發(fā)布時間：2018-05-18 12:45

  本文選題：應(yīng)激 + 胃粘膜潰瘍　； 參考：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：研究背景:應(yīng)激反應(yīng)是機(jī)體面對各種應(yīng)激源刺激時做出的一系列適應(yīng)性的反應(yīng)。適度的應(yīng)激對于機(jī)體是有益的,但當(dāng)應(yīng)激刺激過重時機(jī)體則會出現(xiàn)一系列不良的反應(yīng)。胃是對應(yīng)激刺激非常敏感的器官之一,應(yīng)激可以引起多種胃功能紊亂,而消化道潰瘍是其中較為嚴(yán)重的一類。嚴(yán)重?zé)齻?chuàng)傷以及臨床治療過程中的有創(chuàng)操作等都是強(qiáng)烈的應(yīng)激源,所以應(yīng)激性潰瘍一直以來都是ICU患者的常見并發(fā)癥。嚴(yán)重的應(yīng)激性潰瘍可以進(jìn)一步引起胃腸道的出血,甚至導(dǎo)致死亡。對于應(yīng)激性潰瘍發(fā)病的相關(guān)機(jī)制至今仍未完全明確。目前認(rèn)為,應(yīng)激性潰瘍的發(fā)生始于應(yīng)激刺激引起的復(fù)雜的神經(jīng)-內(nèi)分泌系統(tǒng)反應(yīng),繼而引起胃粘膜局部的缺血、胃黏膜屏障破壞。粘膜屏障的破壞進(jìn)一步導(dǎo)致粘膜上皮暴露于胃腔內(nèi)的其他損傷因素(如胃酸、胃蛋白酶等)而促進(jìn)潰瘍形成。有研究報道,應(yīng)激過程中胃粘膜局部各種促炎因子的釋放也參與了胃粘膜潰瘍的形成。Toll樣受體4(toll-like receptor 4,TLR4)作為經(jīng)典的模式識別受體,在多種細(xì)胞及組織中介導(dǎo)促炎因子的釋放及炎癥反應(yīng),由此可以推測TLR4信號激活可能介導(dǎo)胃粘膜局部的炎癥反應(yīng)而促進(jìn)應(yīng)激性潰瘍的發(fā)生。然而,另有研究報道,TLR4信號激活可以刺激促腎上腺素釋放激素(corticotropin releasing hormone,CRH)的合成,CRH是應(yīng)激過程釋放的重要激素,其可以通過激活下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸(hypothalamic pituitary adrenal axis,HPA)刺激糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid,GC)的合成從而減輕應(yīng)激誘導(dǎo)的胃粘膜損傷。因此,TLR4信號在應(yīng)激性潰瘍發(fā)病過程中的直接作用仍不明確。應(yīng)激過程中HPA軸的活化以及內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素的合成釋放,是機(jī)體應(yīng)對應(yīng)激刺激而發(fā)生的內(nèi)分泌反應(yīng)。大量研究報道,內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素具有減輕應(yīng)激性潰瘍的重要保護(hù)作用。因此,本課題組推測TLR4信號激活可能通過調(diào)控內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素的合成,而減輕應(yīng)激時胃粘膜的損傷。課題擬通過小鼠浸水束縛應(yīng)激模型進(jìn)行研究,明確TLR4信號在應(yīng)激性潰瘍發(fā)病中的作用,驗證該作用是否與調(diào)控內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素合成有關(guān),并進(jìn)一步探索其潛在的機(jī)制。研究目的:1、明確TLR4信號在應(yīng)激性潰瘍發(fā)病中的作用;2、驗證TLR4信號是否通過調(diào)控GC合成發(fā)揮保護(hù)作用;3、探索TLR4信號調(diào)控GC合成的潛在機(jī)制。研究方法:第一部分:觀察tlr4敲除與野生型小鼠在浸水束縛應(yīng)激不同時間后胃粘膜損傷指標(biāo):大體觀察、組織病理學(xué)染色及潰瘍指數(shù)的差異。檢測二者不同時間點血清gc的濃度,觀察gc濃度變化與相應(yīng)胃粘膜損傷的相關(guān)性。