發(fā)布時間：2018-04-12 22:31

  本文選題：芳香烴受體 + 腸黏膜屏障��； 參考：《第三軍醫(yī)大學》2016年碩士論文

【摘要】：目的與背景:腸粘膜屏障(Intestinal epithelial barrier,IEB)是腸道重要的結構和功能屏障。IEB不僅能參與腸道結構維系,也能通過調控腸道物質的消化吸收,提供機體生長發(fā)育所必須的營養(yǎng)物質。同時,IEB抵御和清除致病菌,并維系機體內穩(wěn)態(tài)。但各種急慢性病理條件的刺激,均可能引起IEB功能障礙,繼發(fā)腸道功能紊亂,甚至導致腸源性感染和全身性炎癥反應。腸上皮細胞(Intestinal epithelial cells,IECs)是腸粘膜屏障最主要的結構組成。在連續(xù)相鄰的細胞膜之間,緊密連接和緊密連接相關蛋白,比如膜蛋白claudins,occludins以及胞質斑蛋白zonula occludens(ZO),共同構成一個具有選擇性通透性的復合體。它不僅是腸粘膜的重要組成部分,也是調控腸粘膜細胞旁通路的關鍵元件。近來發(fā)現(xiàn),缺氧或LPS刺激下,肌球蛋白輕鏈(MLC)受到肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK)的激活而發(fā)生磷酸化,誘發(fā)腸粘膜緊密連接蛋白ZO-1的結構和功能破壞,引起腸粘膜屏障通透性的增加。因此,MLCK-pMLC磷酸化通路在介導腸粘膜屏障的破壞中發(fā)揮重要作用,其機制就是緊密連接的破壞。芳香烴受體(Aryl Hydrocarybon Receptor,AhR),一種需要與配體配對并激活的核轉錄因子,廣泛表達于機體的各個組織和細胞。與配體結合以后,活化的AhR由胞漿轉移入核,隨后與AhR核轉位子(AhR Nuclear Translocator,ARNT)形成異源二聚體,調控目的基因表達。研究發(fā)現(xiàn),內源性配體比如吲哚并[3,2-B]咔唑-6-甲醛(6-formylindolo(3,2-b)carbazole,FICZ)能夠活化AhR,參與細胞生理功能的維持,如細胞的增值、凋亡以及免疫反應等。越來越多的證據表明,AhR在調節(jié)腸粘膜屏障功能上發(fā)揮著重要作用。其中,大部分都是研究AhR在腸道免疫細胞中的作用,比如在腸道固有單核細胞(Lamina propria mononuclear cells,LPMCs)中上調IL-22來抑制免疫反應等。而事實上,AhR在腸上皮細胞中也大量表達,并且腸上皮細胞有更多的機會與AhR從食物來源以及菌群共生產生的內源性配體接觸。本課題擬在模擬體內腸梗阻模型以及體外缺氧模型,通過跨膜電阻檢測、蛋白質免疫印跡、realtime-PCR、免疫熒光等技術,探討腸梗阻缺血缺氧條件下AhR的活化是如何參與調控腸屏障功能,并探討其中作用機制,為患者腸粘膜功能的保護提供新思路。方法:1、建立小鼠腸梗阻模型,應用HE染色、組織學評分、Ussing Chamer技術,觀察腸粘膜損傷情況。2、通過免疫熒光、realtime-PCR技術,觀察AhR分布表達以及活性的變化。3、利用免疫熒光、realtime-PCR技術,觀察腸梗阻模型中緊密連接蛋白ZO-1分布與表達的變化。4、利用免疫熒光、realtime-PCR技術,觀察腸梗阻模型中MLCK、pMLC分布與表達的變化。5、構建體外Caco-2缺氧模型,通過蛋白質免疫印跡、realtime-PCR技術、TER檢測,進一步觀察缺氧條件下,FICZ活化AhR后,腸細胞屏障損傷情況以及MLCK-pMLC通路的影響。6、通過干擾AhR,通過蛋白質免疫印跡技術,觀察缺氧條件下AhR缺陷對MLCK-pMLC通路的影響。結果:1、小鼠腸梗阻模型中,腸粘膜正常形態(tài)學改變,絨毛斷裂、水腫,上皮細胞脫落,chiu氏組織評分增加,粘膜通透性增加。而加入AhR激動劑FICZ后,腸粘膜損傷緩解。2、小鼠腸梗阻模型中,緊密連接蛋白ZO-1連續(xù)性斷裂,表達減弱。而加入FICZ后,ZO-1連續(xù)性有所恢復。3、小鼠腸梗阻模型中,MLCK、pMLC表達明顯增強。而FICZ后,抑制了兩者表達。4、體外Caco-2缺氧模型中,AhR的活化抑制了MLCK和pMLC蛋白水平表達,同時維持了ZO-1的表達分布。通透性實驗顯示腸細胞屏障得到恢復。5、體外Caco-2缺氧模型中,AhR的缺陷能夠誘導MLCK-pMLC通路的開放。結論:1、腸梗阻模型中,AhR活化能緩解腸屏障功能損傷。2、腸梗阻模型中,AhR活化對腸屏障的保護作用是通過維護腸上皮緊密連接ZO-1的形態(tài)來實現(xiàn)。3、AhR活化對MLCK-pMLC通路的抑制是AhR調節(jié)緊密連接潛在機制。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R574

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本文編號：1741737