本文關(guān)鍵詞：HBx對HepG2細胞脂代謝的影響及可能的機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《重慶醫(yī)科大學(xué)》 2012年

HBx對HepG2細胞脂代謝的影響及可能的機制

陳娟  

【摘要】：研究背景 據(jù)最新數(shù)據(jù)顯示[1]，我國約有9.3百萬人為慢性乙肝病毒感染者，HBV感染及其導(dǎo)致的各種疾病，是我國所面臨的一個嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。最近，有報道在CHB和CHC患者中，肝脂肪變性與肝纖維化程度獨立相關(guān)[2]，后者與肝硬化和肝癌的發(fā)生密切相關(guān)。在HBV感染中肝脂肪變發(fā)生率為27%-51%[3-4]，但有關(guān)HBV與肝脂肪變關(guān)系及其相關(guān)分子機制，國內(nèi)外研究很少，尚未達成共識。脂肪肝是病毒感染、飲食等多種因素綜合作用引起的肝臟病變，即脂肪在肝細胞內(nèi)的過多堆積。近年，隨著人民生活水平越來越高，國民生活方式和膳食模式發(fā)生了相當(dāng)大的變化，膳食中高脂飲食所占比例呈上升趨勢，同時脂肪肝的發(fā)生率也逐年上升。所以，HBV、高脂環(huán)境與肝脂肪變性的關(guān)系的研究具有重要意義。晚近有文獻[5]報道HBx可能在HBV相關(guān)的肝細胞脂肪變發(fā)生發(fā)展中起重要作用，但另有研究者[6]有與此不同的觀點。因此，HBV是否通過HBx參與肝細胞脂肪變性的發(fā)生？其可能的分子機制是否與LXRα、SREBP-1、FAS等調(diào)節(jié)脂代謝的重要基因有關(guān)？HBV、高脂環(huán)境和肝脂肪變性之間的關(guān)系如何？針對以上問題，本研究擬建立表達HBx的HepG2/HBx細胞模型，首先觀察HBx對HepG2細胞脂代謝相關(guān)基因表達的影響；在此基礎(chǔ)上進一步研究油酸鈉處理HepG2/HBx細胞與HepG2細胞后，兩細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積的差異，探討HBx在肝細胞脂代謝中的作用及可能的分子機制。本研究分以下兩部分。 第一部分HBx對HepG2細胞脂代謝相關(guān)基因表達的影響 目的 建立表達HBx的HepG2/HBx細胞模型，，探討HBx對脂代謝相關(guān)基因表達的影響。 方法 1．將質(zhì)粒pIRES2-eGFP-HBx轉(zhuǎn)染入HepG2中，建立表達HBx的HepG2/HBx細胞模型(HepG2/HBx組)；以轉(zhuǎn)染空載體pIRES2-eGFP(HepG2/pIRES2組)及未轉(zhuǎn)染（HepG2組）的HepG2細胞作對照。 2．轉(zhuǎn)染后24h、48h、72h，熒光顯微鏡觀察GFP的表達；檢測細胞內(nèi)TG含量；RT-PCR方法檢測SREBP-1, LXRα mRNA表達水平；Western blot檢測HBx，LXRα及FAS蛋白表達變化。 結(jié)果 1．在轉(zhuǎn)染后24h、48h、72h, HepG2/HBx細胞和HepG2/pIRES2細胞中有GFP的表達并隨時間延長而增多、增強，僅在HepG2/HBx細胞內(nèi)有HBx表達，并且隨轉(zhuǎn)染時間的延長而逐漸增加（P＜0.05）。 2．在轉(zhuǎn)染后24h、48h、72h, HepG2/HBx細胞內(nèi)LXR、SREBP-1的mRNA表達以及LXRα、FAS蛋白表達，在各相同時間點均較對照組明顯增加（P0.05/0.01），隨時間的延長而逐漸增多（P0.05/0.01），且與HBx表達量均呈正相關(guān)（P＜0.05）。HepG2/HBx細胞內(nèi)TG含量與對照組相比，差異尚無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。 結(jié)論 1．成功建立HepG2/HBx細胞模型。 2．HBx-LXRα-SREBP-1/FAS通路參與調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和表達，可能是引起肝細胞脂肪變性發(fā)生的重要分子機制之一。 第二部分HBx對油酸鈉誘導(dǎo)HepG2細胞脂質(zhì)沉積的影響 目的 在HepG2-HBx細胞模型基礎(chǔ)上給予油酸鈉處理，探討HBx對油酸鈉誘導(dǎo)HepG2細胞脂質(zhì)沉積的影響。 方法 1．將質(zhì)粒pIRES2-eGFP-HBx轉(zhuǎn)染入HepG2細胞中，建立表達HBx的細胞模型（HepG2-HBx）；以轉(zhuǎn)染空載體pIRES2-eGFP（HepG2-pIRES2）和HepG2細胞（HepG2）作對照。轉(zhuǎn)染后每8h用熒光顯微鏡分別觀察各組細胞內(nèi)GFP的表達，取轉(zhuǎn)染后首次觀察到GFP表達的時間點作為開始給于油酸鈉處理的時間點。 2．油酸鈉處理各組細胞24h、48h（分別命名為HBx/OA組、空/OA組、G2/OA組），TG含量測定及油紅O染色了解細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積情況；RT-PCR法檢測SREBP-1和LXRα的mRNA表達水平,Western blot檢測HBx、LXRα及FAS蛋白表達變化。 結(jié)果 1．油酸鈉處理時間點的確定:在轉(zhuǎn)染后8h各組細胞內(nèi)均未觀察到綠色熒光，而轉(zhuǎn)染后16h觀察到HepG2-HBx組和HepG2-pIRES2組細胞內(nèi)有綠色熒光，故選擇轉(zhuǎn)染后16h作為開始給于油酸鈉處理的時間點。 2．在相同油酸鈉處理的條件下，HBx/OA組細胞內(nèi)脂滴數(shù)量和TG含量與對照組相比均明顯增加（P0.01）；給予油酸鈉處理細胞24h，HBx/OA組細胞內(nèi)LXRα，SREBP-1的mRNA表達量和LXRα和FAS蛋白表達量較對照組均明顯增加（P0.01/0.05）。 結(jié)論 HBx通過LXRα-SREBP-1/FAS通路增加油酸鈉誘導(dǎo)脂質(zhì)在HepG2細胞沉積的作用。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R575.5
【目錄】：

