本文選題：eRF3b + 非酒精性脂肪肝病��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的患病率逐年上升,已成為最常見的慢性肝臟疾病。根據(jù)疾病嚴(yán)重程度,NAFLD可包括以下類型:單純性肝脂肪病變,非酒精性肝炎,肝纖維化,肝細(xì)胞肝癌。目前普遍認(rèn)為NAFLD的發(fā)生涉及飲食、遺傳、腸道微生物等因素,它們可作為“多重打擊”共同影響脂肪代謝、炎癥及纖維化的形成,從而引起肝毒性。本研究室前期采用飛行質(zhì)譜技術(shù)在慢性肝炎、肝硬化和肝癌患者血清中檢測(cè)到一種生物學(xué)標(biāo)志物:真核肽鏈釋放因子3b(eRF3b)多肽,該標(biāo)志物在不同類型患者體內(nèi)表達(dá)有差異。前期研究發(fā)現(xiàn)eRF3b對(duì)免疫性肝損傷、肝纖維化均有保護(hù)作用�；诒緦�(shí)驗(yàn)室前期關(guān)于eRF3b對(duì)NAFLD保護(hù)性作用的研究,發(fā)現(xiàn)eRF3b可減輕高脂飲食聯(lián)合四氯化碳導(dǎo)致的大鼠肝內(nèi)脂肪沉積,改善血清學(xué)和組織病理學(xué)指標(biāo),但是eRF3b發(fā)揮保護(hù)作用的具體分子機(jī)制尚不明確,所以本次研究主要通過腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路、過氧化物酶體增殖物激活受體/肝X受體(PPAR/LXR)通路和磷脂酰肌醇-3激酶/蘇氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)通路來探索eRF3b對(duì)非酒精性脂肪肝病的保護(hù)作用的脂肪代謝機(jī)制,從而為非酒精性脂肪肝病的治療提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。方法:1脂肪代謝通路相關(guān)因子基因表達(dá)水平變化:應(yīng)用q RT-PCR方法測(cè)定正常組、模型組、eRF3b 100μg/kg組、200μg/kg組、400μg/kg組、西藥(復(fù)方甘草酸苷)對(duì)照組、中藥(降脂通絡(luò)軟膠囊)對(duì)照組凍存肝組織中AMPK通路相關(guān)指標(biāo)adiponectin、LKB1、AMPKα1、AMPKα2、ACC、CPT1、SREBP-1c、FAS、PNPLA3;PPAR/LXR通路指標(biāo)PPARα、PPARγ、LXRα;炎癥、纖維化與細(xì)胞增殖指標(biāo)IL-6、TGF-β1、collagen1、PCNA的基因表達(dá)水平。2幾種相關(guān)因子蛋白水平的變化:應(yīng)用Western-blot方法測(cè)定正常組、模型組、eRF3b 100μg/kg組、200μg/kg組、400μg/kg組、復(fù)方甘草酸苷組、降脂通絡(luò)軟膠囊組凍存肝組織中的p-AMPKα/AMPKα、PI3K、p-Akt/Akt蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1各組AMPKα的基因及蛋白表達(dá)水平q RT-PCR結(jié)果顯示模型組與正常組比AMPKα1、AMPKα2 mRNA相對(duì)表達(dá)均降低(P0.01),eRF3b 100μg/kg、200μg/kg、400μg/kg組、復(fù)方甘草酸苷組、降脂通絡(luò)軟膠囊組與模型組比,AMPKα1、AMPKα2 mRNA相對(duì)表達(dá)均升高(P0.01)。eRF3b 200μg/kg組AMPKa1和AMPKα2 mRNA表達(dá)高于復(fù)方甘草酸苷組和降脂通絡(luò)軟膠囊組(P0.05)。Western-blot結(jié)果顯示模型組p-AMPKα/AMPKα蛋白相對(duì)表達(dá)量低于正常組(P0.01),eRF3b 200μg/kg組與模型組比p-AMPKα/AMPKα蛋白相對(duì)表達(dá)量升高(P0.05)。2各組AMPK上游基因的表達(dá)水平與正常組比,模型組adiponectin與LKB1 mRNA相對(duì)表達(dá)量均降低(P0.05),eRF3b 200μg/kg組adiponectin和LKB1 mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于模型組(P0.01)。3各組脂肪酸氧化相關(guān)基因的表達(dá)水平與正常組比,模型組ACC mRNA相對(duì)表達(dá)升高,CPT1 mRNA相對(duì)表達(dá)降低(P0.001)。與模型組比,eRF3b 100μg/kg、200μg/kg、400μg/kg組、復(fù)方甘草酸苷組、降脂通絡(luò)軟膠囊組ACC mRNA相對(duì)表達(dá)量降低,CPT1 mRNA相對(duì)表達(dá)升高,且eRF3b 400μg/kg組ACC mRNA表達(dá)低于與復(fù)方甘草酸苷組(P0.05)。4各組脂肪酸合成相關(guān)基因的表達(dá)水平與正常組比,模型組SREBP-1c、PNPLA3、FAS mRNA相對(duì)量表達(dá)均升高(P0.05)。與模型組比,eRF3b 100μg/kg、200μg/kg、400μg/kg組、復(fù)方甘草酸苷組、降脂通絡(luò)軟膠囊組SREBP-1c、FAS、PNPLA3 mRNA表達(dá)均降低(P0.05),且eRF3b 200μg/kg組和400μg/kg組SREBP-1c mRNA水平低于復(fù)方甘草酸苷組(P0.05)。