本文選題：熱休克轉(zhuǎn)錄因子 + RNA干擾�。� 參考：《世界華人消化雜志》2015年24期

【摘要】：目的:通過慢病毒載體介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)過表達(dá)和干擾腸上皮細(xì)胞熱休克轉(zhuǎn)錄因子2(heat shock transcription factor 2,HSF2)表達(dá),研究不同HSF2水平對腸上皮細(xì)胞凋亡和遷移的影響.方法:(1)選取HT-29(人結(jié)腸癌細(xì)胞株)作為研究材料,丁酸鈉(設(shè)置不同時(shí)間點(diǎn)/濃度)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,MTT法檢測細(xì)胞增殖活性,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡、周期.按實(shí)驗(yàn)結(jié)果選取最佳丁酸鈉濃度及時(shí)間位點(diǎn);(2)慢病毒載體介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)過表達(dá)和干擾結(jié)腸上皮細(xì)胞HSF2表達(dá);用倒置熒光顯微鏡、Western blot法檢測目的基因在細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率;(3)細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)(劃痕法/Transwell小室)檢測過表達(dá)和干擾HSF2后細(xì)胞遷移能力的改變;(4)經(jīng)過表達(dá)和干擾HSF2后的細(xì)胞,給予丁酸鈉誘導(dǎo)凋亡,MTT法檢測細(xì)胞增殖活性,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞周期.結(jié)果:(1)MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:陰性對照組(NC組)的HT-29細(xì)胞增殖活性在實(shí)驗(yàn)觀察期間(0-96 h)不斷升高,48 h后,實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞對4個(gè)丁酸鈉濃度組均表現(xiàn)出明顯的生長抑制,相對于NC組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),故丁酸鈉對HT-29細(xì)胞的生長抑制作用呈濃度、時(shí)間依賴性.流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率結(jié)果顯示:NC組有少量凋亡,總凋亡率為0.548%±0.113%,而實(shí)驗(yàn)組經(jīng)4個(gè)不同濃度丁酸鈉處理48 h后,總凋亡率分別為51.588%±5.110%、77.732%±2.746%、90.115%±1.438%、94.247%±1.243%,與NC組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01).而當(dāng)丁酸鈉濃度2.5 mmol/L,凋亡率較1.25 mmol/L明顯上升.細(xì)胞周期檢測結(jié)果顯示:與NC相比,1.25 mmol/L丁酸鈉處理HT-29細(xì)胞48 h,G0/G1期HT-29細(xì)胞未顯示出明顯差異(P=1.000.05),即無明顯細(xì)胞周期阻滯;而2.5、5.0、10 mmol/L以上濃度在各觀察點(diǎn)均出現(xiàn)明顯的細(xì)胞周期阻滯現(xiàn)象,呈明顯的G1/G0期阻滯(P0.01);(2)慢病毒載體轉(zhuǎn)染效果檢測:通過倒置熒光顯微鏡(×100)觀察可發(fā)現(xiàn),各組HT-29細(xì)胞經(jīng)慢病毒載體轉(zhuǎn)染后均有GFP表達(dá),轉(zhuǎn)染率達(dá)80%以上.用Western blot法檢測結(jié)果顯示:慢病毒構(gòu)建載體能夠在細(xì)胞中高效、穩(wěn)定地過表達(dá)和干擾目的基因;(3)MTT法檢測轉(zhuǎn)染過表達(dá)和si RNA的HSF2細(xì)胞在丁酸鈉誘導(dǎo)凋亡環(huán)境下活性變化,結(jié)果顯示:過表達(dá)組細(xì)胞活性高于過表達(dá)對照組(P0.05),干擾組的細(xì)胞活性低于干擾對照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);(4)細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):過表達(dá)組的細(xì)胞遷移能力較NC組明顯增加,而干擾組則明顯降低(P0.05);(5)過表達(dá)和干擾HSF2后丁酸鈉誘導(dǎo)凋亡環(huán)境下細(xì)胞周期的影響:NC組以及使用慢病毒載體處理的5組之間,各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞周期分布差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);(6)過表達(dá)和干擾HSF2后丁酸鈉誘導(dǎo)凋亡環(huán)境下細(xì)胞凋亡率的變化:過表達(dá)組總凋亡率低于過表達(dá)對照組(P0.05);干擾組總凋亡率高于干擾對照組(P0.05).結(jié)論:細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),HSF2可能對腸上皮細(xì)胞起保護(hù)作用,提示HSF2可能通過調(diào)控細(xì)胞周期來實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞增殖的影響,但也可能還有其他途徑;HSF2可能在凋亡損傷時(shí)對腸上皮細(xì)胞起修復(fù)作用.
[Abstract]:Objective : To study the effects of different levels of HSF2 on apoptosis and migration of intestinal epithelial cells by slow viral vector mediated RNA interference . The apoptosis rate of HT - 29 cells was significantly higher than that in control group ( P0.05 ) .

【作者單位】： 昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科;云南省消化疾病研究所;
【基金】：國家自然科字基金資助項(xiàng)目,Nos,81160055,81260074 云南省科技廳-昆明醫(yī)學(xué)院聯(lián)合專項(xiàng)基金資助項(xiàng)目,Nos2011FB183,2007C0010R 云南省衛(wèi)生廳衛(wèi)生系統(tǒng)學(xué)科帶頭人培養(yǎng)計(jì)劃基金資助項(xiàng)目,No.D-201215 云南省社會發(fā)展科技計(jì)劃基金資助項(xiàng)目,No.2013CA021~~
【分類號】：R574

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1 李瀚e，

本文編號：1819797