下載全文 更多同類文獻

CAJ全文下載

(如何獲取全文？ 歡迎：購買知網(wǎng)充值卡、在線充值、在線咨詢)

CAJViewer閱讀器支持CAJ、PDF文件格式

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 張琴;彭俊;沈薇;;乙肝病毒X基因參與肝細胞脂肪變性的作用及機制的初步研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2011年23期

2 鄭黎黎;沈薇;;HBx與肝細胞脂肪變性關(guān)系及可能機制的細胞學(xué)研究[J];生物技術(shù)通報;2010年07期

3 畢楊;黃佳祎;吳明軍;張琴;左國偉;何昀;馮濤;;穩(wěn)定表達HBx的HepG2細胞對羅格列酮敏感性的影響及其機制研究[J];腫瘤;2008年12期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 彭仙娥;乙型肝炎病毒在非酒精脂肪肝發(fā)生中的作用及機制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2009年

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 張琴;彭俊;沈薇;;乙肝病毒X基因誘導(dǎo)肝細胞脂肪變性作用機制的研究[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2012年01期

2 陳娟;沈薇;;乙肝病毒X蛋白對油酸鈉誘導(dǎo)HepG2細胞脂質(zhì)沉積的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2012年03期

3 邱烈旺;顧陸昀;呂琳;王奎;梅浙川;;水甘油通道蛋白在非酒精性脂肪變性肝細胞模型中的表達及意義[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2012年07期

4 陳斌;陸旭;周志強;;人股動脈粥樣硬化斑塊中表皮型脂肪酸結(jié)合蛋白與脂肪酸合成酶的表達[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2012年05期

5 王真昕;易鋼;;肝癌蛋白質(zhì)組學(xué)研究進展[J];化學(xué)世界;2012年11期

6 張琴;彭俊;沈薇;;乙型肝炎病毒HBx基因shRNA真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定[J];中國生物制品學(xué)雜志;2012年05期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王艷;HepG2.2.15細胞脂肪變性對HBV基因表達及SOCS-3和SREBP-1c通路的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

2 張琴;乙肝病毒X基因參與肝細胞脂肪變性的作用及機制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 李彬鵬;過氧化物酶體增殖物激活受體γ在HBV、HCV感染肝細胞癌組織中的表達[D];南華大學(xué);2011年

2 饒紫蘭;乙型肝炎表面抗原主蛋白改變HepG2細胞脂代謝基因表達[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

3 陳斌;人股動脈粥樣硬化斑塊中E-FABP與FAS的表達[D];鄭州大學(xué);2013年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 郭啟帥;黃曦;張俊;李少林;;靶向PeroxiredoxinⅠ基因的shRNA真核表達載體的構(gòu)建及生物學(xué)功能鑒定[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2011年02期

2 王志明 ,陳偉華 ,李明山 ,田琦琦 ,郭素萍 ,譚復(fù)明 ,劉麗寧;乙型肝炎患者1～15年的追蹤觀察及預(yù)后分析[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2002年11期

