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《河北醫(yī)科大學》 2014年

化濁解毒平潰煎對潰瘍性結腸炎大鼠TNF-α、GLN及MCP-1的影響

董笑一  

【摘要】：目的： 本實驗通過觀察對潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis，UC）大鼠的一般狀態(tài)、病理學改變、疾病活動指數(shù)（DAI）評分、血清腫瘤壞死因子（TNF-α）、谷氨酰胺（GLN）含量以及結腸組織中單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1）表達的影響，分析化濁解毒平潰煎治療UC的作用機制，為臨床應用提供實驗依據(jù)。 方法： 將60只清潔級健康雄性Wistar大鼠（體重250g-300g），適應性喂養(yǎng)7天后隨機分為空白對照組（CK）、模型組（MG）、美沙拉嗪組（MSG）、化濁解毒平潰煎高劑量組（HDG）、化濁解毒平潰煎中劑量組（MDG）、化濁解毒平潰煎低劑量組（LDG）。每組10只，給予正常飲食飲水。除空白對照組外，其余5組采用2，4，6,-三硝基苯磺酸(2，4，6–trini-trobenzeneesulfonic acid,TNBS)致敏和乙醇誘導的復合灌腸法制造大鼠實驗性潰瘍性結腸炎模型。造模后第3天，CK組大鼠正常喂養(yǎng)，MG組大鼠給予0.9%氯化鈉溶液灌胃，MSG組大鼠采用美沙拉嗪混懸液灌胃，其余中藥治療組采用相應藥物灌胃。連續(xù)治療2周，觀察大鼠在各個時期的精神狀態(tài)、體重、飲食飲水、糞便性狀等情況。治療結束后，各組大鼠禁食不禁水24h，斷頭法處死并取血，用放射免疫法檢測血清TNF-α含量，生化法測GLN的含量，免疫組化法測MCP-1的表達。采血后快速剖腹，取出結腸，取肉眼觀察病變明顯的部位切取少許腸組織，進行常規(guī)固定，石蠟包埋及連續(xù)4um做病理切片，一部分進行HE染色后在光鏡下觀察結腸組織病理學改變，另一部分按免疫組化說明書操作，半定量法測定MCP-1的表達。 結果： 1大鼠的一般情況觀察 NG組大鼠精神佳，，毛色光澤，飲食進水正常，活動佳，二便可，體重逐漸增加。其余5組大鼠造模后出現(xiàn)精神萎靡不振，嗜蜷臥，進食量及活動量顯著減少，喜扎堆，體毛凌亂無光澤,并出現(xiàn)稀便，墊料污穢。MG組大鼠隨實驗天數(shù)增加可見癥狀逐漸加重,嚴重的大鼠肛周肉眼觀察可見血便，稱體質(zhì)量均有不同程度的減輕。其余4組治療組大鼠經(jīng)藥物干預后，大鼠的精神、皮毛色澤、活動狀態(tài)、體重等一般狀況均有好轉(zhuǎn)，其中HDG大鼠好轉(zhuǎn)最快，一般狀況接近NG；MDG與MSG略差，但仍高于LDG,且MDG與MSG之間無明顯差別；LDG大鼠比MG大鼠一般狀況略好。 2DAI評分 疾病活動指數(shù)評分方面，各治療組HDG(0.402±0.286)、MDG(0.892±0.362)、MSG(0.903±0.297)、LDG(1.328±0.255)與MG(2.489±0.245)比較，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.05），其中MSG與MDG之間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。詳見Table.3。 3結腸粘膜肉眼與組織病理學觀察 肉眼觀察MG情況最差，HDG接近CK組,MDG與MSG略好，且MSG好于MDG，LDG略好于MG。 組織病理學觀察：NG粘膜光滑色澤正常，為正常粘膜；MG大鼠粘膜退變壞死，大量炎細胞彌漫浸潤，充血、水腫，潰瘍形成明顯，LDG組次之。HDG大鼠腸粘膜基本完整，接近NG，MDG大鼠腸粘膜次于HDG，MSG介于HDG與MDG之間，好于LDG。詳見附圖Fig.1-Fig.6。 4血清TNF-α檢測結果 與MG（2.69±0.42）比較，各治療組大鼠血清TNF-α含量的差異具有統(tǒng)計學意義（P0.05）。HDG（1.34±0.04）低于MDG（1.68±0.05），差異有統(tǒng)計學意義（P0.05），MDG（1.68±0.05）略高于MSG（1.52±0.06）,差異不具有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 5血清GLN含量檢測結果 與MG（1.65±0.24）比較，各治療組大鼠血清GLN含量的差異具有統(tǒng)計學意義（P0.05）；其中MDG（2.37±0.09）比MSG（2.24±0.05）值略高，但兩者之間差異不具有統(tǒng)計學意義（P0.05）。CK（3.21±0.29）與各治療組之間差異具有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 6結腸組織MCP-1表達檢測結果 與MG（0.33±0.10）比較，各治療組大鼠MCP-1表達的平均光密度值均有降低，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.05）；HDG（0.13±0.01）分別與MDG（0.15±0.02）、MSG(0.17±0.01)、LDG（0.20±0.01）比較差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）；MSG與MDG之間比較無統(tǒng)計學意義（P0.05），LDG與MDG比較，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.05）。詳見Table.2。 結論： 1化濁解毒平潰煎能有效地改善UC大鼠的一般狀況，降低DAI評分，減輕病理損傷，而且其療效與該方劑劑量存在一定的量-效關系。 2化濁解毒平潰煎治療UC的作用機制可能是通過降低促炎因子TNF-α含量，下調(diào)MCP-1在結腸組織中的表達水平，同時提高血清中GLN含量，以達到抑制炎性細胞浸潤，修復受損腸粘膜的作用，從而有效治療UC。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R574.62
【目錄】：

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本文編號：217896