進(jìn)一步通過抑制gc合成以及外源性補(bǔ)充gc后,觀察兩種基因型小鼠胃粘膜損傷的改變,從而驗證tlr4信號對于應(yīng)激誘導(dǎo)的胃粘膜損傷的作用是否與調(diào)控gc合成有關(guān)。此后再通過促皮質(zhì)素實驗探尋tlr4敲除影響gc合成可能的靶器官。第二部分:為明確tlr4信號調(diào)控gc合成的途徑,首先通過檢測兩種基因型小鼠應(yīng)激后,其血清內(nèi)tlr4的主要配體細(xì)菌脂多糖(lps)及其結(jié)合蛋白(lbp)的濃度。驗證兩種小鼠單獨lps刺激是否會引起gc合成的增加。進(jìn)一步通過lps刺激小鼠腎上腺皮脂腺瘤細(xì)胞y1,驗證tlr4信號是否影響gc合成。進(jìn)一步通過觀察過表達(dá)tlr4蛋白后y1細(xì)胞合成功能是否有改變,從而驗證tlr4對于gc合成的調(diào)控是否通過lps刺激腎上腺皮質(zhì)的tlr4信號而進(jìn)行調(diào)控。第三部分:為探索tlr4敲除小鼠腎上腺皮質(zhì)合成功能改變的及其潛在機(jī)制,針對兩種基因型小鼠腎上腺組織蛋白中g(shù)c合成相關(guān)酶的表達(dá)差異進(jìn)行檢測。進(jìn)一步針對tlr4過表達(dá)y1細(xì)胞株于陰性病毒對照的相關(guān)酶的表達(dá)含量差異進(jìn)行驗證。此外,通過油紅-o染色觀察腎上腺皮質(zhì)內(nèi)激素合成原料膽固醇含量的差異,以及透射電鏡觀察腎上腺皮質(zhì)束狀帶細(xì)胞的結(jié)構(gòu)改變進(jìn)一步探索其可能的機(jī)制。研究結(jié)果:第一部分tlr4敲除抑制應(yīng)激時糖皮質(zhì)激素合成促進(jìn)胃粘膜損傷浸水束縛應(yīng)激可導(dǎo)致兩種基因型小鼠胃粘膜損傷的發(fā)生,在應(yīng)激1小時后tlr4敲除小鼠的粘膜損傷大體表現(xiàn)、he染色觀察粘膜糜爛深度以及潰瘍指數(shù)都較野生型小鼠更加嚴(yán)重。應(yīng)激過程中野生型小鼠血清gc濃度明顯升高,而敲除小鼠其濃度變化不明顯并持續(xù)處于較低的水平。甲吡酮抑制gc合成可導(dǎo)致野生型小鼠胃粘膜損傷明顯加重,而對于tlr4敲除小鼠影響不大。相應(yīng)的,外源性補(bǔ)充gc后可明顯逆轉(zhuǎn)tlr4敲除導(dǎo)致的胃粘膜損傷加重。小鼠促皮質(zhì)素刺激試驗發(fā)現(xiàn),兩種小鼠刺激后均可產(chǎn)生gc合成的增加,但tlr4敲除小鼠增加的水平較野生型低。第二部分lps/tlr4信號調(diào)控應(yīng)激過程中腎上腺糖皮質(zhì)激素合成兩種基因型小鼠應(yīng)激后血清lps、lbp濃度明顯高于對照組。單純給予野生型小鼠lps刺激4小時后其血清gc濃度明顯升高,而tlr4敲除小鼠無明顯變化。進(jìn)一步給予y1細(xì)胞lps刺激同樣可以促進(jìn)其上清gc濃度升高,且過表達(dá)tlr4后lps刺激所引起y1細(xì)胞的gc合成進(jìn)一步增高。第三部分TLR4缺失導(dǎo)致腎上腺皮質(zhì)合成糖皮質(zhì)激素功能受損TLR4缺失的小鼠其腎上腺組織中,GC合成的關(guān)鍵酶CYP11A1蛋白表達(dá)明顯減少,而Y1過表達(dá)TLR4后CYP11A1蛋白表達(dá)也明顯上調(diào)。進(jìn)一步通過透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn),TLR4缺失小鼠其皮質(zhì)束狀帶細(xì)胞中激素合成的反應(yīng)場所——線粒體內(nèi)膜,出現(xiàn)明顯的結(jié)構(gòu)紊亂。此外,TLR4敲除小鼠腎上腺皮質(zhì)中激素合成的原料膽固醇明顯減少。結(jié)論:根據(jù)以上三部分的實驗結(jié)果得出:一、TLR4信號通過調(diào)控GC合成減輕小鼠浸水束縛應(yīng)激誘導(dǎo)的胃粘膜損傷;二、應(yīng)激過程中腎上腺皮質(zhì)LPS/TLR4信號激活促進(jìn)內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素的合成;三、TLR4缺失導(dǎo)致小鼠腎上腺皮質(zhì)合成糖皮質(zhì)激素的功能損傷。
[Abstract]:鐮旂┒鑳屾櫙:搴旀縺鍙嶅簲鏄満浣撻潰瀵瑰悇縐嶅簲嬋，

本文編號：1905885