3 張勇;金澄雁;顧體梅;張明亮;楊佐南;;非酒精性脂肪肝危險因素及與代謝綜合征的相關(guān)性[J];浙江臨床醫(yī)學(xué);2007年11期

4 范建高,曾民德,陳政績,范竹萍,沈鐳,李繼強,邱德凱;265例脂肪肝患者病因及其特點分析[J];上海醫(yī)學(xué);1998年02期

5 鄭黎黎;沈薇;熊玲;;乙型肝炎病毒X蛋白表達與肝細胞脂肪變性的關(guān)系及其機制[J];中國生物制品學(xué)雜志;2010年09期

6 石曉霞;任超杰;張秀華;陳秀生;汪建軍;;HBV-DNA定量與乙型肝炎HBV-M及肝功能相關(guān)分析[J];現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2007年03期

7 趙素元,黃星,鄒林樾,龐秀慧;乙型肝炎血清標(biāo)志模式與病毒載量的關(guān)系及意義[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進展;2003年03期

8 陸建華;黃飛;倪正平;倪東濤;陳建國;;肝癌高發(fā)區(qū)各種人群中 HBV 五項標(biāo)志的常見模式[J];醫(yī)學(xué)理論與實踐;1991年04期

9 吳瓊;易圖明;;家兔載脂蛋白AⅠ和血脂與動脈壁脂質(zhì)斑塊及肝脂肪變的關(guān)系[J];衛(wèi)生職業(yè)教育;2007年05期

10 杜會芹;尹苗;葉紅燕;商允菊;戴學(xué)棟;荊文;張晾;肖寧;李繼峰;潘杰;;apoE/LDLR雙基因突變小鼠肝臟脂代謝相關(guān)基因的表達研究[J];中華病理學(xué)雜志;2007年11期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 廖志勇;SENNES公司的細胞生長“控制閥”SDI－1[J];藥學(xué)進展;1996年02期

2 田春艷,徐光,胡昌奇,宋后燕;Miyabenol C和Kobophenol A促MCF-7細胞生長作用途徑[J];復(fù)旦學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2002年06期

3 周寶宏;;T細胞低親和力IL2受體介導(dǎo)T細胞生長的負調(diào)節(jié)作用[J];國外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生經(jīng)濟分冊);1988年03期

4 ;腫瘤細胞比正常細胞生長快嗎?[J];人民軍醫(yī);1988年02期

5 陳莉;IGF—Ⅰ受體對細胞生長和轉(zhuǎn)化的作用[J];武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1996年02期

6 王占祥,章翔,費舟,王小仲;RNasin對腦膠質(zhì)瘤細胞生長的抑制作用[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2000年08期

7 陳水平;;別把你的細胞當(dāng)奴隸[J];養(yǎng)生大世界(B版);2008年01期

8 ;快速生長骨骼試劑盒[J];生物醫(yī)學(xué)工程與臨床;2010年06期

9 王萍;唐淑珍;劉曉明;叢敏;閻鐘鈺;尤紅;王寶恩;賈繼東;;黃芪刺激體外培養(yǎng)的大鼠肝卵圓細胞生長的作用[J];中國中西醫(yī)結(jié)合雜志;2005年S1期

10 李雄偉;張駿;陳兵;;雙側(cè)肋骨纖維結(jié)構(gòu)不良伴細胞生長活躍1例[J];東南國防醫(yī)藥;2006年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 宋宇彤;趙旭;王秉治;;雄性小鼠生殖細胞Cdc2與P~(70)S6K相關(guān)性的研究[A];第七屆全國酶學(xué)學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2004年

2 于小倩;彭雙清;方厚華;;金屬硫蛋白MT-Ⅰ/Ⅱ缺失對小鼠大腦皮層神經(jīng)元生長發(fā)育的影響[A];中國科學(xué)技術(shù)協(xié)會第十屆年會21分會場論文匯編[C];2008年

3 陳紅風(fēng);尹劍云;;復(fù)方仙蓉顆粒對MCF10AT細胞增殖的影響[A];2011年中醫(yī)外科學(xué)術(shù)年會論文集[C];2011年

4 劉古山;劉滬麗;;細胞增殖灰色模型的建立[A];第三屆全國控制與決策系統(tǒng)學(xué)術(shù)會議論文集[C];1991年

5 吳濤;白海;王存邦;路繼紅;歐劍鋒;;成人骨髓間充質(zhì)干細胞對K562細胞生長的影響[A];第10屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2005年

6 李擒龍;晏偉;成勝權(quán);王文勇;張志培;王麗;張靜;王文亮;;RNAi技術(shù)對APMCF1基因表達的抑制作用及其對HepG2細胞的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2006年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

