉剛;梁曉紅;張秋;韓麗輝;高立芬;孫汶生;;不同免疫狀態(tài)的乙型肝炎病毒荷載小鼠肝病發(fā)生的分子機制研究[A];中國免疫學(xué)會第五屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2006年

10 羅依;黃圓;譚亞敏;韓曉雁;朱曉黎;施繼敏;謝萬灼;黃河;;異基因造血干細(xì)胞移植中乙型肝炎病毒再激活的臨床研究[A];中國科協(xié)海峽兩岸學(xué)術(shù)研討會——2008血液腫瘤論壇會議會編[C];2008年

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1 石家莊市第五醫(yī)院婦產(chǎn)科副主任、副主任醫(yī)師 朱寶申;淺談乙型肝炎病毒的父嬰傳播[N];石家莊日報;2009年

2 北京大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室教授 莊輝;單項抗-HBc陽性說明……[N];健康報;2001年

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3 周福平;乙型肝炎病毒慢性感染對細(xì)胞色素P450 2C9表達(dá)的影響[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

4 李金成;健康成人乙型肝炎病毒疫苗接種后無應(yīng)答者免疫功能研究[D];中南大學(xué);2009年

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3 萬靜芳;他克莫司治療乙型肝炎病毒相關(guān)性膜性腎病的隨機對照臨床試驗[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 張婷玉;乙型肝炎病毒中國流行株C基因型穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞模型的評價與應(yīng)用[D];河南中醫(yī)學(xué)院;2015年

5 丁曉琳;乙型肝炎病毒基因型及其核心啟動子/前核心區(qū)變異的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

6 周率;Rituximab聯(lián)合化療治療的NHL患者中乙型肝炎病毒再激活風(fēng)險的Meta分析[D];華東師范大學(xué);2015年

7 袁松松;乙型肝炎病毒e抗原在HBV感染過程中作用機制的研究[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2015年

8 鄭亢;IL-10受體基因多態(tài)性與慢性HBV感染的遺傳易感性研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

9 葉嬌嬌;中腦星形膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子蛋白表達(dá)水平與乙型肝炎病毒慢性感染后疾病進(jìn)展的相關(guān)性[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

10 朱惠娟;糖尿病與乙型肝炎病毒感染的相關(guān)性研究[D];蘇州大學(xué);2016年

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本文編號：2225134