本文選題：急性肝衰竭 + 生物人工肝��； 參考：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景及目的:急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)是因肝細(xì)胞大量壞死至肝功能嚴(yán)重不足而引起的一系列臨床癥狀的綜合征,病死率高。肝移植仍是目前治療急性肝衰竭最主要的手段,然而因供體器官短缺、免疫排斥、費(fèi)用昂貴等原因,肝移植仍不能被廣泛運(yùn)用到臨床上。這使得發(fā)展生物人工肝(bioartificial liver,BAL),延長(zhǎng)急性肝衰竭患者的生存期,提高他們的生存狀態(tài),引起人們高度重視。而如何獲取大量可利用肝細(xì)胞一直以來(lái)被認(rèn)為是發(fā)展生物人工肝的難題。HepaRG細(xì)胞是在2002年首次分離出來(lái)的肝祖細(xì)胞系,HepaRG細(xì)胞在二甲基亞砜(DMSO)誘導(dǎo)下可分化為有功能的肝細(xì)胞樣和膽管細(xì)胞樣細(xì)胞,分化后的細(xì)胞適用于BAL、人肝細(xì)胞模型、研究病毒性肝炎機(jī)制等,但DMSO也會(huì)抑制分化后的細(xì)胞表達(dá)ALB、細(xì)胞色素P450、氨的消除、細(xì)胞增生等特殊肝功能,這促使我們?nèi)ふ腋行У恼T導(dǎo)HepaRG細(xì)胞分化的方法。而近年來(lái)有國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)可以調(diào)控細(xì)胞生物學(xué)行為比如細(xì)胞遷移、增生、分化等。本研究立足以此,通過(guò)構(gòu)建基底彈性梯度ECM系統(tǒng)來(lái)誘導(dǎo)HepaRG細(xì)胞分化,初步探索基底硬度調(diào)控HepaRG細(xì)胞快速分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞的可行性,為BAL提供新的肝細(xì)胞來(lái)源。方法:1、構(gòu)建4組不同硬度的基底(4s組、8s組、16s組、Glass組)和ALB-GFP熒光報(bào)告細(xì)胞系系統(tǒng),HepaRG細(xì)胞分別接種于4種基底2上,通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞ALB表達(dá)和運(yùn)用倒置顯微鏡觀察HepaRG細(xì)胞分化前后的形態(tài)變化,來(lái)鑒定各組HepaRG細(xì)胞分化效果;2、阿爾瑪藍(lán)(Alamar bule)檢測(cè)各組細(xì)胞增殖情況;3、免疫熒光染色檢測(cè)各組細(xì)胞力學(xué)響應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子(YAP)的表達(dá),初步探查軟的基底誘導(dǎo)HepaRG細(xì)胞分化原因。結(jié)果:1、ALB-GFP熒光報(bào)告細(xì)胞系系統(tǒng)及運(yùn)用Image J軟件對(duì)ALB表達(dá)分析結(jié)果顯示:在第4h,4s組分別與8s組、16s組、Glass組HepaRG細(xì)胞中ALB的表達(dá)量比較,差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(t=0.791,1.389,2.481,P0.05);在第4d,4組HepaRG細(xì)胞中ALB的表達(dá)量互相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(F=82.60,P0.05),4s組ALB的表達(dá)量高于16s組和Glass組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(t=12.410,12.520,P0.05),4s組與8s組比較,差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(t=2.603,P0.05);在第7d,4組HepaRG細(xì)胞中ALB的表達(dá)量互相比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(F=27.02,P0.05),4s組分別和8s組、16s組、Glass組比較,其ALB的表達(dá)量較高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(t=3.266,6.725,8.005,P0.05)。2、倒置顯微鏡觀察結(jié)果顯示:在誘導(dǎo)分化第0天(4h),HepaRG細(xì)胞形態(tài)呈現(xiàn)一致的瘦長(zhǎng)形細(xì)胞,隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),HepaRG細(xì)胞從第4天達(dá)到匯合后開(kāi)始出現(xiàn)分化;在第7天,HepaRG細(xì)胞基本分化為兩種形狀不同的細(xì)胞,一種呈現(xiàn)肝細(xì)胞樣顆粒狀上皮細(xì)胞,有1至2個(gè)細(xì)胞核,另一種圍繞著第一種細(xì)胞,呈現(xiàn)扁平狀,有清晰的細(xì)胞質(zhì),肝細(xì)胞樣細(xì)胞約占總細(xì)胞數(shù)50-55%。3、Alamar bule檢測(cè)結(jié)果顯示:在第4d,4s組的細(xì)胞總數(shù)分別和8s組、16s組、Glass組比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(t=1.550,0.518,3.106,P0.05);在第7d,4s組的細(xì)胞總數(shù)分別和8s組、16s組、Glass組比較,差異仍無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(t=0.025,1.408,3.889,P0.05)。4、免疫熒光染色檢測(cè)YAP結(jié)果顯示:最軟基底上的YAP主要定位在細(xì)胞質(zhì)里,中間硬度基底上的YAP在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核里都有定位,最硬基底上的YAP主要定位在細(xì)胞核里。結(jié)論:1、軟的基底更有利于肝祖細(xì)胞系HepaRG細(xì)胞快速向肝細(xì)胞樣細(xì)胞分化。2、軟的基底在誘導(dǎo)HepaRG細(xì)胞分化時(shí)不影響細(xì)胞增殖活性,HepaRG細(xì)胞有望為生物人工肝提供所需的肝細(xì)胞。3.YAP在基底硬度調(diào)控hepaRG細(xì)胞向肝細(xì)胞分化中起到重要作用。
[Abstract]:BACKGROUND & OBJECTIVE : Acute liver failure ( ALF ) is one of the most important methods for treating acute liver failure . The results showed that there was no statistical significance ( t = 2.603 , P < 0.05 ) . The expression of ALB was significantly higher in the 4 s and 4 s groups ( t = 3.266 , 1.389 , 2.481 , P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R575.3

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本文編號(hào)：1837899