7 陳一新;郭一松;吳敦肅;;在細胞生長不同階段Ca~■分布的變化[A];第五次全國電子顯微學(xué)會議論文摘要集[C];1988年

8 林凱隆;張章堂;鄧燕妮;賴裕順;莊一全;;利用奈米微粒進行細胞毒性測試之研究[A];第八屆海峽兩岸氣溶膠技術(shù)研討會暨第三屆空氣污染技術(shù)研討會論文摘要集[C];2011年

9 劉學(xué)榮;武發(fā)菊;安芳蘭;董文教;宋玉霞;董金杰;陳苗苗;牟克斌;黃銀君;;不同濃度的乳酸對BHK-21細胞生長代謝的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會生物制品學(xué)分會中國微生物學(xué)會獸醫(yī)微生物學(xué)專業(yè)委員會2010年學(xué)術(shù)年會（第三屆中國獸藥大會學(xué)術(shù)論壇）論文集[C];2010年

10 賀慶芝;廖端芳;;Daxx及相關(guān)蛋白在介導(dǎo)ox-LDL誘導(dǎo)巨噬細胞凋亡中的作用[A];湖南省生理科學(xué)會2006年度學(xué)術(shù)年會論文摘要匯編[C];2007年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 永誠;[N];中國醫(yī)藥報;2000年

2 蔣建平 編譯;[N];中國醫(yī)藥報;2007年

3 經(jīng)天;[N];中藥事業(yè)報;2000年

4 本報記者 符王潤;[N];廣東科技報;2011年

5 陳勇;[N];中國醫(yī)藥報;2005年

6 張中橋;[N];健康報;2007年

7 陳茂樑 蘇健;[N];中國醫(yī)藥報;2006年

8 記者 鄭曉春;[N];科技日報;2010年

9 本報記者 鄒曦;[N];北京科技報;2010年

10 楊秀穎;[N];中國醫(yī)藥報;2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 樊煒亮;兩個細胞自噬基因Barkor與Keap1的鑒定和功能分析[D];浙江大學(xué);2011年

2 戴波;巨噬細胞移動抑制因子對細胞增殖、遷移、粘附的機理研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

3 彭少華;AnnexinI在α粒子轉(zhuǎn)化BEP2D細胞及肺癌組織中高表達及其基因轉(zhuǎn)染對永生化BEP2D細胞生長的影響[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2000年

4 袁健;手性釕配合物Λ-WH0402的抗腫瘤活性及其作用機制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

5 廖勁松;原生質(zhì)體融合提高玫瑰茄細胞生長速率的研究[D];華南理工大學(xué);2004年

6 江蓓;谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶Mu亞型在糖尿病腎病發(fā)病中的作用及干預(yù)治療的實驗研究[D];山東大學(xué);2009年

7 林影;磁場對脆壁克魯維氏酵母細胞生長及菊糖酶生物合成作用的研究[D];華南理工大學(xué);1997年

8 宋鍇;硫化氫在腎臟纖維化中的作用及其機制研究[D];蘇州大學(xué);2013年

9 胡軼紅;兩個腫瘤相關(guān)基因的結(jié)構(gòu)與功能—細胞極性蛋白hASIP的不同轉(zhuǎn)錄本對人肝癌細胞周期和Fas/FasL介導(dǎo)的細胞凋亡的調(diào)節(jié)及新基因F-lana的轉(zhuǎn)化作用[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2005年

10 肖澍;RIG-G基因表達調(diào)控機制及其生物學(xué)功能的研究[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 查潔;Disulfiram聯(lián)合Cu對Raji細胞及其裸鼠移植瘤生長的影響及分子機制的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

2 俞騰飛;異源因子誘導(dǎo)山羊IPS細胞[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

3 張建;利莫那班對肝星狀細胞增殖和凋亡的影響及作用機制[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

4 張巖巖;中藥艾迪對人喉癌細胞Hep-2體外生長作用的研究[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2012年

5 賈海燕;蕎麥中活性成分對Hep G2細胞作用的初步研究[D];山西大學(xué);2012年

6 王海東;C_(60)及其衍生物對細胞生長的作用和機理的研究[D];大慶石油學(xué)院;2003年

7 傅鈺雁;紅霉素對A549細胞的組蛋白去乙�；�2的影響及其對細胞周期和凋亡的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2014年

8 李威;香煙導(dǎo)致A549細胞遺傳物質(zhì)損傷的實驗研究[D];武漢科技大學(xué);2012年

9 韓一;丹參抑制血管平滑肌細胞增殖和遷移的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

10 李雪飛;四種中藥單體對HepG2細胞枯草溶菌素轉(zhuǎn)化酶9表達的影響[D];南華大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：HBx對HepG2細胞脂代謝的影響及可能的機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：173893