本文選題：細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原-4　切入點(diǎn)：葡聚糖硫酸鈉　出處：《武漢大學(xué)》2014年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：研究CTLA-4單克隆抗體是否影響葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)的小鼠急性結(jié)腸炎,同時(shí)從Th17和Treg細(xì)胞的角度探討阻斷CTLA-4影響腸炎的機(jī)制。 方法：采用3%葡聚糖硫酸鈉(分子量36000-50000)給予6至8周雄性C57BL/6小鼠7日自由飲用,構(gòu)建小鼠結(jié)腸炎模型,并通過(guò)測(cè)定腸粘膜抽提mRNA相對(duì)表達(dá)和免疫組化方法研究該模型結(jié)腸粘膜組織Th17和Treg相關(guān)的炎癥細(xì)胞因子的改變情況。再將喂飼3%葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)的急性結(jié)腸炎小鼠分為兩組,干預(yù)組每日腹腔注射CTLA-4單克隆抗體200ug,對(duì)照組腹腔注射同批次該抗體的同型對(duì)照IgG200ug。通過(guò)疾病活動(dòng)指數(shù)、結(jié)腸炎癥大體評(píng)分、組織學(xué)評(píng)分和腸組織髓過(guò)氧化物酶活性測(cè)定判斷阻斷CTLA-4對(duì)腸炎程度是否有改變。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)腸系膜淋巴結(jié)Th17和Treg細(xì)胞比例的改變情況。通過(guò)熒光定量法和western blot分別在mRNA和蛋白水平檢測(cè)Th17和Treg相關(guān)炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)改變情況,并利用免疫組化方法觀察IL-17A和STAT-3在結(jié)腸組織的表達(dá)情況。 結(jié)果：3%葡聚糖硫酸鈉喂飼C57BL/6小鼠7天可成功構(gòu)建小鼠急性結(jié)腸炎模型,造模結(jié)束時(shí)其疾病活動(dòng)指數(shù)、結(jié)腸大體評(píng)分、組織學(xué)評(píng)分和腸組織髓過(guò)氧化物酶活性均顯著高于正常對(duì)照組小鼠(p0.05),同時(shí)模型組結(jié)腸粘膜TNF-α IL-17A、 RORγt、 Foxp3和STAT-3表達(dá)均增高(p0.05),而TGF-β表達(dá)降低(p0.05)。腹腔注射CTLA-4單克隆抗體可減輕3%葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎癥,造模結(jié)束時(shí)疾病活動(dòng)指數(shù)、結(jié)腸大體評(píng)分、組織學(xué)評(píng)分和腸組織髓過(guò)氧化物酶活性均低于注射IgG的對(duì)照組小鼠(p0.05)。此外,與IgG對(duì)照組相比,單抗干預(yù)組腸系膜淋巴結(jié)Th17比例降低,而Treg t匕例增高(p0.05)；腸粘膜TNF-α IL-17A、 RORyt mRNA相對(duì)表達(dá)降低(p0.05),而TGF-β Foxp3和STAT-3表達(dá)增高(p0.05)。腸粘膜JAK-2、 RORγt和IL-17A蛋白表達(dá)降低(p0.05),而Foxp3、 STAT-3、 p-STAT-3表達(dá)增高(p0.05)。 結(jié)論：3%葡聚糖硫酸鈉給予C57BL/6小鼠自由飲用7日可成功構(gòu)建急性結(jié)腸炎小鼠模型。腹腔注射CTLA-4單克隆抗體可減輕該模型腸炎程度并改變Thl7-Treg細(xì)胞平衡,導(dǎo)致腸炎小鼠體內(nèi)Th17應(yīng)答降低,Treg應(yīng)答提高。CTLA-4單克隆抗體可作為潛在治療結(jié)腸炎的藥物。
[Abstract]:Aim: to investigate whether CTLA-4 monoclonal antibody affects acute colitis induced by sodium dextran sulfate in mice, and to explore the mechanism of blocking CTLA-4 from the point of view of Th17 and Treg cells. Methods: 3% sodium dextran sulfate (molecular weight 36000-50000) was given to male C57BL / 6 mice for 6 to 8 weeks in 7th to establish colitis model. The changes of inflammatory cytokines related to Th17 and Treg in colonic mucosa of the model were studied by measuring the relative expression of mRNA and immunohistochemical method. The mice fed with sodium dextran sulfate 3% were divided into two groups. The intervention group was intraperitoneally injected with CTLA-4 monoclonal antibody 200ugg daily, while the control group was intraperitoneally injected with the same type of CTLA-4 antibody. The gross score of colitis was measured by disease activity index. Histological score and myeloperoxidase activity of intestinal tissue were used to determine whether blocking CTLA-4 changed the degree of enteritis. Flow cytometry was used to detect the change of Th17 and Treg cell ratio in mesenteric lymph nodes. Fluorescence quantitative method was used to detect the change of the ratio of Th17 and Treg cells in mesenteric lymph nodes. And western blot to detect the expression of Th17 and Treg related inflammatory cytokines at the mRNA and protein levels, respectively. The expression of IL-17A and STAT-3 in colon tissue was observed by immunohistochemical method. Results the acute colitis model was successfully established in C57BL / 6 mice fed with 3% sodium dextran sulfate for 7 days. The disease activity index and colonic gross score were measured at the end of the model. Histological score and myeloperoxidase activity in intestinal tissue were significantly higher than those in normal control mice, and the expressions of TNF- 偽 IL-17A, ROR 緯 t, Foxp3 and STAT-3 in colonic mucosa of model group were significantly higher than those in control group, while the expression of TGF- 尾 was lower than that of control group (P 0.05). Intraperitoneal injection of CTLA-4 monoclonal antibody could decrease the expression of TNF- 偽 IL-17A, ROR 緯 t, Foxp3 and STAT-3. Light 3% sodium dextran sulfate induced colitis in mice, The disease activity index, colonic gross score, histological score and intestinal myeloperoxidase activity at the end of the model were lower than those in the control group (P 0.05). In addition, compared with the IgG control group, the ratio of mesenteric lymph node Th17 in the monoclonal antibody intervention group was lower than that in the IgG control group. The expression of TNF- 偽 IL-17A, RORyt mRNA in intestinal mucosa decreased p0.05A, while the expression of TGF- 尾 Foxp3 and STAT-3 increased. The expression of JAK-2, ROR 緯 t and IL-17A in intestinal mucosa decreased p0.05, while Foxp3, STAT-3 and p-STAT-3 increased. Conclusion the mouse model of acute colitis can be successfully established by giving sodium dextran sulfate 3% to C57BL / 6 mice for free drinking on 7th. Intraperitoneal injection of CTLA-4 monoclonal antibody can reduce the degree of enteritis and change the balance of Thl7-Treg cells in the model. The Th17 response in mice with colitis was decreased and the response of Treg was increased. CTLA-4 monoclonal antibody could be used as a potential therapy for colitis.
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R574.62

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本文編號(hào)：1618900