本文選題：proBDNF + mBDNF��； 參考：《山東大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景NMDA受體為一種離子型谷氨酸鹽受體,由2個NR1(NMDAreceptor 1)亞基和2個NR2(NMDAreceptor 2)亞基組成。其中NR2亞基包含四個亞型(NR2A、NR2B、NR2C、NR2D)。既往研究表明NMDA受體在IBS患者腸粘膜表達(dá)增高并參與IBS內(nèi)臟高敏感的發(fā)生。然而哪種NMDA受體亞型在該機(jī)制中起關(guān)鍵作用目前\不清楚。在本研究中,我們將探討NMDA受體亞型在IBS-D患者內(nèi)臟高敏感中的作用。然而NMDA受體并不能直接誘導(dǎo)內(nèi)臟高敏感,需要借助受體活化后的產(chǎn)物。腦源性神經(jīng)生長因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)具有多種功能,在神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)細(xì)胞的生存,突觸的可塑性和疼痛的產(chǎn)生中發(fā)揮重要作用。既往研究表明,NMDA受體可誘導(dǎo)成熟BDNF(mature BDNF,mBDNF)的合成。因此,作為合成mBDNF的中間產(chǎn)物,前體BDNF(the precursor of brain derived neurotrophic factor,proBDNF)也可由NMDA受體誘導(dǎo)產(chǎn)生。近期研究表明proBDNF表達(dá)于腸粘膜并具有促進(jìn)炎癥性、內(nèi)臟性、手術(shù)性疼痛的作用。本研究將探討proBDNF在內(nèi)臟高敏感中的作用,并研究該N2亞型是否通過proBDNF參與內(nèi)臟高敏感的發(fā)生。近期一項研究表明腸粘膜NMDA受體通過誘導(dǎo)mBDNF的產(chǎn)生參與內(nèi)臟高敏感,然該研究并未涉及亞基探討。因此我們將同時探討該亞型是否也通過mBDNF參與內(nèi)臟高敏感機(jī)制的發(fā)生。目的1.探討NMDA受體哪種亞型在IBS-D患者腸粘膜表達(dá)增高并參與內(nèi)臟高敏感的發(fā)生;2.探討proBDNF在IBS-D患者腸粘膜表達(dá)情況及是否與IBS內(nèi)臟高敏感相關(guān);3.探討NMDA受體該亞型是否通過proBDNF參與IBS-D內(nèi)臟高敏感的發(fā)生;4.探討該亞型是否通過mBDNF促進(jìn)IBS-D內(nèi)臟高敏感的發(fā)生。方法1.臨床試驗根據(jù)羅馬Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)納入IBS-D患者及健康對照者,每位參與者完成一份信息采集及腸道功能評分量表,進(jìn)行腹部疼痛/不適嚴(yán)重程度及頻率評分。每位參與者進(jìn)行結(jié)腸鏡檢查,于直乙交界處鉗取3塊腸粘膜標(biāo)本,1塊用于免疫組化檢查,2塊用于western blot檢查。2.細(xì)胞試驗以人結(jié)腸上皮細(xì)胞系ht-29為研究對象,分別以MK-801阻斷NMDA受體以Ro25-6981特異性阻斷NR2B亞型。實時熒光定量RT-PCR、western blot檢測proBDNF 的表達(dá),western blot、ELISA 檢測 mBDNF 的表達(dá)。為了研究NMDA受體活化后對proBDNF及mBDNF合成的直接作用,激動劑組分為5組,分別為50 μ MNMDA與10 μ MD-絲氨酸組,100 μ MNMDA與10 μMD-絲氨酸組,500 μMNMDA與10 μMD-絲氨酸組,100 μM NMDA組,10 μMD-絲氨酸組,于3h、6h、12h、24h、48h獲取細(xì)胞或培養(yǎng)基后進(jìn)行后續(xù)實驗。為了評估NR2B亞基對BDNF合成作用的影響,分別用MK-801阻斷全部NMDA受體和Ro25-6981特異性阻斷NR2B亞基,比較兩者對proBDNF及mBDNF合成的影響。3.統(tǒng)計學(xué)分析兩組之間計量資料的比較均采用獨立樣本t檢驗方法,分類變量的比較采取Fisher確切概率法。多組樣本的比較采用單因素ANOVA分析,隨后組間的兩兩比較采用Tukey檢驗。NR2B與proBDNF/mBDNF的相關(guān)性采取Pearson線性相關(guān)。proBDNF/mBDNF蛋白表達(dá)與腹部疼痛評估的相關(guān)性采取Spearman秩相關(guān)。P值小于0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1.臨床試驗1)NMDA受體NR2亞基四個亞型均主要表達(dá)于腸粘膜腸上皮細(xì)胞;2)IBS-D患者腸粘膜中,NMDA受體只有NR2B亞型表達(dá)增高,且與患者腹部疼痛/不適評分及頻率呈正相關(guān);3)IBS-D患者腸粘膜中,proBDNF表達(dá)增高,且與腹部疼痛/不適嚴(yán)重程度評分及頻率呈正相關(guān);4)NR2B亞型表達(dá)與proBDNF的表達(dá)呈正相關(guān);5)IBS-D患者腸粘膜中,mBDNF表達(dá)增高,且與腹部疼痛/不適嚴(yán)重程度評分及頻率呈正相關(guān);6)NR2B亞型表達(dá)與mBDNF表達(dá)也呈正相關(guān)。2.細(xì)胞試驗在ht-29細(xì)胞,激動NMDA受體后可引起proBDNF和mBDNF表達(dá)增高,且proBDNF/mBDNF的合成量與激動劑濃度呈正相關(guān)。MK-801或Ro25-6981可使這種升高完全恢復(fù)到對照組水平,且兩者在抑制效果上無統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論1.在NR2的四個亞型中,只有NR2B在IBS-D患者腸粘膜中表達(dá)增高并與患者內(nèi)臟高敏感嚴(yán)重程度相關(guān);2.NR2B通過proBDNF參與IBS-D內(nèi)臟高敏感的發(fā)生;3.NR2B通過mBDNF參與IBS-D內(nèi)臟高敏感的發(fā)生。
[Abstract]:Background of the Invention The NMDA receptor is an ionic glutamate receptor consisting of two NR1 ( NMDAreceptor 1 ) subunits and two NR2 ( NMDAreceptor 2 ) subunits , wherein the NR2 subunit comprises four subtypes ( NR2A , NR2B , NR2C , NR2D ) . 浣撳湪IBS鎮(zhèn)ｈ，

本文編號：1776990