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伴結(jié)腸痙攣便秘患者腸壁神經(jīng)特異性烯醇化酶及S-100的表達(dá)

發(fā)布時(shí)間:2018-05-14 11:20

  本文選題:結(jié)腸痙攣 + 便秘; 參考:《河北醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文


【摘要】:目的:在便秘患者影像學(xué)檢查及手術(shù)中常發(fā)現(xiàn)局部結(jié)腸腸管痙攣,其遠(yuǎn)端、近端腸管多無(wú)異常表現(xiàn)。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用腸神經(jīng)系統(tǒng)特異性標(biāo)志物神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)和S-100,對(duì)有腸管痙攣表現(xiàn)的便秘患者腸壁組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色檢查,檢查腸壁神經(jīng)叢及其組成成份有無(wú)異常改變,探討便秘患者結(jié)腸痙攣的病因,為今后的治療提供幫助。 方法: 1標(biāo)本采集 1.1標(biāo)本的選擇:所有取材對(duì)象均為經(jīng)結(jié)腸傳輸試驗(yàn)診斷為慢傳輸型便秘的手術(shù)患者,手術(shù)方式均為結(jié)腸次全切除術(shù)。以鋇灌腸檢查和(或)術(shù)中發(fā)現(xiàn)有腸管痙攣者19例作為痙攣組,無(wú)腸管痙攣表現(xiàn)的便秘患者20例作為非痙攣組;痙攣組男性6例,女性13例,患者年齡范圍31-74歲,中位年齡為63歲;非痙攣組男性3例,女性17例,患者年齡范圍18-66歲,中位年齡48歲。 1.2采集方法:術(shù)中腸管標(biāo)本取下后切取全層腸壁組織,大小為2×2cm,注意去除鉗夾部位腸壁。取材部位為乙狀結(jié)腸痙攣段和橫結(jié)腸,非痙攣組取材部位為乙狀結(jié)腸、橫結(jié)腸。 1.3標(biāo)本處理:標(biāo)本取下經(jīng)PBS緩沖液沖洗后置于4%多聚甲醛中固定,24小時(shí)后撈出后修整標(biāo)本,經(jīng)梯度酒精脫水,二甲苯透明,浸蠟,包埋制成石蠟標(biāo)本。 2染色鏡檢 2.1石蠟標(biāo)本切片制備:應(yīng)用輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)切片,溫水漂浮法撈片,烤干備用。 2.2染色:切片經(jīng)脫蠟、水化、抗原修復(fù)、1%甲醇雙氧水孵育、血清封閉后滴加一抗(NSE、S-100)及二抗,然后經(jīng)DAB顯色、蘇木素復(fù)染、梯度酒精脫水等步驟,最后封片。 2.3鏡檢:在光學(xué)顯微鏡下觀察腸神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)神經(jīng)纖維的狀態(tài)和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的形態(tài),計(jì)數(shù)粘膜下層和肌層內(nèi)神經(jīng)叢、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目,方法為同一切片隨機(jī)選取5個(gè)低倍鏡視野(視野不重疊)分別計(jì)數(shù)粘膜下層及肌層的神經(jīng)叢數(shù)和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞個(gè)數(shù)(高倍鏡下進(jìn)行辨認(rèn))。 2.4采圖:分別對(duì)兩組患者腸壁各層神經(jīng)叢和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞不同視野下的表現(xiàn)進(jìn)行采圖,觀察到有異常改變的神經(jīng)纖維、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞變化時(shí)采圖。3數(shù)據(jù)處理:數(shù)據(jù)采用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”(x±s)表示,應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0對(duì)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析,檢測(cè)方法為兩樣本獨(dú)立t檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。 結(jié)果: 1鏡下表現(xiàn): 1.1NSE染色:非痙攣組粘膜下神經(jīng)叢及肌間神經(jīng)叢內(nèi)可見(jiàn)呈深棕色的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,分布大小均勻,神經(jīng)纖維規(guī)則;痙攣組可見(jiàn),深棕色的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量、體積發(fā)生改變,神經(jīng)纖維紊亂增生。 1.2S-100染色:非痙攣組粘膜下神經(jīng)叢及肌間神經(jīng)叢可見(jiàn),深染的神經(jīng)叢中多個(gè)細(xì)胞狀的“空白區(qū)”,即神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,大小形態(tài)規(guī)則,神經(jīng)纖維排布規(guī)則;痙攣組可見(jiàn),神經(jīng)節(jié)細(xì)胞大小、形態(tài)、數(shù)量有變化,神經(jīng)纖維多紊亂增生。 2NSE染色分析結(jié)果:神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量:與非痙攣組比較,痙攣組痙攣段腸壁粘膜下神經(jīng)叢及肌間神經(jīng)叢內(nèi)的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量均有下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),橫結(jié)腸段粘膜下神經(jīng)叢及肌間神經(jīng)叢神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)神經(jīng)叢數(shù)量:兩組患者在相對(duì)應(yīng)部位腸管的腸壁神經(jīng)叢數(shù)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 3S-100染色分析結(jié)果:神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量:與非痙攣組比較,痙攣組痙攣段腸管粘膜下神經(jīng)叢及肌間神經(jīng)叢內(nèi)的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量均有下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),橫結(jié)腸段粘膜下神經(jīng)叢及肌間神經(jīng)叢神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);神經(jīng)叢數(shù)量:兩組患者在相對(duì)應(yīng)部位腸管和神經(jīng)叢中的神經(jīng)叢數(shù)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論: 便秘患者結(jié)腸痙攣與腸神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量、成熟程度改變有關(guān),腸壁中增生紊亂的神經(jīng)纖維也起到一定的作用;患者痙攣段腸管病理表現(xiàn)與巨結(jié)腸類(lèi)緣病類(lèi)似,,患者無(wú)結(jié)腸擴(kuò)張,可能與患者病變程度輕,近端結(jié)腸處于代償期有關(guān)。
[Abstract]:Objective: in the imaging examination and operation of constipation patients, local colonic spasm is often found, and the distal and proximal enteric tubes have no abnormal manifestations. This experiment uses the neuron specific enolase (NSE) and S-100, a specific marker of the intestinal nervous system, for immunohistochemical staining of the intestinal wall tissue in patients with constipation with intestinal spasm. To examine the abnormal changes of the intestinal plexus and its components, to explore the etiology of colon spasm in constipation patients, and to provide help for future treatment.
Method錛

本文編號(hào):1887654

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