本文選題：芳香烴受體 + 腸黏膜屏障��； 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：目的與背景:腸粘膜屏障(Intestinal epithelial barrier,IEB)是腸道重要的結(jié)構(gòu)和功能屏障。IEB不僅能參與腸道結(jié)構(gòu)維系,也能通過(guò)調(diào)控腸道物質(zhì)的消化吸收,提供機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育所必須的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。同時(shí),IEB抵御和清除致病菌,并維系機(jī)體內(nèi)穩(wěn)態(tài)。但各種急慢性病理?xiàng)l件的刺激,均可能引起IEB功能障礙,繼發(fā)腸道功能紊亂,甚至導(dǎo)致腸源性感染和全身性炎癥反應(yīng)。腸上皮細(xì)胞(Intestinal epithelial cells,IECs)是腸粘膜屏障最主要的結(jié)構(gòu)組成。在連續(xù)相鄰的細(xì)胞膜之間,緊密連接和緊密連接相關(guān)蛋白,比如膜蛋白claudins,occludins以及胞質(zhì)斑蛋白zonula occludens(ZO),共同構(gòu)成一個(gè)具有選擇性通透性的復(fù)合體。它不僅是腸粘膜的重要組成部分,也是調(diào)控腸粘膜細(xì)胞旁通路的關(guān)鍵元件。近來(lái)發(fā)現(xiàn),缺氧或LPS刺激下,肌球蛋白輕鏈(MLC)受到肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK)的激活而發(fā)生磷酸化,誘發(fā)腸粘膜緊密連接蛋白ZO-1的結(jié)構(gòu)和功能破壞,引起腸粘膜屏障通透性的增加。因此,MLCK-pMLC磷酸化通路在介導(dǎo)腸粘膜屏障的破壞中發(fā)揮重要作用,其機(jī)制就是緊密連接的破壞。芳香烴受體(Aryl Hydrocarybon Receptor,AhR),一種需要與配體配對(duì)并激活的核轉(zhuǎn)錄因子,廣泛表達(dá)于機(jī)體的各個(gè)組織和細(xì)胞。與配體結(jié)合以后,活化的AhR由胞漿轉(zhuǎn)移入核,隨后與AhR核轉(zhuǎn)位子(AhR Nuclear Translocator,ARNT)形成異源二聚體,調(diào)控目的基因表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn),內(nèi)源性配體比如吲哚并[3,2-B]咔唑-6-甲醛(6-formylindolo(3,2-b)carbazole,FICZ)能夠活化AhR,參與細(xì)胞生理功能的維持,如細(xì)胞的增值、凋亡以及免疫反應(yīng)等。越來(lái)越多的證據(jù)表明,AhR在調(diào)節(jié)腸粘膜屏障功能上發(fā)揮著重要作用。其中,大部分都是研究AhR在腸道免疫細(xì)胞中的作用,比如在腸道固有單核細(xì)胞(Lamina propria mononuclear cells,LPMCs)中上調(diào)IL-22來(lái)抑制免疫反應(yīng)等。而事實(shí)上,AhR在腸上皮細(xì)胞中也大量表達(dá),并且腸上皮細(xì)胞有更多的機(jī)會(huì)與AhR從食物來(lái)源以及菌群共生產(chǎn)生的內(nèi)源性配體接觸。本課題擬在模擬體內(nèi)腸梗阻模型以及體外缺氧模型,通過(guò)跨膜電阻檢測(cè)、蛋白質(zhì)免疫印跡、realtime-PCR、免疫熒光等技術(shù),探討腸梗阻缺血缺氧條件下AhR的活化是如何參與調(diào)控腸屏障功能,并探討其中作用機(jī)制,為患者腸粘膜功能的保護(hù)提供新思路。方法:1、建立小鼠腸梗阻模型,應(yīng)用HE染色、組織學(xué)評(píng)分、Ussing Chamer技術(shù),觀察腸粘膜損傷情況。2、通過(guò)免疫熒光、realtime-PCR技術(shù),觀察AhR分布表達(dá)以及活性的變化。3、利用免疫熒光、realtime-PCR技術(shù),觀察腸梗阻模型中緊密連接蛋白ZO-1分布與表達(dá)的變化。4、利用免疫熒光、realtime-PCR技術(shù),觀察腸梗阻模型中MLCK、pMLC分布與表達(dá)的變化。5、構(gòu)建體外Caco-2缺氧模型,通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡、realtime-PCR技術(shù)、TER檢測(cè),進(jìn)一步觀察缺氧條件下,FICZ活化AhR后,腸細(xì)胞屏障損傷情況以及MLCK-pMLC通路的影響。6、通過(guò)干擾AhR,通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù),觀察缺氧條件下AhR缺陷對(duì)MLCK-pMLC通路的影響。結(jié)果:1、小鼠腸梗阻模型中,腸粘膜正常形態(tài)學(xué)改變,絨毛斷裂、水腫,上皮細(xì)胞脫落,chiu氏組織評(píng)分增加,粘膜通透性增加。而加入AhR激動(dòng)劑FICZ后,腸粘膜損傷緩解。2、小鼠腸梗阻模型中,緊密連接蛋白ZO-1連續(xù)性斷裂,表達(dá)減弱。而加入FICZ后,ZO-1連續(xù)性有所恢復(fù)。3、小鼠腸梗阻模型中,MLCK、pMLC表達(dá)明顯增強(qiáng)。而FICZ后,抑制了兩者表達(dá)。4、體外Caco-2缺氧模型中,AhR的活化抑制了MLCK和pMLC蛋白水平表達(dá),同時(shí)維持了ZO-1的表達(dá)分布。通透性實(shí)驗(yàn)顯示腸細(xì)胞屏障得到恢復(fù)。5、體外Caco-2缺氧模型中,AhR的缺陷能夠誘導(dǎo)MLCK-pMLC通路的開(kāi)放。結(jié)論:1、腸梗阻模型中,AhR活化能緩解腸屏障功能損傷。2、腸梗阻模型中,AhR活化對(duì)腸屏障的保護(hù)作用是通過(guò)維護(hù)腸上皮緊密連接ZO-1的形態(tài)來(lái)實(shí)現(xiàn)。3、AhR活化對(duì)MLCK-pMLC通路的抑制是AhR調(diào)節(jié)緊密連接潛在機(jī)制。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R574

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本文編號(hào)：1741737