本文關(guān)鍵詞： 結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)腸癌 不典型增生 黏膜型肥大細(xì)胞 肥大細(xì)胞蛋白酶-1 髓源性免疫抑制細(xì)胞　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2014年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：炎癥是腫瘤的重要組成部分,大約四分之一的腫瘤起源于慢性炎癥[Grivennikov et al.,2010],例如炎性腸病(潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病)相關(guān)結(jié)腸癌[Mantovani et al.,2008]。慢性炎癥微環(huán)境中浸潤(rùn)的大量炎性細(xì)胞在腫瘤惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中起著重要作用,其中包含大量固有免疫細(xì)胞,如巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞等。參與一線防御反應(yīng)的肥大細(xì)胞的促瘤作用已在人類(lèi)和小鼠結(jié)腸癌中得到證實(shí),然而人和小鼠肥大細(xì)胞至少存在兩個(gè)亞群,目前的研究主要關(guān)注結(jié)締組織型肥大細(xì)胞(CTMC),而較少關(guān)注黏膜型肥大細(xì)胞(MMC)。本研究通過(guò)藥物阻斷黏膜型肥大細(xì)胞活化,探索黏膜型肥大細(xì)胞在結(jié)腸炎向結(jié)腸癌惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程的作用,并探討潛在的機(jī)制。本課題使用氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸鈉結(jié)腸癌模型,留取AD1、AD2、AD3期升、降結(jié)腸組織及同齡小鼠全結(jié)腸組織。前期mRNA表達(dá)的組織芯片分析發(fā)現(xiàn),結(jié)腸炎向結(jié)腸癌發(fā)展過(guò)程中,肥大細(xì)胞相關(guān)蛋白酶(MCPs)轉(zhuǎn)錄豐度逐漸增加,AD3期達(dá)最高,其中MMC特異性蛋白酶(mMCP-1, mMCP-2)增加幅度最大；qRT-PCR檢測(cè)證實(shí)了組織芯片結(jié)果；甲苯胺藍(lán)染色檢測(cè)不同時(shí)期肥大細(xì)胞的變化,mMCP-1免疫組化染色分析MMC數(shù)目的變化。以上數(shù)據(jù)提示結(jié)腸炎向結(jié)腸癌發(fā)展過(guò)程中,結(jié)腸組織MMC數(shù)量逐漸增多。隨后我們使用藥物阻斷肥大細(xì)胞,選取主要作用于MMC的色甘酸二鈉(DSCG)及特異性針對(duì)CTMC的酮替芬(Ketotifen),在DSS間歇期灌胃給藥2周,至AD3期,并評(píng)估結(jié)腸腫瘤發(fā)展情況。炎癥發(fā)生前給予DSCG阻斷肥大細(xì)胞活化,在5個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)處置小鼠,收集標(biāo)本待檢測(cè),并在第14周評(píng)估MMC阻斷情況：甲苯胺藍(lán)染色檢測(cè)結(jié)腸組織肥大細(xì)胞數(shù)目、免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)腸組織MMC數(shù)目、ELISA檢測(cè)血清mMCP-1水平、qRT-PCR檢測(cè)結(jié)腸組織mMCPs轉(zhuǎn)錄水平；隨后評(píng)估結(jié)腸腫瘤發(fā)展情況。同時(shí)探討了MMC發(fā)揮作用的潛在機(jī)制,分析不同時(shí)間點(diǎn)血清mMCP-1的水平及結(jié)腸上皮內(nèi)細(xì)胞中CD11b+Gr-1+ MDSCs數(shù)量的變化。結(jié)腸上皮不典型增生期是結(jié)腸炎向結(jié)腸癌惡性轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵時(shí)期,基于以上研究,我們于不典型增生期阻斷肥大細(xì)胞活化進(jìn)行治療,即在第10周給予AOM/DSS小鼠1周DSCG或3天Doxantrazole(非選擇性肥大細(xì)胞膜穩(wěn)定劑),并設(shè)置相應(yīng)溶劑對(duì)照組。評(píng)估肥大細(xì)胞阻斷情況：甲苯氨藍(lán)染色檢測(cè)肥大細(xì)胞數(shù)目,ELISA檢測(cè)血清及結(jié)腸組織間液mMCP-1水平,隨后評(píng)估結(jié)腸腫瘤情況。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,mMCP-1可能與CD11b+Gr-1+ MDSCs的募集有重要關(guān)聯(lián)。健康小鼠腹腔注射不同濃度mMCP-1及生理鹽水,24 hr后行腹腔盥洗收獲細(xì)胞,流式染色分析CD11b+Gr-1+細(xì)胞比例的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：從AD1到AD3期,結(jié)腸組織MMC數(shù)目逐漸增加,AD3期最多。AOM注射兩天之后,損傷結(jié)腸組織肥大細(xì)胞迅速募集。炎癥發(fā)生前給DSCG可顯著阻斷黏膜型肥大細(xì)胞：黏膜型肥大細(xì)胞數(shù)目減少；血清mMCP-1水平顯著下降；mMCP-l和mMCP-2轉(zhuǎn)錄水平顯著下調(diào),而結(jié)締組織型肥大細(xì)胞相關(guān)基因(Cpa3,mMCP-4, mMCP-6)轉(zhuǎn)錄水平則無(wú)顯著差異；同時(shí)結(jié)腸腫瘤數(shù)目、大小及負(fù)荷均顯著減少,且結(jié)腸的縮短程度較Sham組有明顯改善。結(jié)腸上皮不典型增生期藥物阻斷MMC情況：治療組肥大細(xì)胞數(shù)目明顯較其溶劑對(duì)照組減少；治療組血清及結(jié)腸組織間液mMCP-1水平均明顯下降；治療組腫瘤數(shù)目、結(jié)腸重量顯著減少。15ng/ml mMCP-1可顯著增加腹腔CD11b+Gr-1+細(xì)胞的募集。第14周DSCG組小鼠結(jié)腸組織、脾臟及腸系膜淋巴結(jié)中CD11b+Gr-1+MDSCs的聚集較Sham組顯著；結(jié)腸炎向結(jié)腸癌發(fā)展不同階段CD11b+Gr-1+細(xì)胞的變化趨勢(shì)與mMCP-1的水平一致,均較Sham組降低,且在第14周顯著降低。以上結(jié)果表明,結(jié)腸炎向結(jié)腸癌發(fā)展過(guò)程中,黏膜型肥大細(xì)胞可能通過(guò)活化釋放mMCP-1募集CD11b+Gr-1+MDSCs到結(jié)腸損傷部位,促進(jìn)惡性轉(zhuǎn)化。
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【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R735.35;R574.62

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Jessica K Dyson;Matthew D Rutter;;Colorectal cancer in inflammatory bowel disease:What is the real magnitude of the risk?[J];World Journal of Gastroenterology;2012年29期

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本文編號(hào)：1501656