本文選題：大鼠 + 肝纖維化　； 參考：《貴陽醫(yī)學院》2014年碩士論文

【摘要】：目的： 觀察四氯化碳(CC14)致大鼠肝纖維化發(fā)生過程中肝組織內質網相關蛋白磷酸化的蛋白激酶樣內質網激酶(protein kinase R-like ER kinase, PERK)、磷酸化的真核細胞起始因子2a (eukaryotic translation initator factor 2,eIF2a)及轉錄激活因子4(activating transcription factor 4, ATF4)蛋白表達的變化,探討內質網應激信號轉導通路中PERK-eIF2α-ATF4通路在肝纖維化的發(fā)生發(fā)展中可能的作用。方法：雄性Wistar大鼠40只,180g-200g,隨機分為正常對照組和肝纖維化組。肝纖維化組用40%CC14植物油溶液0.3ml/100g皮下注射,間隔三天注射一次來制備大鼠肝纖維化模型,正常組大鼠皮下注射等量植物油溶液。分別在實驗2周、4周、8周及12周末殺鼠,取大鼠肝臟,測定肝臟指數(shù),通過HE染色觀察肝組織的病理改變,免疫組化及Western blotting分別檢測肝臟組織中p-PERK、p-eIF2a和ATF4蛋白表達變化,并用Real-time PCR方法檢測肝臟組織中ATF4 mRNA及CHOP mRNA表達的變化。結果：肝指數(shù)及肝臟病理學檢查結果顯示造模4周大鼠肝臟出現(xiàn)纖維結締組織增生,8周組大鼠肝臟纖維結締組織增生更加明顯,12周組大鼠肝臟可見假小葉形成。免疫組化顯示各組大鼠肝組織中p-PERK、p-eIF2a和ATF4主要在肝細胞胞漿中表達,半定量分析發(fā)現(xiàn)肝纖維化2周組大鼠肝組織中p-PERK和p-eIF2a蛋白表達的陽性率較正常對照2周組大鼠變化不明顯(P0.05),肝纖維化2周組大鼠肝組織中ATF4蛋白表達陽性率高于正常對照2周組大鼠(P0.01)；肝纖維化4周組、8周組和12周組大鼠肝組織中的p-PERK、p-eIF2a和ATF4蛋白表達的陽性率較相應正常對照組顯著增加(P0.01),且較肝纖維化2周組陽性表達率明顯增高(P0.01)；肝纖維化8周組大鼠肝臟p-PERK、p-eIF2a和ATF4蛋白表達的陽性率明顯高于肝纖維化4周組(P0.01)；肝纖維化12周組大鼠肝臟p-PERK蛋白表達的陽性率明顯高于肝纖維化4周及8周組(P0.01),但是p-eIF2a和ATF4在肝纖維化12周組大鼠肝臟蛋白表達的陽性率雖明顯高于肝纖維化4周組,卻與肝纖維化8周組比較差異無顯著性(P0.05)。Western blotting蛋白印跡分析結果顯示各組大鼠肝組織均可檢測到p-PERK、eIF2a和ATF4蛋白表達。p-PERK、p-eIF2a和ATF4在肝纖維化2周組大鼠肝臟中蛋白表達較正常對照2周組大鼠無明顯變化(P0.05)；肝纖維化4周組、8周組及12周組大鼠肝組織中p-PERK蛋白表達隨肝纖維化進展明顯增加,且各組間差異均有顯著性(P0.01)；肝纖維化4周組大鼠肝組織p-eIF2a蛋白的表達明顯較肝纖維化2周組大鼠增加(P0.01),肝纖維化8周大鼠和12周組大鼠肝臟p-eIF2a蛋白的表達較肝纖維化2周和4周組大鼠也有明顯的高表達(P0.01),但肝纖維化、12周組與肝纖維化8周組大鼠肝臟p-eIF2a蛋白的表達無明顯差異(P0.05)；進一步對肝纖維化大鼠肝組織ATF4蛋白表達的研究發(fā)現(xiàn),肝纖維化2周組和4周組大鼠肝組織ATF4蛋白的表達變化不明顯(P0.05),從肝纖維化8周開始大鼠肝臟ATF4蛋白表達明顯增高,較肝纖維化2周和4周組差異有顯著性(P0.01),肝纖維化12周組大鼠肝臟ATF4蛋白的表達達到高峰,較肝纖維化2周、4周及8周組均有明顯差異(P0.01)。Real-time PCR結果顯示肝纖維化2周組大鼠肝組織ATF4 mRNA的表達與相應正常對照組比較無明顯差異(P0.05)；肝纖維化4周、8周、12周組大鼠肝組織中ATF4 mRNA的表達較相應對照組均有明顯升高(P0.05),且隨肝纖維化進展ATF4 mRNA的表達均顯著增加,在肝纖維化12周組大鼠肝組織中ATF4 mRNA的表達較肝纖維化模型2周(P0.01)、4周(P0.01)和8周組(P0.05)均顯著增高。我們還觀察了各組大鼠肝組織CHOP mRNA表達,結果發(fā)現(xiàn)肝纖維化2周組大鼠肝組織CHOP mRNA的表達與相應正常對照組比較無明顯差異(P0.05)；肝纖維化4周組CHOP mRNA的表達與肝纖維化2周組變化差異也無統(tǒng)計學意義(P0.05)；從肝纖維化8周組開始大鼠肝臟CHOP mRNA的表達明顯增高,較肝纖維化2周和4周組差異有顯著性(P0.01)；肝纖維化12周組CHOP mRNA的表達較肝纖維化2周、4周有明顯差異(P0.01),但與肝纖維化8周組比較無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論：在CC14誘導的大鼠肝纖維化發(fā)生發(fā)展過程中,肝細胞內質網應激可致PERK-eIF2a-ATF4信號通路蛋白活化明顯增加,提示肝細胞內質網應激PERK-eIF2a-ATF4信號通路可能通過激活下游凋亡促進因子CHOP表達影響肝細胞凋亡,參與了肝纖維化的發(fā)生發(fā)展過程。
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本文編號：2073869