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《天津醫(yī)科大學(xué)》 2015年

鼠李糖乳桿菌上調(diào)腸上皮細胞及小鼠結(jié)腸5-羥色胺轉(zhuǎn)運體表達

葛秀珍  

【摘要】：目的:腸易激綜合征(Irritable Bowel Syndrome,IBS)是消化科一種常見的以腹痛、腹脹、腹部不適同時伴有排便習(xí)慣和性狀改變?yōu)橹饕攸c的下消化道疾病,是最常見的一種功能性胃腸病,人群發(fā)病率較高,其病情及癥狀持續(xù)反復(fù),嚴(yán)重影響及困擾著患者的身心健康及生活質(zhì)量。5-羥色胺轉(zhuǎn)運體(serotonin transporte,SERT)是一種跨膜轉(zhuǎn)運蛋白,廣泛分布于腸道EC細胞及神經(jīng)突觸前膜上,其作用是將效應(yīng)部位過多聚集的5-羥色胺(5-hydroxytryp tamin,5-HT)再攝取,從而終止5-HT的作用,并為合成新的5-HT提供底物,在IBS的發(fā)病中有著重要的作用。文獻報道,SERT基因多態(tài)性可影響SERT表達,從而在IBS亞型的發(fā)生發(fā)展中起作用。然而,除基因本身之外,腸道微生態(tài)環(huán)境的改變也可能對SERT的表達產(chǎn)生影響。臨床上應(yīng)用益生菌治療腹瀉型及感染后腸易激綜合征取得了顯著療效。益生菌是否能夠調(diào)控SERT表達及其調(diào)控機制尚不清楚。鼠李糖乳桿菌LGG(Lactobacillus rhamnosus GG)是臨床實驗上研究比較多的益生菌之一。本研究通過采用鼠李糖乳桿菌上清液(Lactobacillus rhamnosus GG supernatant,LGG-s)對HT-29和Caco-2細胞及C57BL/6小鼠進行干預(yù),并檢測SERTmRNA及SERT蛋白表達情況,探討鼠李糖乳桿菌上清是否會影響SERT的表達,從而為益生菌緩解IBS的可能的機制提供新的方向。方法:(1)應(yīng)用3種不同稀釋濃度的鼠李糖乳桿菌上清液LGG-s(ATCC53103)和LGG-s(CGMCC1.3724)分別干預(yù)HT-29細胞和Caco-2細胞12小時和24小時;(2)將48只雌性C57BL/6小鼠分為4組,一組為對照組,給予正常飲用水,其他三組分別予以未稀釋LGG-s(ATCC53103),2倍稀釋的LGG-s(ATCC53103)和3倍稀釋的LGG-s(ATCC53103)。小鼠處理持續(xù)時間分別為1周、2周、3周及4周。每周每組處死3只小鼠取其結(jié)腸備用。應(yīng)用RT-PCR及Western-blot來檢測HT-29細胞、Caco-2細胞及小鼠結(jié)腸組織的SERT mRNA及SERT蛋白的表達水平。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS21.0統(tǒng)計學(xué)軟件包進行分析,計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(sx?)來表示;計量資料3組以上組間比較用單因素方差分析,方差齊性時用LSD檢驗,方差不齊時用Dunnett T3法檢驗,均以P0.05認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)果:LGG-s(ATCC53103)干預(yù)HT-29細胞和Caco-2細胞24小時,其SERT mRNA和SERT蛋白的表達水平與對照組相比明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。動物實驗中,未稀釋LGG-s(ATCC53103)組第一周末SERT mRNA水平明顯升高,是對照組的9.4倍,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000,P0.05),第二周末SERT mRNA水平快速下降至接近對照組水平;2倍稀釋LGG-s(ATCC53103)在前兩周和第四周均能上調(diào)SERT mRNA的表達,第三周SERT mRNA水平低于對照組水平,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000,P=0.006,P=0.007,均P0.05)。3倍稀釋的LGG-s(ATCC53103)在前3周對SERT mRNA無上調(diào)作用,在第4周SERT mRNA水平輕度升高,是對照組的1.6倍,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。整個實驗中,未稀釋LGG-s(ATCC53103)對SERT蛋白水平無明顯影響,2倍稀釋LGG-s(ATCC53103)組的SERT蛋白水平均高于對照組,但稍有波動。而3倍稀釋LGG-s(ATCC53103)組,前兩周SERT蛋白表達與對照組無明顯差異,第三周和第四周明顯高于對照組。結(jié)論:(1)LGG-s(ATCC53103)能夠上調(diào)腸道上皮和小鼠腸道組織的SERT mRNA和SERT蛋白的表達;(2)LGG-s(ATCC53103)上調(diào)SERT mRNA和SERT蛋白的表達是具有時間依賴性的。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R574
【目錄】：

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