本文關(guān)鍵詞： 經(jīng)血 間充質(zhì)干細胞 基因表達 肝損傷 肝樣細胞 移植　出處：《浙江大學》2014年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：干細胞研究技術(shù)及干細胞的臨床研究已成為國內(nèi)外競相爭取的科技制高點,國內(nèi)外許多干細胞研究機構(gòu)在干細胞基礎(chǔ)研究和動物試驗領(lǐng)域都已經(jīng)具備比較成熟的體系和理論依據(jù)。尋找一種適合臨床使用的種質(zhì)細胞成為亟需被解決的問題。經(jīng)血來源宮內(nèi)膜干細胞(Menstrual Blood-derived stem cells, MenSCs)由于其來源廣泛、取材簡單、增殖能力強、分化潛能大等優(yōu)點成為近年來研究較多的一種成體干細胞,但系統(tǒng)地研究MenSCs的生物學特性及其作為臨床研究用種質(zhì)細胞區(qū)別于其他成體干細胞的特征鮮有報道。本研究第一部分主要對MenSCs的生物學特性進行了較為系統(tǒng)的探討。研究證實了不同培養(yǎng)體系對MenSCs具有較大的影響,確立了一種適合MenSCs體外擴增的培養(yǎng)體系。同時,研究探討了不同凍存時間復蘇細胞的特性差異,確立了一種適合長期凍存的體系,這為臨床大批量細胞的制備儲存奠定了基礎(chǔ)。與已有對骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)的部分研究不同,年齡因素對MenSCs的影響并不明顯,僅表現(xiàn)為體外長期傳代能力年齡大的供體整體呈現(xiàn)較差的趨勢,這一點提升了自體MenSCs移植治療疾病的可行性。但基因表達的數(shù)據(jù)表明,體外傳代次數(shù)越多,細胞的基因表達也發(fā)生了變化,主要表現(xiàn)在與細胞增殖、免疫相關(guān)途徑方面。而不同年齡的供體細胞,其基因表達也存在差異,表現(xiàn)在與細胞增殖、腫瘤形成及細胞功能相關(guān)的基因。本部分研究確定了MenSCs符合國際細胞療協(xié)會(International Society for CellularTherapy, ISCT)對間充質(zhì)干細胞(Mesenchymal stem cells、MSCs)制定的最低標準。進一步,本研究第二部分圍繞MSCs,對人體不同來源的MSCs進行了對比分析。結(jié)果表明,不同來源的MSCs無論是在體外的生物學特性還是基因表達均存在較大差異。臍帶間充質(zhì)干細胞(Umbilical cord-derived mesenchymal stem cells, UCMSCs)的倍增時間更短,且生長沒有密度抑制現(xiàn)象,而BMSCs和MenSCs的密度抑制明顯；MenSCs的長期傳代能力表現(xiàn)最強,顯示其具有更強的增殖能力。對同一供體不同來源MSCs進行表達芯片的分析,結(jié)果顯示相比臍帶、骨髓,經(jīng)血來源宮內(nèi)膜干細胞表達的差異基因涉及的生物途徑主要在細胞粘附、細胞周期、細胞發(fā)育、炎癥反應、信號轉(zhuǎn)導方面,主要富集在TGF-β、MAPK、P53、Ⅱ型糖尿病、細胞因子及受體、胰島素信號等與細胞功能相關(guān)的一些通路。這為后續(xù)研究宮內(nèi)膜干細胞的特異性優(yōu)勢奠定了基礎(chǔ)。最后,本研究第三部分以急性肝損傷作為疾病模型,探討MenSCs的臨床應用潛力。體外實驗表明,MenSCs能夠有效被誘導為有功能的肝樣細胞(Hepatocyte-like cells, HLCs)。進一步動物體內(nèi)移植實驗顯示,移植細胞能夠歸巢到達損傷部位,其中移植的MenSCs在體內(nèi)微環(huán)境的影響下能夠自發(fā)誘導為肝樣細胞。體內(nèi)移植實驗中,移植的HLCs能夠有效改變損傷小鼠的肝功指標,而直接移植未經(jīng)誘導MenSCs的小鼠則沒有明顯變化。這為臨床細胞治療的細胞種類及具體的移植方式、細胞數(shù)量、治療效率提供了參考依據(jù),同時也提出了新的問題。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R575

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