【摘要】：大多數(shù)食物過敏原的理化性質(zhì)決定了蛋白質(zhì)在消化道中的穩(wěn)定性。模擬胃液(simulated gastric fluid,SGF)的穩(wěn)定性是評(píng)估食物過敏的一個(gè)重要參數(shù)。為了解一種主要的魚類過敏原小清蛋白(parvalbumin,PV)與來自鯉魚(Cyprinus carpio)和鰱魚(Hypophthalmichthys molitrix)肌肉中的非致敏性蛋白在SGF和模擬腸液(simulated intestinal fluid,SIF)中的穩(wěn)定性差異,本研究采用3種蛋白水解酶(胃蛋白酶、胰蛋白酶和來自豬的胰凝乳蛋白酶)來模擬人(Homo sapiens)體腸道的消化蛋白酶;結(jié)合兩次三氯乙酸沉淀法和凝膠過濾層析法純化PV,通過Tricine-十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(Tricine-sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,Tricine-SDS-PAGE)和Western blot對(duì)3種蛋白在模擬腸胃液中的穩(wěn)定性進(jìn)行了評(píng)估。結(jié)果顯示,鯉魚和鰱魚的PV都獲得了分子量約10 k D的蛋白,同時(shí)在SGF中鯉魚和鰱魚的純化PV也獲得了相同的分子量蛋白。胃蛋白酶使原先的PV帶幾乎在60 min內(nèi)完全降解,并觀察到一些穩(wěn)定的肽片段,而胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶在240 min后都無法有效降解PV。在SGF中的非致敏性魚漿蛋白在很短的時(shí)間內(nèi)迅速降解,而PV的消化時(shí)間延長(zhǎng)。Western blot分析表明,抗鰱魚PV多克隆抗體可以特異性地檢測(cè)到PV及其降解產(chǎn)物。PV比非致敏性蛋白更能抵抗蛋白酶消化,相比胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶,胃蛋白酶處理能更有效地減少超敏反應(yīng)。研究結(jié)果為未來低致敏性魚產(chǎn)品的開發(fā)提供了理論參考。
[Abstract]:The physical and chemical properties of most food allergens determine the stability of proteins in the digestive tract. The stability of simulated gastric fluid (SGF) is an important parameter in assessing food allergies. Lmichthys molitrix) the stability of the non sensitizing proteins in muscle in SGF and simulated simulated intestinal fluid (SIF). 3 proteolytic enzymes (pepsin, trypsin and chymotrypsin from pig *) were used to simulate the digestive protease of human (Homo sapiens) body, combined with two times three chloroacetic acid precipitation. PV was purified by precipitation and gel filtration chromatography. The stability of the three proteins in simulated gastrointestinal juice was evaluated by Tricine-sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (Tricine-SDS-PAGE) and Western blot. The purified PV of carp and silver carp in SGF also obtained the same molecular weight protein. Pepsin degraded the original PV band almost completely within 60 minutes, and some stable peptide fragments were observed. Trypsin and chymotrypsin could not degrade PV effectively after 240 minutes. Western blot analysis showed that polyclonal antibodies against silver carp PV could specifically detect PV and its degradation products. PV was more resistant to protease digestion than non-allergic proteins, and pepsin treatment was more effective than trypsin and chymotrypsin. The results provide a theoretical reference for the development of low-sensitivity fish products in the future.
【作者單位】： 中國(guó)計(jì)量大學(xué)浙江省生物計(jì)量及檢驗(yàn)檢疫技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食品科學(xué)研究所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.31571845) 浙江省自然科學(xué)基金(No.LY14C200012) 浙江省公共技術(shù)應(yīng)用研究項(xiàng)目(No.2015C32023) 國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局(No.201410083)
【分類號(hào)】：R57

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本文編號(hào)：2189214