本文選題：1型多聚ADP核糖合成 + 過氧化物酶體增殖物受體α��； 參考：《華中科技大學》2014年博士論文

【摘要】：第一部分1型多聚ADP核糖合成酶在高飽和脂肪酸飲食所致甘油三酯代謝紊亂過程中的作用機制研究 目的：使用1型多聚ADP核糖合成酶(poly(ADP-ribose) polymerase1,PARP1)基因敲除小鼠,通過給予高飽和脂肪酸飲食喂養(yǎng)構(gòu)建高甘油三酯血癥動物模型,探討PARP1在高甘油三酯血癥中的作用和機制。 方法：選擇體重在18-20g,8-10周齡的雄性野生型129S1/SvImJ小鼠及PARP1基因敲除小鼠(PARP1-/-,129S-Parpltmlzqw/J,PKO)為實驗對象,各隨機分為4組,分別給予普通飲食和高飽和脂肪酸飲食喂養(yǎng)。在實驗開始第0周,首次測量體重,并經(jīng)內(nèi)眥靜脈采血,分離血清后檢測血甘油三酯和非酯化脂肪酸含量。以后于第14、28天測量一次小鼠體重。在實驗第27天,小鼠禁食6小時后,分別行小鼠灌胃給予葡萄糖耐量試驗、腹腔注射胰島素耐量試驗,評價小鼠胰島素抵抗狀態(tài)。第28天小鼠在禁食8小時后,取血分離血清,再次檢測血甘油三酯和非酯化脂肪酸含量。處死小鼠后,取肝臟織樣本使用多聚甲醛固定留作病理切片,或者凍存作分子生物學檢測。病理學檢測包括HE及油紅染色肝臟組織切片觀察肝臟脂肪變性情況；使用蛋白印跡實驗等方法檢測老鼠肝臟中PARP活性,real time RT-PCR檢測肝臟組織中甘油三酯代謝相關(guān)基因RNA表達水平,凝膠遷移電泳檢測肝臟組織中過氧化物酶體增殖物受體a的DNA結(jié)合能力。 結(jié)果：高飽和脂肪酸飲食喂養(yǎng)后,小鼠肝臟組織中PARP活性明顯增高。PARP1敲除或PARP1抑制劑均可以明顯改善高飽和脂肪酸飲食所致的血脂異常和肝臟脂質(zhì)沉積。敲除PARP1或PARP抑制劑可以增強過氧化物酶體增殖物受體α的DNA結(jié)合能力,并顯著增加參與脂肪酸氧化相關(guān)基因的表達水平。 結(jié)論：PARP1基因敲除后可以明顯改善由高飽和脂肪酸飲食誘導的甘油三酯代謝紊亂,PARP1在脂質(zhì)代謝紊亂過程中發(fā)揮重要作用。 第二部分不同種類脂肪酸對1型多聚ADP核糖合成酶活性作用的研究 目的：1型多聚ADP核糖合成酶(PARP1)的過度激活在各種生理病理過程中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用,研究不同種類脂肪酸對PARP1活性的影響,探索高飽和脂脂酸飲食引起脂質(zhì)代謝紊亂的原因。 方法：培養(yǎng)野生型小鼠肝臟原代細胞,使用相同濃度的單不飽和脂肪酸、多不飽和脂肪酸和飽和脂肪酸刺激肝臟細胞,檢測肝臟細胞中PARP1的活性。并且使用免疫共沉淀觀察不同種類脂肪酸刺激細胞后過氧化物酶體增殖物受體α(PPARa)的多聚ADP核糖化水平。同時培養(yǎng)野生型小鼠和PARP1基因敲除小鼠肝臟原代細胞,觀察不同種類脂肪酸對脂肪酸代謝相關(guān)基因表達的影響。 結(jié)果：單不飽和脂肪酸與多不飽和脂肪酸不能使PARP1活性的增加,而飽和脂肪酸則可以激活PARP1,且呈濃度依賴性。并且較之單不飽和脂肪酸與多不飽和脂肪酸,飽和脂肪酸增加PPARα的多聚ADP核糖化水平。實時定量PCR結(jié)果表明飽和脂肪酸在野生型細胞中不能夠增加PPARα下游靶基因的表達,但是在PARP1敲除細胞中則可以上調(diào)PPARα下游靶基因的表達。 結(jié)論：三種脂肪酸中只有飽和脂肪酸可以激活PARP1,飽和脂肪酸在PARP1敲除細胞中可以增加PPARα下游靶基因的表達,PARP1的激活是高飽和脂肪酸飲食引起脂質(zhì)代謝紊亂的關(guān)鍵因素。 第三部分人肝臟組織1型多聚ADP核糖合成酶活性的觀察 目的：觀察人肝臟組織中1型多聚ADP核糖合成酶(PARP1)活性以及與肝臟組織中脂質(zhì)含量的關(guān)系。 方法：收集臨床病人的肝臟組織,選取病理學檢查正常的肝臟組織作為實驗對象,使用Universal colorimetric PARP assay試劑盒檢測肝臟組織標本中PARP活性,并且檢測相應肝臟組織中甘油三酯和非酯化脂肪酸的含量,使用Pearson相關(guān)模型分析PARP活性與脂質(zhì)含量之間的關(guān)系。并且用PARP1激動劑和抑制劑孵育人肝癌細胞系hepG2細胞,用油紅O檢測脂質(zhì)沉積程度。 結(jié)果：人肝臟組織中PARP活性與甘油三酯(r=0.509,p0.001)和非酯化脂肪酸(r=0.454,p=0.002)的含量呈正相關(guān),PARP1激動劑可以增加hepG2細胞中的脂質(zhì)沉積,反之,PARP1抑制劑可以減少hepG2中細胞的脂質(zhì)沉積。 結(jié)論：PARP1在人肝臟甘油三酯沉積中起著非常重要的作用。
[Abstract]:Study on the Mechanism of First Part 1 Poly ( ADP - ribose ) Synthetase ( ADP - ribose ) Synthetase in the Metabolic Disorder of Triglyceride Caused by Hypersaturated Fatty Acid Diet