5各組PPAR/LXR通路的基因表達(dá)水平正常組、模型組、eRF3b 100μg/kg組、200μg/kg組、400μg/kg組、復(fù)方甘草酸苷組、降脂通絡(luò)軟膠囊組的PPARα與LXRα基因相對(duì)表達(dá)水平均無差異(P0.05)。模型組PPARγmRNA水平高于正常組(P0.001),與模型組比,eRF3b 200μg/kg組與降脂通絡(luò)軟膠囊組PPARγmRNA相對(duì)表達(dá)量降低(P0.05)。6各組PI3K/Akt通路的蛋白表達(dá)水平Western blot結(jié)果顯示,正常組、模型組、eRF3b 100μg/kg、200μg/kg、400μg/kg組、復(fù)方甘草酸苷組、降脂通絡(luò)軟膠囊組PI3K和p-Akt/Akt的蛋白相對(duì)表達(dá)量均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。7各組炎癥、纖維化及細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)水平與正常組比,模型組IL-6、TGF-β1、collagen1 mRNA相對(duì)表達(dá)均升高(P0.01)。與模型組比,eRF3b 100μg/kg、200μg/kg、400μg/kg組、西藥組、中藥組IL-6和TGF-β1 mRNA表達(dá)降低(P0.05);eRF3b100μg/kg、200μg/kg組、復(fù)方甘草酸苷組、降脂通絡(luò)軟膠囊組collagen1mRNA表達(dá)降低(P0.01),且eRF3b 200μg/kg組IL-6和collagen1基因水平低于復(fù)方甘草酸苷組和降脂通絡(luò)軟膠囊組(P0.01)。各組PCNA的基因表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1 eRF3b可能通過激活A(yù)MPK通路,降低肝內(nèi)PPARγ的表達(dá)而改善脂代謝并減輕由高脂飲食聯(lián)合四氯化碳引起的大鼠肝臟炎癥反應(yīng)與纖維化的發(fā)生,發(fā)揮對(duì)脂肪肝的保護(hù)作用。2 eRF3b上調(diào)AMPK通路的機(jī)制可能是通過增加adipoenctin與LKB1的表達(dá)而激活A(yù)MPK,繼而增加脂肪酸氧化并減少脂肪酸合成,從而減少肝內(nèi)脂肪堆積。3 eRF3b對(duì)脂肪肝的治療作用可能與PPARα/LXRα和PI3K/Akt通路無關(guān)。
[Abstract]:Objective : To explore the protective effect of eRF3b on non - alcoholic fatty liver disease . Results : The relative expression of AMPK 偽 / AMPK 偽 protein in the group of eRF3b 200 渭g / kg , 200 渭g / kg , 400 渭g / kg , 400 渭g / kg , 400 渭g / kg , 400 渭g / kg , 200 渭g / kg , 400 渭g / kg , 400 渭g / kg , 200 渭g / kg , 400 渭g / kg group , and lower fat Tongluo soft capsule group were higher than those in the model group ( P0.05 ) . Compared with the normal group , the expression levels of PPAR緯 mRNA in the group of eRF3b 200 渭g / kg , 200 渭g / kg , 400 渭g / kg , 200 渭g / kg , 400 渭g / kg , 400 渭g / kg , 200 渭g / kg , 400 渭g / kg , 200 渭g / kg , 400 渭g / kg , 400 渭g / kg , 200 渭g / kg , 400 渭g / kg , 200 渭g / kg , 400 渭g / kg , 400 渭g / kg , respectively . 1 eRF3b may improve lipid metabolism by activating AMPK pathway , reduce the expression of PPAR緯 in the liver , and reduce the inflammatory response and fibrosis of rat liver caused by high - fat diet combined with carbon tetrachloride . The mechanism of up - regulating AMPK pathway by eRF3b may be to activate AMPK by increasing the expression of enctin and LKB1 , then increase fatty acid oxidation and reduce fatty acid synthesis , thereby reducing fatty acid accumulation in the liver . The therapeutic effect of 3 eRF3b on fatty liver may not be related to PPAR偽 / LXR .
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R575.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2031947