發(fā)布時間：2018-03-21 06:34

  本文選題：丙型肝炎病毒　切入點：核心蛋白　出處：《南華大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的： 研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)1b基因型核心蛋白(Core)與非結構蛋白4B(Nonstructural protein4B,NS4B)對HepG2細胞凋亡的影響，以初步探索HCV1b基因型Core、NS4B與HepG2細胞凋亡的關系及其可能的相關機制。 方法： 利用脂質體介導將HCV1b基因型Core與NS4B的重組質粒pcDNA3.1(-)-Core、pcDNA3.1(-)-NS4B分別瞬時轉染HepG2細胞，同時以轉染空載體pcDNA3.1(-)和未轉染的HepG2細胞作對照(四組細胞分別命名為：pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組、pcDNA3.1(-)組及空白對照組)；轉染48h后，用RT-PCR及Western Blot檢測轉染細胞中Core與NS4B mRNA及蛋白的表達；并在有無TNF-α的因素下，MTT法檢測各組細胞的生長情況，觀察Core與NS4B對HepG2細胞生長的影響；利用流式細胞術檢測各組細胞的凋亡情況；運用RT-PCR及Western Blot檢測各組細胞中活化型Caspase-3及XIAP mRNA及蛋白的相對表達水平。 結果： 1.重組質粒pcDNA3.1(-)-Core、pcDNA3.1(-)-NS4B分別瞬時轉染HepG2細胞，RT-PCR及Western Blot檢測到細胞內(nèi)成功表達HCV Core、NS4B mRNA及蛋白。 2.RT-PCR及Western Blot檢測到未用TNF-α處理的pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組HepG2細胞的活化型Caspase-3的mRNA及蛋白的相對表達量均低于pcDNA3.1(-)組及空白對照組(p0.01)，XIAP的mRNA及蛋白的相對表達量均高于pcDNA3.1(-)組及空白對照組(p0.01)；用TNF-α處理的pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組HepG2細胞的活化型Caspase-3的mRNA及蛋白的相對表達量均高于pcDNA3.1(-)組及空白對照組(p0.01)，XIAP的mRNA及蛋白相對表達量均低于pcDNA3.1(-)組及空白對照組(p0.01)；與未使用TNF-α處理的四組細胞相比，用TNF-α處理的四組細胞的活化型Caspase-3的mRNA及蛋白的相對表達量明顯升高(p0.01)，且pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組細胞的XIAP的mRNA及蛋白相對表達量減少(p0.01)，pcDNA3.1(-)組及空白對照組細胞的XIAP的mRNA及蛋白的相對表達量增加(p0.01)。其余組間的細胞的mRNA及蛋白的相對表達量相比較均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 3.MTT法檢測到轉染后1~5天，pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組HepG2細胞的死亡率均小于pcDNA3.1(-)組與空白對照組(p0.01)；用TNF-α處理的pcDNA3.1(-)-Core組、 pcDNA3.1(-)-NS4B組HepG2細胞的死亡率均大于pcDNA3.1(-)組與空白對照組(p0.01)；與未使用TNF-α處理的四組細胞相比，用TNF-α處理的四組細胞的死亡率明顯增加(p0.01)。其余組間的細胞死亡率相比較均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 4.流式細胞術檢測到pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組HepG2細胞凋亡率均低于pcDNA3.1(-)組及空白對照組(p0.01)；用TNF-α處理的pcDNA3.1(-)-Core組、 pcDNA3.1(-)-NS4B組HepG2細胞的凋亡率均高于pcDNA3.1(-)組與空白對照組(p0.01)；與未使用TNF-α處理的四組細胞相比，用TNF-α處理的四組細胞的凋亡率明顯升高(p0.01)。其余組間的細胞凋亡率相比較均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結論： 1.HCV1b基因型Core與NS4B蛋白能下調(diào)HepG2細胞的活化型Caspase-3的表達，上調(diào)XIAP的表達。 2.在TNF-α誘導下，HCV1b基因型Core與NS4B蛋白能上調(diào)HepG2細胞的活化型Caspase-3的表達，下調(diào)XIAP的表達，，從而促進TNF-α誘導的細胞凋亡。
[Abstract]:Objective:
Study of hepatitis C virus (hepatitis C, virus, HCV) genotype 1b core protein (Core) and non structural protein 4B (Nonstructural protein4B NS4B) on the apoptosis of HepG2 cells, to explore the genotype of HCV1b Core, the relationship between NS4B and apoptosis of HepG2 cells and its possible mechanism.
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本文編號：1642672