本文選題：肝星狀細(xì)胞　切入點(diǎn)：SILAC　出處：《清華大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：肝星狀細(xì)胞(HSCs)是肝纖維化效應(yīng)細(xì)胞(肌成纖維細(xì)胞，MFs)的主要來源。臨床和實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)肝纖維化的逆轉(zhuǎn)和恢復(fù)伴隨著活化HSCs的清除。已知的四種清除方式中，細(xì)胞凋亡、免疫清除和衰老主要是減少活化HSCs的數(shù)目，而表型逆轉(zhuǎn)可以促使活化的HSCs恢復(fù)非活化狀態(tài)甚至靜止表型。理解肝星狀細(xì)胞在損傷中的轉(zhuǎn)化機(jī)制能夠?yàn)殛U明肝纖維化機(jī)制和治療肝纖維化提供依據(jù)。 本研究為了深入了解活化HSCs表型逆轉(zhuǎn)的分子機(jī)制，通過SILAC結(jié)合LTQ-FT技術(shù)分別檢測(cè)了人肝星狀細(xì)胞活化期和恢復(fù)期這兩種細(xì)胞狀態(tài)之間的細(xì)胞差異蛋白和分泌差異蛋白。利用MaxQuant軟件定量分析分別得到1347個(gè)定量細(xì)胞蛋白和784個(gè)定量分泌蛋白，其中，恢復(fù)期細(xì)胞與活化期細(xì)胞相比，在細(xì)胞蛋白質(zhì)組中鑒定到212個(gè)上調(diào)(差異值RatioL/H≥1.5)和61個(gè)下調(diào)蛋白(差異值RatioL/H≤0.67)；在分泌蛋白質(zhì)組共鑒定到109上調(diào)蛋白(差異值RatioL/H≥1.5)和221個(gè)下調(diào)蛋白(差異值RatioL/H≤0.67)。生物信息學(xué)分析差異蛋白發(fā)現(xiàn)，與活化組比較，恢復(fù)組在細(xì)胞水平的上調(diào)差異蛋白功能變化主要集中在了氧化-還原反應(yīng)和脂類代謝等方面，在分泌水平的上調(diào)蛋白功能變化主要體現(xiàn)在氨基酸代謝和糖類代謝等途徑，無論細(xì)胞水平還是分泌水平，下調(diào)蛋白生物功能首先體現(xiàn)在細(xì)胞骨架重塑方面。部分差異蛋白(STAT1、FLNA、LASP1、NAMPT、LAMB1和UBE4B等)經(jīng)免疫印記、免疫組化和免疫熒光等技術(shù)在LX-2細(xì)胞模型、體外分離培養(yǎng)的HSCs細(xì)胞模型、CCl4肝纖維化模型的肝組織和臨床血清標(biāo)本驗(yàn)證，證實(shí)是潛在的肝纖維化相關(guān)診斷標(biāo)志物，為進(jìn)一步的規(guī)模化臨床驗(yàn)證奠定了基礎(chǔ)。另外，我們通過siRNA干擾和特異抑制劑的干預(yù)，，針對(duì)轉(zhuǎn)錄因子STAT1在HSCs中的作用做了進(jìn)一步驗(yàn)證，表明STAT1是肝纖維化恢復(fù)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。 本研究利用SILAC體內(nèi)標(biāo)記結(jié)合LTQ-FT質(zhì)譜技術(shù)探究HSCs的恢復(fù)期和活化期細(xì)胞蛋白質(zhì)組和分泌蛋白質(zhì)組的定量差異，發(fā)現(xiàn)了恢復(fù)組特異的生物功能和信號(hào)途徑，實(shí)現(xiàn)潛在肝纖維化標(biāo)志蛋白的高通量發(fā)掘，并初步驗(yàn)證了肝纖維化臨床診斷的候選標(biāo)志物，發(fā)掘抗纖維化藥物有效作用靶點(diǎn)，從而為肝纖維化的診斷、治療和預(yù)后判斷提供指標(biāo)。
[Abstract]:Hepatic stellate cell (HSCs) is the main source of hepatic fibrosis effector cells (MFs).Clinical and experimental studies have found that the reversal and recovery of hepatic fibrosis is accompanied by the clearance of activated HSCs.Among the four known scavenging methods, apoptosis, immune clearance and senescence are mainly to reduce the number of activated HSCs, while phenotypic reversal can induce activated HSCs to return to non-activated state or even static phenotype.Understanding the transformation mechanism of hepatic stellate cells in injury can provide evidence for elucidating the mechanism of hepatic fibrosis and treating hepatic fibrosis.In order to understand the molecular mechanism of phenotypic reversal of activated HSCs, the cellular differential proteins and secretory differential proteins of human hepatic stellate cells were detected by SILAC and LTQ-FT.1347 quantitative cellular proteins and 784 quantitative secretory proteins were obtained by MaxQuant software.鍦ㄧ粏鑳?yōu)铔嬬櫧璐ňl勪腑閴村畾鍒

本文編號(hào)：1711880