本文選題：HEV　切入點：腦　出處：《中國農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目前關(guān)于HEV感染引發(fā)神經(jīng)功能障礙比如腦炎、腦膜炎、脊髓炎和格林巴利綜合癥等的報道越來越多,為揭示戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus,HEV)感染引發(fā)中樞神經(jīng)功能障礙的致病機(jī)制,本研究利用豬源四型HEV感染沙鼠及兔動物模型,采用RT-nPCR、real-timeqPCR、免疫組織化學(xué)、組織病理學(xué)和超微結(jié)構(gòu)病理學(xué)、Transwell小室試驗、western-blot等方法,對HEV在中樞神經(jīng)組織中復(fù)制、抗原分布和HEV感染引發(fā)腦和脊髓組織病理損傷以及相關(guān)機(jī)制進(jìn)行觀察研究;同時結(jié)合HEV感染人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞體外實驗,對HEV穿過血腦屏障(Blood-brain-barrier,BBB)以及引發(fā)血腦屏障結(jié)構(gòu)損傷的機(jī)制進(jìn)行了深入觀察分析。研究結(jié)果如下:1.通過腹腔注射途徑給沙鼠接種HEV后,在急性感染期可在腦和脊髓組織中檢測到HEV正鏈及其復(fù)制中間產(chǎn)物負(fù)鏈RNA;通過real-time qPCR檢測到脊髓中的病毒載量高于腦組織;免疫組織化學(xué)觀察結(jié)果發(fā)現(xiàn)HEVORF2抗原陽性信號主要分布于血管周圍區(qū)域、脈絡(luò)叢區(qū)、室管膜上皮以及一些神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞胞漿內(nèi);組織病理學(xué)觀察見腦和脊髓組織中血管周圍、脈絡(luò)叢區(qū)以及室管膜下方有淋巴細(xì)胞浸潤,小膠質(zhì)細(xì)胞彌漫性增生,散在神經(jīng)元變性壞死變化;超微病理學(xué)觀察結(jié)果顯示腦及脊髓細(xì)胞胞漿基質(zhì)減少,細(xì)胞器數(shù)量減少,線粒體腫脹變圓,線粒體嵴斷裂、數(shù)量減少,神經(jīng)纖維髓鞘變性,毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹,血管壁結(jié)構(gòu)紊亂層次不清,內(nèi)皮細(xì)胞之間連接復(fù)合物結(jié)構(gòu)缺失等。2.通過腹腔注射和灌喂兩種途徑給兔感染HEV后,僅在腹腔注射組中樞神經(jīng)組織中檢測到HEV抗原,表明與腹腔注射相比,糞口途徑傳播不易引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染HEV;免疫組織化學(xué)和組織病理學(xué)觀察HEVORF2蛋白陽性信號分布和腦、脊髓的組織病理損傷以及熒光定量PCR結(jié)果與HEV感染沙鼠的結(jié)果基本一致。3.HEV感染沙鼠試驗及HEV接種腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞體外試驗均證實,HEV感染導(dǎo)致了腦、脊髓微血管內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接相關(guān)蛋白的表達(dá)量顯著減少(P0.05或P0.01),以致腦、脊髓血管內(nèi)皮的通透性增加,HEV可以穿過血腦屏障侵入腦、脊髓實質(zhì)中。HEV接種腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞Transwell小室實驗結(jié)果顯示,血管內(nèi)皮細(xì)胞對于HEV的內(nèi)吞及轉(zhuǎn)胞吞作用可以被網(wǎng)格蛋白抑制劑所抑制。并且western-blot分析顯示接種HEV的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞中ATP5A1表達(dá)量減少而NOX4表達(dá)量增加。4.通過免疫組織化學(xué)方法檢測到感染HEV沙鼠腦、脊髓組織中小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞增生,P物質(zhì)、TNF-α、IL-1β和VIP表達(dá)量明顯增高(P0.05或P0.01);此外,通過western-blot方法檢測出感染HEV沙鼠的腦組織中線粒體凋亡通路相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-9和Caspase-3表達(dá)量也明顯增多。這些成分的變化均參與了 HEV感染造成腦和脊髓組織損傷的過程。以上研究結(jié)果顯示,HEV可能通過網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進(jìn)入血管內(nèi)皮細(xì)胞,影響ATP合成以及引發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激,導(dǎo)致血腦屏障損傷,并通過跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運以及細(xì)胞旁途徑穿過血腦屏障結(jié)構(gòu)從而感染中樞神經(jīng)實質(zhì)組織,引起小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞活化增殖,釋放促炎因子TNF-α和IL-1β等,引發(fā)腦和脊髓組織炎癥反應(yīng)以及細(xì)胞線粒體凋亡途徑激活,導(dǎo)致腦和脊髓組織損傷。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R512.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1596933