Objective : To study the role and mechanism of PARP1 in hypertriglycerides by knockout mice with poly ( ADP - ribose ) polymerase1 ( PARP1 ) gene knockout mice .

Methods : Male wild - type 129S1 / SvImJ mice and PARP1 knockout mice ( PARP1 - / - , 129S - Parpltmlzqw / J , Kunming ) were randomly divided into 4 groups .
The mRNA expression level of triglyceride - related genes in liver tissues was detected by Western blot and real time RT - PCR . The DNA binding ability was detected by gel migration electrophoresis .

Results : After feeding with high - saturated fatty acid , the activity of parP1 knock - out or PARP1 inhibitor can obviously improve the abnormal blood lipid and lipid deposition caused by high - saturated fatty acid diet . The knock - out PARP1 or parp inhibitor can enhance the DNA binding ability of the peroxidase complex receptor 偽 and increase the expression level of the related genes involved in fatty acid oxidation .

Conclusion : PARP1 gene knockout can obviously improve triglyceride metabolism induced by high saturated fatty acid diet , and PARP1 plays an important role in lipid metabolism disorder .

Effect of Different Fatty Acids on Activity of Poly ( ADP - ribose ) Synthetase in Part Two

Objective : To investigate the effect of different kinds of fatty acids on PARP1 activity and to explore the causes of lipid metabolism disorder caused by high saturated fatty acid diet .

Methods : The primary cells of wild type mouse liver were cultured . Single unsaturated fatty acids , polyunsaturated fatty acids and saturated fatty acids of the same concentration were used to stimulate liver cells to detect the activity of PARP1 in liver cells .

Results : Monounsaturated fatty acids and polyunsaturated fatty acids could not increase PARP1 activity , while saturated fatty acids could activate PARP1 and increase PPAR偽 ' s poly ADP - ribose level . The real - time quantitative PCR results showed that saturated fatty acids could not increase the expression of PPAR偽 downstream target genes in wild - type cells , but could up - regulate the expression of PPAR偽 downstream target genes in PARP1 knockout cells .

Conclusion : Only saturated fatty acids in three fatty acids can activate PARP1 , and saturated fatty acids can increase the expression of PPAR偽 downstream target gene in PARP1 knockout cells . PARP1 activation is a key factor in lipid metabolism disorder caused by high saturated fatty acid diet .

the activity of poly ADP - ribose synthase in human liver tissue of the third part

Objective : To observe the activity of poly ADP - ribose synthase ( PARP1 ) in human liver tissue and its relationship with lipid content in liver tissue .

Methods : The liver tissues of clinical patients were collected , and the normal liver tissues were selected as experimental subjects . The content of triglyceride and non - esterified fatty acids in liver tissues was detected by using the Universal colorimetric method . The relationship between the activity and lipid content of liver tissues was analyzed by Pearson correlation model , and the degree of lipid deposition was detected by using the PARP1 agonist and inhibitor to incubate the hepG2 cells of human hepatoma cell line hepG2 .

Results : In human liver tissue , the activity of PARP1 was positively correlated with triglyceride ( r = 0.509 , p0.001 ) and non - esterified fatty acid ( r = 0.454 , p = 0.002 ) . The PARP1 agonist could increase the lipid deposition in hepG2 cells , whereas PARP1 inhibitors could reduce the lipid deposition of cells in hepG2 .

Conclusion : PARP1 plays a very important role in the deposition of triglyceride in human liver .

【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R575.5

【共引文獻】

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本文編號：1836962