【摘要】：目的:利用化學(xué)合成的小干擾RNA(si RNA)轉(zhuǎn)染HepG2.2.15細(xì)胞,構(gòu)建針對乙型肝炎病毒(HBV)X基因的細(xì)胞干擾模型,研究其在體外對HBV復(fù)制和抗原表達(dá)的抑制作用。方法 :將構(gòu)建成功的HepG2.2.15細(xì)胞干擾模型,于轉(zhuǎn)染后24、48、72 h,化學(xué)發(fā)光免疫法檢測細(xì)胞上清液中HBsAg、HBeAg,ELISA法檢測細(xì)胞上清液HBxAg蛋白表達(dá)量,熒光定量PCR檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中HBx mRNA相對表達(dá)量,CCK-8法檢測細(xì)胞增殖能力。結(jié)果:HBx-siRNA轉(zhuǎn)染HepG2.2.15細(xì)胞后,細(xì)胞增殖能力被抑制,細(xì)胞中HBx mRNA及上清液中HBxAg的表達(dá)量下降(P0.05);并發(fā)現(xiàn)其能抑制細(xì)胞HBsAg、HBeAg表達(dá),抑制高峰在72 h,抑制率分別是66%和58%;熒光定量PCR證實細(xì)胞上清液中HBV DNA的表達(dá)量下降。結(jié)論:成功地構(gòu)建了HBV X基因的Hep G2.2.15細(xì)胞干擾模型,在體外具有抑制Hep G2.2.15細(xì)胞增殖和HBV基因的復(fù)制與表達(dá)的作用。
[Abstract]:Aim: to construct a cell interference model for hepatitis B virus (HBV) (HBV) X gene by transfection of HepG2.2.15 cells with chemically synthesized small interfering RNA (si RNA), and to study its inhibitory effect on HBV replication and antigen expression in vitro. Methods: the successfully constructed HepG2.2.15 cell interference model was used to detect the expression of HBxAg protein in the supernatant by chemiluminescent immunoassay at 24 ~ 4872 h after transfection. Fluorescence quantitative PCR was used to detect the relative expression of HBx mRNA in transfected cells and CCK-8 method was used to detect cell proliferation. Results the proliferation of HepG2.2.15 cells was inhibited and the expression of HBxAg in HBx mRNA and supernatant was decreased (P0.05), and it was found that it could inhibit the expression of HBeAg in HepG2.2.15 cells. The inhibitory rate was 66% and 58% respectively at 72 h, and fluorescence quantitative PCR confirmed the decrease of HBV DNA expression in the supernatant. Conclusion: the interference model of Hep G2.2.15 cells with HBV X gene has been successfully constructed, which can inhibit the proliferation of Hep G2.2.15 cells and the replication and expression of HBV gene in vitro.
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院檢驗科;廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【基金】：廣州市醫(yī)藥衛(wèi)生科技項目(編號:20141A011082)
【分類號】：R512.62

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3 黃顯斌 唐明山;乙肝病毒基因組研究記錄被刷新[N];中國醫(yī)藥報;2003年

4 記者　徐可　通訊員　黃顯斌、唐明山;乙肝病毒基因組新編碼基因首次成功破譯[N];光明日報;2003年

5 成君;慢性乙肝患者不能只顧降酶[N];家庭醫(yī)生報;2006年

6 ;我國成功破譯乙肝病毒基因組新編碼基因[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2003年

7 中國肝炎基金會;乙肝感染途徑[N];農(nóng)民日報;2001年

8 蔡fg東;治療前的評估和咨詢非常必要[N];中國醫(yī)藥報;2012年

9 ;乙型肝炎病毒宮內(nèi)感染的早期診斷[N];科技日報;2005年

10 石泉貴;淺析乙肝“二對半”檢測結(jié)果[N];西藏日報;2004年

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4 李金成;健康成人乙型肝炎病毒疫苗接種后無應(yīng)答者免疫功能研究[D];中南大學(xué);2009年

5 李維娜;乙型肝炎病毒編碼蛋白對宿主炎性基因的調(diào)控作用及其機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2011年

6 趙震環(huán);蝎活性多肽Mucroporin-M1激活MAPK通路抑制HBV復(fù)制研究[D];武漢大學(xué);2012年

7 邊濤;我國乙型肝炎病毒基因型別地區(qū)分布和變異研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2008年

8 黃力毅;乙型肝炎病毒核心基因啟動子變異的致病和致癌作用及其臨床意義的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2006年

9 彭仙娥;乙型肝炎病毒在非酒精脂肪肝發(fā)生中的作用及機(jī)制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2009年

10 王軍;檢測乙型肝炎病毒S區(qū)“α”決定簇145位點突變株方法的建立及應(yīng)用研究[D];東北師范大學(xué);2008年

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本文編號：2141160